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    慢性鼻-鼻竇炎鼻息肉內(nèi)鏡手術前后組織中血管內(nèi)皮生長因子和黏蛋白MUC5AC的表達情況

    2017-01-12 02:32:54許航宇舒海榮宋建新
    中國內(nèi)鏡雜志 2016年12期
    關鍵詞:鼻息肉酸性粒細胞

    許航宇,舒海榮,宋建新

    (浙江省臺州市中心醫(yī)院 耳鼻喉科,浙江 臺州 318000)

    慢性鼻-鼻竇炎鼻息肉內(nèi)鏡手術前后組織中血管內(nèi)皮生長因子和黏蛋白MUC5AC的表達情況

    許航宇,舒海榮,宋建新

    (浙江省臺州市中心醫(yī)院 耳鼻喉科,浙江 臺州 318000)

    目的 探討慢性鼻-鼻竇炎(CRS)鼻息肉內(nèi)鏡手術前后鼻黏膜組織中血管內(nèi)皮生長因子 (VEGF)和黏蛋白MUC5AC的表達情況。方法選擇2012年1月-2015年1月臺州市中心醫(yī)院CRS鼻息肉內(nèi)鏡手術患者75例作為鼻息肉組和鼻骨骨折或鼻出血患者75例作為對照組,鼻息肉患者取術前鼻息肉標本、術后6周上頜竇口黏膜標本、對照組取下鼻甲上緣黏膜標本進行HE染色觀察嗜酸性粒細胞計數(shù)、免疫組化染色測定VEGF和黏蛋白MUC5AC的表達情況。結果鼻息肉術前組和鼻息肉術后組標本中嗜酸性粒細胞均高于對照組(P<0.05),鼻息肉術后組鼻黏膜嗜酸性粒細胞低于鼻息肉術前組(P<0.05)。鼻息肉術前組和鼻息肉術后組標本中VEGF和黏蛋白MUC5AC陽性表達面積百分率均高于對照組(P<0.05),鼻息肉術后組鼻黏膜VEGF和黏蛋白MUC5AC陽性表達面積百分率低于鼻息肉術前組(P<0.05)。結論嗜酸性粒細胞計數(shù)和VEGF、黏蛋白MUC5AC表達水平在CRS鼻息肉內(nèi)鏡術前鼻黏膜組織中較高,術后6周時明顯降低,VEGF和黏蛋白MUC5AC可能參與術后鼻黏膜的修復。

    慢性鼻-鼻竇炎;鼻內(nèi)鏡;鼻息肉;血管內(nèi)皮生長因子;黏蛋白MUC5AC

    慢性鼻-鼻竇炎(chronic rhinitis sinusitis,CRS)鼻息肉復發(fā)率比較高,發(fā)病原因尚不十分清楚,鼻內(nèi)鏡手術治療為近年來鼻息肉的治療方法之一,隨著功能性內(nèi)鏡鼻竇手術治療技術的不斷成熟,鼻息肉的治愈率顯著提高,但術后仍有部分患者發(fā)生復發(fā)[1]。鼻內(nèi)鏡術后的轉(zhuǎn)歸過程比較漫長,多種細胞因子和生長因子影響術后黏膜上皮的修復過程[2]。血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)為促血管因子,是最強的血管通透因子,在血管再生和組織修復過程中發(fā)揮重要作用[3-4];CRS的特征性病變?yōu)轲ひ哼^度分泌,MUC5AC為呼吸道黏蛋白,主要由腺體細胞產(chǎn)生[5-6],為鼻竇黏液的主要成分,在CRS鼻竇黏膜中表達增加,在CRS鼻息肉中,這種情況更加顯著。本文對CRS鼻息肉內(nèi)鏡手術前后鼻黏膜組織中VEGF和黏蛋白MUC5AC進行研究,探討CRS鼻息肉內(nèi)鏡手術前后鼻黏膜組織中VEGF和黏蛋白MUC5AC的變化情況。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    選擇2012年1月-2015年1月浙江省臺州市中心醫(yī)院耳鼻喉科CRS鼻息肉內(nèi)鏡手術患者75例作為鼻息肉組和鼻骨骨折或鼻出血患者75例作為對照組,鼻息肉組患者年齡(44.23±12.21)歲,男39例,女36例;對照組年齡(42.12±10.35)歲,男37例,女38例。本研究通過醫(yī)院倫理委員會討論認可。

