飼料中添加納米鋅對半滑舌鰨生長、肌肉營養(yǎng)成分及部分血液生化指標(biāo)的影響

■ 孫學(xué)亮 王慶奎 陳成勛 郭永軍 石 慧 邢克智* 戴媛媛 尤宏?duì)?/p>

（1.天津農(nóng)學(xué)院水產(chǎn)學(xué)院，天津300384；2.天津市渤海水產(chǎn)研究所，天津 300457；3.天津市水產(chǎn)研究所，天津300042）

半滑舌鰨（Cynoglossussemilaevis）屬于鰈形目，舌鰨科，舌鰨屬。屬于大型近海溫水性底層魚類，主要分布于我國的沿海海域，其中以黃、渤海海域最多，具有高營養(yǎng)價(jià)值、較強(qiáng)適應(yīng)性、生長速度快、耐低氧等特性，成為我國最具工廠化養(yǎng)殖前景的海水魚類[1]。

鋅是魚體中所必需的微量元素之一，也是必需營養(yǎng)物質(zhì)之一[2-4]。它分布于機(jī)體所有組織、器官和體液中[5]。參與機(jī)體生化代謝過程（核酸和蛋白質(zhì)的合成、能量代謝、氧化還原等）、維持動物中樞免疫器官和外周免疫器官的結(jié)構(gòu)和功能起到重要作用[6]。王慶奎等[7]曾研究鋅對點(diǎn)帶石斑魚生長和生理生化指標(biāo)的影響。張陽[8]對半滑舌鰨的礦物質(zhì)需求的研究結(jié)果表明，當(dāng)半滑舌鰨的飼料中添加無機(jī)鋅含量53.5～89.5 mg/kg時(shí)最有利于其生長。

納米礦物質(zhì)在水產(chǎn)領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。鄧岳松等[9]構(gòu)建20～60 nm之間粒徑的納米硒，并且研究了納米硒對尼羅羅非魚生長的影響，研究結(jié)果表明納米硒不僅能提高尼羅羅非魚生長的速度且毒性較低。陳劍杰等[10]研究表明餌料中添加納米硒可在一定程度上改善氟脅迫所造成的鯉魚抗氧化能力的下降和組織結(jié)構(gòu)的損傷。秦粉菊等[11]研究吉富羅非魚餌料中添加納米硒可在一定程度上改善鎘脅迫所造成的非特異性免疫功能和抗氧化能力的下降，對鎘暴露起到一定保護(hù)作用。

納米氧化鋅具有較高的生物活性、吸收率和免疫調(diào)節(jié)功能，相對較少的納米氧化鋅即可達(dá)到促進(jìn)生物體生長的功效。同時(shí)，納米氧化鋅的熱穩(wěn)定性較好，可與多種有機(jī)物包括病毒和細(xì)菌發(fā)生氧化反應(yīng)，從而達(dá)到殺菌消毒的作用[12]。飼糧中添加納米氧化鋅能提高產(chǎn)蛋雞鋅的沉積、蛋殼厚度、血漿碳酸酐酶活性以及血漿生長激素濃度；相比常規(guī)氧化鋅，納米氧化鋅能增強(qiáng)鋅在蛋雞小腸中的吸收[13]。

本試驗(yàn)以納米鋅(20 nm)為鋅源，添加至基礎(chǔ)飼料中，研究飼料中添加納米鋅對半滑舌鰨生長、肌肉營養(yǎng)成分及部分血液生化指標(biāo)的影響，為研制配合飼料及優(yōu)化半滑舌鰨飼料配方、合理開發(fā)利用鋅源提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)采用體質(zhì)量為(52.68±0.13)g的半滑舌鰨作為研究對象，納米鋅由南京先豐納米材料科技有限公司生產(chǎn)。

