胃癌根治術后患者血循環(huán)腫瘤細胞的檢測及其意義

狄劍士，鄭桂麗，李夢巖，李鍇男，王寶成

胃癌根治術后患者血循環(huán)腫瘤細胞的檢測及其意義

狄劍士，鄭桂麗，李夢巖，李鍇男，王寶成

胃癌；循環(huán)腫瘤細胞；根治術后

胃癌目前仍是我國發(fā)病率和死亡率較高的惡性腫瘤之一，5年生存率僅為10%左右，其術后復發(fā)和轉移是死亡的主要原因［1］。 循環(huán)腫瘤細胞（circulating tumor cells，CTCs）是發(fā)生微轉移的必要步驟［2］，與腫瘤血液轉移有密切相關性，提示在常規(guī)的影像學診斷之前可能已有腫瘤微轉移灶的發(fā)生。2013年10月—2014年4月筆者利用免疫磁珠陰性富集法對60例胃癌患者術后外周血中的CTCs進行檢測，并討論CTCs與臨床分期的相關性。

1 資料與方法

1．1 一般資料60例胃癌首次根治術后未行化療患者。男37例，女23例；年齡36～83歲，中位年齡58歲。乳頭狀腺癌 14例，管狀腺癌 7例 ，黏液腺癌 4例，印戒細胞癌 6例 ，低分化腺癌17例，未分化癌12例。根據(jù)TNM分期分為Ⅰ期11例，Ⅱ期21例，Ⅲ期28例。

1．2 方法所有研究對象均采用真空采血管采集肘正中靜脈血3．2 ml（不含抗凝藥）于ACD抗凝管中。采用免疫磁珠富集技術分離CTCs，用熒光原位雜交和免疫熒光染色鑒別CTCs，在熒光顯微鏡下觀察并統(tǒng)計CTCs。判讀標準為DAPI+（單核），細胞核內FISH信號點＞2個，且無血源性白細胞表面抗原著色，即CD45-。外周血中CTCs計數(shù)＞2個／3．2ml定義為CTCs陽性。同時隨訪患者術后2年的病情變化。

1．3 統(tǒng)計學方法采用SPSS 17．0統(tǒng)計學軟件分析，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期各組間的CTCs陽性率、血液轉移比較，采用χ2分析，以P＜0．01為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 不同臨床分期胃癌患者術后CTCs檢測結果比較60例胃癌根治術患者外周血中CTCs陽性率為43．3%（26／60），分別為Ⅰ期9．1%（1／11），Ⅱ期為33．3．%（7／21），Ⅲ期為64．3．%（18／28），Ⅲ期陽性率與Ⅰ期、Ⅱ期相比較，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0．01）。見表1。

2.2 不同臨床分期胃癌患者術后2年復發(fā)轉移結果比較60例胃癌根治術外周血中CTCs陽性患者，Ⅰ期CTCs陽性患者2年內未轉移；Ⅱ期CTCs陽性患者6～12個月無轉移，12～24個月出現(xiàn)轉移4例，其中肝轉移2例，肝肺同時轉移1例，骨轉移1例；Ⅲ期CTCs陽性患者6～12個月內肝轉移1例，12～24個月出現(xiàn)轉移8例，其中肝臟轉移2例，肝、肺和骨同時轉移3例，骨轉移1例，肺和顱內轉移分別1例。轉移率Ⅲ期高于Ⅱ期和Ⅰ期，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0．01）（表2）。