    1.1.1 納入標準鼻息肉組患者均為首次手術患者,術前1個月內(nèi)未接受抗生素和激素治療,無急性呼吸道感染,無哮喘、支氣管擴張、變應性鼻炎和自身免疫性疾病,術后隨訪期間未應用激素藥物;對照組患者無哮喘、變應性鼻炎、自身免疫性疾病等病史,術后1個月內(nèi)無急性呼吸道感染和激素藥物應用史。

    1.1.2 標本收集與保存鼻息肉組患者術中行鼻息肉切除術,取鼻息肉組織標本,生理鹽水沖洗,干紗布吸干水分,放入多聚甲醛中固定,24 h后轉(zhuǎn)入磷酸緩沖鹽溶液(phosphate buffer saline,PBS)中作為鼻息肉術前組;術后門診隨訪,生理鹽水沖洗鼻腔,清理粘連、囊泡和肉芽組織,術后6周復查時沖洗鼻腔鼻竇后,鼻內(nèi)鏡下鉗夾肉芽組織、囊泡和(或)息肉樣黏膜組織作為鼻息肉術后組;對照組取下鼻甲上緣黏膜標本。鼻息肉組術后標本和對照組標本的保存方法同鼻息肉組術前標本的保存方法。

    1.2 主要試劑

    VEGF兔抗人單克隆抗體(美國sigma公司),MUC5AC鼠抗人單克隆抗體(美國sigma公司),SABC免疫組化試劑盒(美國Santa cuze公司)等。

    1.3 實驗方法

    1.3.1 HEE 染色 將3組標本進行石蠟包埋,切片機上切成5μm厚切片,脫臘脫水后常規(guī)進行HE染色,觀察嗜酸性粒細胞情況,嗜酸性粒細胞的細胞漿出現(xiàn)粉紅色顆粒,細胞質(zhì)比較豐富,細胞核為雙核或者分葉核,高倍顯微鏡下計數(shù)嗜酸性粒細胞數(shù)量,取8個高倍視野進行計數(shù),取平均值。

    1.3.2 免疫組化染色 采用免疫組化染色(SP染色)觀察3組標本VEGF和黏蛋白MUC5AC的表達情況,VEGF測定以VEGF兔抗人單克隆抗體為一抗,黏蛋白MUC5AC測定以MUC5AC鼠抗人單克隆抗體為一抗,按照免疫組化染色試劑盒說明書進行測定。細胞漿或者細胞膜出現(xiàn)棕黃色染色為VEGF陽性細胞或黏蛋白MUC5AC陽性細胞,高倍顯微鏡下計算陽性細胞面積占總細胞面積的百分率,取8個區(qū)域進行觀察,取平均值。

    1.4 統(tǒng)計學方法

    采用SPSS 20.0軟件進行分析,計量資料用均數(shù)±標準差(±s)表示,3組均數(shù)比較采用方差分析,組內(nèi)兩兩比較采用LSD檢驗,取P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結果

    2.1 HE染色結果

    鼻息肉術前組鼻息肉標本上皮基底膜增厚形成透明膜層,上皮下組織水腫,杯狀細胞和腺體增生,腺體周圍和黏膜上皮下見大量嗜酸性細胞浸潤;鼻息肉術后組鼻黏膜組織輕度水腫,杯狀細胞和腺體增生減輕,嗜酸性細胞減少;對照組鼻黏膜無水腫,細胞排列整齊,見少量炎癥細胞。見圖1。

    圖1 3組標本HE染色 (×200)

    2.2 3組嗜酸性粒細胞浸潤情況

    鼻息肉術前組和鼻息肉術后組鼻黏膜嗜酸性粒細胞均高于對照組(P<0.05),鼻息肉術后組鼻黏膜嗜酸性粒細胞低于鼻息肉術前組(P<0.05)。見表1。

    2.3 3組標本組織中VEGF的表達情況

    細胞漿和細胞膜中出現(xiàn)棕黃色顆粒的細胞為VEGF陽性細胞(圖2)。鼻息肉術前組和鼻息肉術后組標本VEGF陽性表達面積百分率均高于對照組(P<0.05),鼻息肉術后組鼻黏膜VEGF陽性表達面積百分率低于鼻息肉術前組(P<0.05)。見表2。

    圖2 3組標本組織中VEGF的表達情況 (SP×400)