1.2 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)開始前將試驗(yàn)魚馴化7 d，馴化期間飼喂不添加納米鋅的基礎(chǔ)飼料。在基礎(chǔ)飼料中分別添加0、30、60、90、120、180 mg/kg納米鋅（基礎(chǔ)飼料中Zn含量為 53.16 mg/kg）制成含鋅量為 53.16、82.51、111.48、142.16、173.01、232.72 mg/kg 6種飼料，另加一組以無機(jī)鋅(含鋅量為112.37 mg/kg，以W60表示）為鋅源飼料用于進(jìn)行對比，共7個(gè)試驗(yàn)組。每個(gè)水平設(shè)3個(gè)重復(fù)，每箱35尾?；A(chǔ)飼料所用的秘魯魚粉、豆粕、酵母、蝦粉等原料均粉碎過60目篩，微量元素的添加采用逐級擴(kuò)大法，均勻的混入基礎(chǔ)飼料中，混合均勻后，用飼料機(jī)制成粒徑為2 mm的顆粒飼料，陰干后置于-20℃冰柜中保存?zhèn)溆?，基礎(chǔ)飼料配方和營養(yǎng)水平見表1。試驗(yàn)開始前對試驗(yàn)魚進(jìn)行體重的測量。連續(xù)喂食84 d后取樣，測定生長指標(biāo)、肌肉營養(yǎng)成分及血液生理指標(biāo)等。

表1 試驗(yàn)基礎(chǔ)飼料組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干樣）

表2 水質(zhì)指標(biāo)

1.3 試驗(yàn)管理

試驗(yàn)采用循環(huán)海水進(jìn)行養(yǎng)殖，養(yǎng)殖系統(tǒng)由21個(gè)直徑為1 m的水族箱組成。試驗(yàn)魚先在微流水養(yǎng)殖系統(tǒng)中馴化7 d，馴養(yǎng)階段飼喂同一種飼料，以便使魚體內(nèi)含有的微量物質(zhì)處于同一起點(diǎn)。每日投喂2次（8：00、16：00），投喂量占魚體重量的1%左右。每天觀察試驗(yàn)魚狀況，記錄死魚數(shù)目與攝食情況，依據(jù)攝食情況及時(shí)調(diào)節(jié)飼料投喂量。每天監(jiān)測水質(zhì)指標(biāo)（水溫、鹽度、溶氧、pH值、硝態(tài)氮、氨態(tài)氮），見表2。

1.4 樣品采集

連續(xù)喂食84 d后，將試驗(yàn)魚饑餓24 h后稱重取樣，每箱分別隨機(jī)取9尾魚，MS-222麻醉后測量體長、體重。用無菌注射器從尾柄動/靜脈采血，一部分用肝素鈉（50 U/ml）抗凝，用于血液指標(biāo)測定，一部分不抗凝，室溫靜置4 h后，離心（4℃，3 500 r/min，10 min），收集血清，-80℃冷凍保存。

1.5 測定指標(biāo)

1.5.1 生長指標(biāo)

1.5.2 試驗(yàn)魚、飼料營養(yǎng)組分測定

常壓恒溫干燥法（GB/T6435—2006）測定水分；凱氏定氮法（GB/T6432—86）測定粗蛋白；馬弗爐高溫灼燒法（GB/T6538—86）測定粗灰分（550℃）；索氏抽提法（GB/T6433—86）測定粗脂肪（無水乙醚為溶劑）。

1.5.3 血液生理指標(biāo)測定

血紅蛋白含量采用氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）法測定，用氰化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)液做標(biāo)準(zhǔn)曲線。血液NBT陽性細(xì)胞：取50 μl抗凝血加到等體積的NBT應(yīng)用液中混勻，28℃孵育30 min（每10 min混勻一次）。取75 μl的混合物加入1.5 ml二甲基甲酰胺（DMF）中，3 000 r/min離心5 min。吸取上清液在540 nm處測OD值，用DMF調(diào)零。

血清中蛋白、白蛋白、膽固醇、甘油三酯含量、谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活力測定采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒測定。

1.6 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)均采用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（Mean±SE）”表示，用SPSS 19.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，先將數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA，LSD)，差異顯著(P＜0.05)的用Duncan's法做多重比較。