表 1 不同臨床分期胃癌患者術后CTCs檢測結果的比較

表 2 不同臨床分期胃癌患者術后2年復發(fā)轉移結果的比較

3 討論

澳大利亞的Ashworth于1869年首次提出循環(huán)腫瘤細胞的概念，循環(huán)腫瘤細胞（CTCs）是指惡性腫瘤從原發(fā)灶和或轉移灶脫落進入血液循環(huán)的腫瘤細胞。CTCs來源于實體瘤，通過基因轉錄、蛋白修飾和細胞表型的改變增強其侵襲力，再經(jīng)過誘發(fā)新生血管生成或經(jīng)周圍血管系統(tǒng)進入循環(huán)系統(tǒng)，上皮間質轉化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）在此環(huán)節(jié)中發(fā)揮重要的作用［3］。進入血液循環(huán)的腫瘤細胞大部分發(fā)生凋亡或被機體自身免疫系統(tǒng)吞噬及血液的剪切作用而死亡，也可被抗腫瘤治療清除，僅有少數(shù)的CTCs能成活下來，形成新的轉移灶。所以發(fā)現(xiàn)CTCs并不能證明一定有轉移灶形成，根據(jù)估計，僅有0．1%的CTCs會形成轉移灶［4］。由于CTCs的檢測技術沒有取得突破性進展，所以其檢測并未在腫瘤的防治中發(fā)揮應有的作用。隨著CTCs檢測技術的不斷成熟，美國FDA于2014年批準了 BioTNT公司的Cellsearch系統(tǒng)在轉移性結直腸癌、乳腺癌和前列腺癌中的應用。由于相當一部分腫瘤患者術前已經(jīng)出現(xiàn)腫瘤微轉移灶，但常規(guī)傳統(tǒng)的影像學檢查無法發(fā)現(xiàn)，CTCs檢測有助于發(fā)現(xiàn)早期患者的微轉移灶，Sastre等［5］發(fā)現(xiàn)CTCs與直結腸癌的臨床分期相關，且能在早期的直結腸癌患者體內檢測到，提示檢測CTCs有助于早期發(fā)現(xiàn)腫瘤。由于CTCs在外周血中數(shù)量較少，所以從血液中分離富集CTCs是進行檢測的關鍵。目前用于CTCs的富集的方法主要有：梯度離心法、過濾法、免疫磁珠分選法。檢測方法主要有免疫細胞化學法、流式細胞檢測法、聚合酶鏈式反應核酸擴增法、光纖陣列掃描術、酶聯(lián)免疫斑點術、CTC芯片技術等。

該研究采用免疫磁珠陰性富集法進行富集，通過去除血漿，裂解紅細胞，利用表面包被磁珠的抗白細胞共同抗原的抗體去除白細胞，從而富集得到稀有細胞，最后進行免疫熒光染色在熒光顯微鏡下進行鑒定判讀。CTCs檢測有助于TNM分期［6］，但也有學者認為與TNM分期無關，而與胃癌淋巴結轉移、遠處轉移和復發(fā)密切相關［7］。本組60例應用上述方法檢測胃癌根治術患者外周血中CTCs陽性率為43．3%，Ⅲ期患者陽性率高于Ⅰ期、Ⅱ期 （P＜0．01），提示與腫瘤TNM分期密切相關。CTCs陽性患者出現(xiàn)遠處轉移機率明顯增加，CTCs陽性患者轉移率Ⅲ期高于Ⅱ期和Ⅰ期，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0．01），分期越晚，CTCs陽性患者遠處轉移的風險更高，說明CTCs檢出與胃癌的預后密切相關。因此對于原發(fā)性胃癌CTCs檢測對于早期預測轉移，TNM分期及預后評價具有重要意義。檢測CTCs可早于常規(guī)影像學檢查評估腫瘤復發(fā)風險，判斷患者預后，指導術后輔助化療和腫瘤的個體化治療。這對于降低術后腫瘤復發(fā)及轉移率，提高生存率具有重要的意義。

［1］Zhang ZY，Ge HY．Micrometastasis in gastic cancer［J］．Cancer Lett，2013，336（1）：34-45．

［2］Maestro LM，Sastre J，Rafael SB，et al．Circulating tumor cells insolid tumor in metastatic and localized stages［J］．Anticancer Res，2009，29（11）：4839-4843．

［3］Kalluri R，Weinberg RA．The basics of epithelial-mesenchymal transition［J］．J Clin Invest，2009，119（6）：1420-1428．

［4］Liotta LA，Stetler-Stevenson WG．Tumor invasion and metastasis：an imbalance of positive and negative regulation［J］．Cancer Res，1991，51（18S）：5054-5059．

［5］Sastre J，Maestro ML，Puente J，et al．Circulating tumor cells in colorectal cancer：correlation with clinical and pathological variables［J］．Ann Oncol，2008，19（5）：935-938．

［6］黃選章，王振寧．循環(huán)腫瘤細胞對胃癌臨床病理特點和預后意義的Meta分析［C］．第9屆全國胃癌學術會議暨第二屆陽光長城腫瘤學術會議論文集，2014：6．

［7］李 熳，張志廣，劉 霞，等．胃癌患者循環(huán)腫瘤細胞的檢測及臨床意義［J］．中國腫瘤臨床，2014，41（22）：1142-1145．

［2015-09-14收稿，2015-10-12修回］ ［本文編輯：吳 蓉］

R735．2

B

10．14172/j．issn1671-4008．2016．03．022

250031山東濟南，濟南軍區(qū)總醫(yī)院腫瘤科（狄劍士，鄭桂麗，李鍇男，王寶成）；264000山東煙臺，解放軍71146部隊煙臺第一干休所衛(wèi)生所（李夢巖）