    2.4 3組標本組織中黏蛋白MUC5AC的表達情況

    棕黃色細胞為黏蛋白MUC5AC陽性細胞,黏蛋白MUC5AC陽性主要表達于上皮細胞的細胞膜和細胞漿中,在腺體細胞中無表達(圖3)。鼻息肉術前組和鼻息肉術后組標本中黏蛋白MUC5AC陽性表達面積百分率均高于對照組(P<0.05),鼻息肉術后組鼻黏膜黏蛋白MUC5AC陽性表達面積百分率低于鼻息肉術前組(P<0.05)。見表3。

    圖3 3組標本組織中黏蛋白MUC5AC的表達情況 (SP×200)

    表1 3組嗜酸性粒細胞浸潤情況 (±s)

    表1 3組嗜酸性粒細胞浸潤情況 (±s)

    注:1)與鼻息肉術后組比較,P<0.05;2)與對照組比較,P<0.05

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    表2 3組標本組織中VEGF的表達情況 (%,±s)

    表2 3組標本組織中VEGF的表達情況 (%,±s)

    注:1)與鼻息肉術后組比較,P<0.05;2)與對照組比較P<0.05

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    表3 3組標本組織中黏蛋白MUC5AC的表達情況 (%,±s)

    表3 3組標本組織中黏蛋白MUC5AC的表達情況 (%,±s)

    注:1)與鼻息肉術后組比較,P<0.05;2)與對照組比較,P<0.05

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    3 討論

    CRS鼻息肉功能性內(nèi)鏡鼻竇手術的目的主要為恢復CRS鼻竇黏膜的功能和形態(tài),手術治療為CRS鼻息肉治療的開始,術后為漫長的上皮再生恢復階段,術后黏膜的新生病變?yōu)楸容^常見且處理起來比較困難的問題,黏膜新生病變主要包括息肉再生、囊泡、肉芽和息肉樣黏膜水腫等,這些新生病變阻礙術后黏膜的上皮化,引起術腔閉塞或者引流道阻塞,鼻息肉復發(fā),復發(fā)的鼻息肉較原發(fā)鼻息肉處理更加困難[7-8]。白細胞的炎癥區(qū)域的聚集為炎癥性疾病的重要特征,鼻息肉的形成是一種復雜的炎癥反應過程,主要病理特征為嗜酸性粒細胞的浸潤[9]。本研究對CRS鼻息肉內(nèi)鏡手術前后鼻黏膜進行HE染色,結果發(fā)現(xiàn)CRS鼻息肉術前組鼻息肉標本上皮基底膜增厚形成透明膜層,上皮下組織水腫,杯狀細胞和腺體增生,腺體周圍和黏膜上皮下見大量嗜酸性細胞浸潤;術后鼻黏膜組織輕度水腫,杯狀細胞和腺體增生減輕,嗜酸性細胞減少;對照組鼻黏膜無水腫,細胞排列整齊,見少量炎癥細胞;CRS患者術前和術后鼻黏膜嗜酸性粒細胞均高于對照組,術后鼻黏膜嗜酸性粒細胞低于術前。表明鼻內(nèi)鏡手術能夠減輕CRS鼻息肉患者鼻腔炎癥反應,但術后6周時鼻腔炎癥反應仍然存在,嗜酸性粒細胞計數(shù)仍明顯高于對照組。

    VEGF為同型二聚體糖蛋白,和受體結合發(fā)揮作用,在正常成人組織中水平比較低,在鼻息肉組織中呈高表達,考慮VEGF在鼻息肉的發(fā)生發(fā)展中對鼻黏膜水腫的產(chǎn)生發(fā)揮重要作用。VEGF和受體結合后引起鈣內(nèi)流,刺激嗜酸性粒細胞遷移和增殖,引起三磷酸肌醇聚集,間質(zhì)膠原酶表達增加,形成新生血管[10]。鼻息肉中血管較少,但小血管和毛細血管的通透性高,且大部分毛細血管壁為有孔的,容易導致水腫的發(fā)生。VEGF在息肉的瘢痕形成和上皮損傷過程中均有較高的表達[11]。劉楠等[12]收集鼻內(nèi)鏡下CRS伴鼻息肉患者的鼻息肉進行研究,發(fā)現(xiàn)CRS鼻息肉組織中VEGF的表達水平明顯升高,認為VEGF可能參與鼻息肉的發(fā)生發(fā)展。本研究結果發(fā)現(xiàn)CRS鼻息肉患者術前和術后鼻黏膜VEGF陽性表達面積百分率均高于對照組,術后鼻黏膜VEGF陽性表達面積百分率低于術前。本研究結果和劉楠等[12]研究結果一致,發(fā)現(xiàn)CRS鼻息肉患者鼻黏膜中VEGF表達明顯升高,鼻內(nèi)鏡術后VEGF表達水平顯著下降,但仍高于對照組。

    CRS的基本病理變化為黏膜下腺體和杯狀細胞增生,引起鼻腔分泌黏液膿性鼻涕,鼻腔黏液的過度分泌機制比較復雜,呼吸道黏蛋白的主要成分為MUC5AC、MUC2以及MUC5B,主要由黏膜下腺體細胞產(chǎn)生,MUC5AC在CRS以及正常鼻腔黏膜中均有表達,MUC5AC為鼻竇黏液的主要成分之一,鼻息肉發(fā)生時出現(xiàn)MUC5AC表達上調(diào)[13-14]。羅慶等[15]發(fā)現(xiàn)CRS患者鼻黏膜中MUC5AC表達升高,表明CRS為高黏液性疾病。本研究結果發(fā)現(xiàn)CRS鼻息肉患者術前和術后鼻黏膜黏蛋白MUC5AC陽性表達面積百分率均高于對照組,術后鼻黏膜黏蛋白MUC5AC陽性表達面積百分率低于術前。本研究證實了CRS鼻息肉患者鼻黏膜中MUC5AC表達增加,術后6周時雖較術前降低,但仍高于對照組。

    綜上所述,鼻內(nèi)鏡術后6周是術腔黏膜上皮化的重要階段,黏膜上皮化仍沒有完成,VEGF和黏蛋白MUC5AC可能在CRS鼻息肉的發(fā)生發(fā)展以及病情變化中發(fā)揮重要作用,在術后隨訪過程中對出現(xiàn)的炎性肉芽、囊泡等阻礙術腔修復的情況進行及時處理,促進術后創(chuàng)面的愈合。

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    (吳靜 編輯)

    Expression of the VEGF and mucin MUC5AC in nasal mucosa before and after chronic rhinitis - sinusitis and nasal polyps -endoscopic sinus surgery

    Hang-yu Xu, Hai-rong Shu, Jian-xin Song
    (Department of Otolaryngology, Taizhou Central Hospital, Taizhou, Zhejiang 318000, China)

    ObjectiveTo investigate the expression of the vascular endothelial growth factor (VEGF) and mucin MUC5AC in nasal mucosa before and after chronic rhinitis - sinusitis and nasal polyps - endoscopic sinus surgery.Methods75 cases chronic rhinitis - sinusitis and nasal polyps - endoscopic sinus surgery patients were selected as nasal polyps group and 75 cases of nasal bone fracture or epistaxis patients as the control group from January 2012 to January 2015. Took the samples of nasal polyps before surgery and the maxillary sinus mucosa specimens after surgery six weeks of nasal polyps’ patients and on the edge of the inferior turbinate mucosa specimens of the control group to detect eosinophil count by HE staining, and detect the expression of VEGF and mucin MUC5AC by immunohistochemical staining.ResultsThe specimens eosinophils of preoperative nasal polyp group and postoperative nasal polyp group were higher than that of control group (P< 0.05), the nasal eosinophils of postoperative nasal polyp group was lower than that of preoperative nasal polyp group (P< 0.05). The expression of specimens VEGF and mucin MUC5AC area percentages in preoperative nasal polyp group and postoperative nasal polyp group were higher than that in control group (P< 0.05), the expression of nasal VEGF and mucin MUC5ACarea percentages in the postoperative nasal polyp group was lower than that of preoperative nasal polyp group (P<0.05). Conclusion Eosinophil count and the expression levels of VEGF and mucin MUC5AC of nasal mucosa in chronic rhinitis - sinusitis and nasal polyps - endoscopic sinus surgery preoperative are higher, and reduce at postoperative six weeks, VEGF and mucin MUC5AC may be involved nasal repair.

    chronic rhinitis - sinusitis; nasal endoscopy; nasal polyps; vascular endothelial growth factor; mucin MUC5AC

    R765.41

    A

    10.3969/j.issn.1007-1989.2016.12.014

    1007-1989(2016)12-0070-05

    2016-08-29

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