2 結(jié)果

2.1 納米鋅對半滑舌鰨生長指標(biāo)的影響(見表3、表4)

表3 飼喂84 d后納米鋅對半滑舌鰨末重、存活率和肥滿度的影響

表4 飼喂84 d后納米鋅對半滑舌鰨增重率、飼料效率、特定生長率和蛋白質(zhì)效率的影響

由表3可知，納米鋅對半滑舌鰨存活率、肥滿度的影響均不顯著(P＞0.05)。飼養(yǎng)84 d后，試驗(yàn)魚的末體重在73.06～85.84 g之間。隨著納米鋅的添加量增大，試驗(yàn)魚的末重呈先上升后下降的趨勢。90 mg/kg組末重達(dá)到最大值，且顯著高于0、30、120、180 mg/kg組和W60組(P＜0.05)，但和60 mg/kg組無顯著性差異(P＞0.05)。

由表4可知，隨著納米鋅的添加量增大，對增重率、飼料效率、特定生長率及蛋白質(zhì)效率的影響均呈先上升后下降趨勢；特定生長率各組間無顯著性影響(P＞0.05)。90 mg/kg組增重率、飼料效率及蛋白質(zhì)效率均達(dá)到最大值，且顯著高于0、30、120、180 mg/kg組和W60組(P＜0.05)，但與60 mg/kg無顯著性差異(P＞0.05)。

2.2 納米鋅對半滑舌鰨營養(yǎng)組分的影響(見表5)

表5 飼喂84 d后納米鋅對半滑舌鰨營養(yǎng)組分的影響(%)

由表5可知，添加納米鋅的半滑舌鰨魚體水分75.08%～75.19%之間，粗蛋白在20.33%～21.27%之間，粗脂肪在8.22%～8.47%之間，而粗灰分在3.04%～3.24%之間，但各試驗(yàn)組并無顯著性差異（P＞0.05）。

2.3 納米鋅對半滑舌鰨血液生理指標(biāo)的影響(見表6)

由表6可知，添加納米鋅對血紅蛋白含量影響呈先下降后上升的趨勢。120 mg/kg組、180 mg/kg組以及W60組的血紅蛋白含量顯著高于除對照組之外其他各組(P＜0.05)；納米鋅添加量為0～90 mg/kg時(shí)NBT顯著高于其他組別(P＜0.05)；對A/G的影響也呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢，最低值出現(xiàn)在90 mg/kg組，W60組也出現(xiàn)較低數(shù)值且兩組均顯著低于其他各組。

表6 飼喂84 d后納米鋅對半滑舌鰨血液生理指標(biāo)的影響

2.4 添加納米鋅對半滑舌鰨血清及肝胰臟GOT、GPT的影響(見圖1、圖2)

圖1 飼喂納米鋅84 d后對半滑舌鰨GOT活力的影響

圖2 飼喂納米鋅84 d后對半滑舌鰨GPT活力的影響

由圖1可知，血清GOT活力呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢，最大值出現(xiàn)在W60組且顯著高于除對照組之外其余各組；而肝胰臟GOT活力在30 mg/kg、90 mg/kg組呈現(xiàn)較大值且顯著高于其他各組(P＜0.05)，但兩組之間無顯著性差異。

由圖2可知，血清GPT活力在90 mg/kg組出現(xiàn)最大值且顯著高于除W60組外其他各組；肝胰臟GPT活力在對照組出現(xiàn)最大值且顯著高于除180 mg/kg組外其他各組(P＜0.05)，而最小值出現(xiàn)在90 mg/kg組且顯著低于各組(P＜0.05)。

2.5 納米鋅對半滑舌鰨血清CHO、TG的影響(見圖3)

圖3 飼喂納米鋅84 d后對半滑舌鰨CHO、TG含量的影響

由圖3可知，CHO含量在120 mg/kg及W60組呈現(xiàn)較大值且顯著高于對照組及30 mg/kg組，與其他各組并無顯著性差異(P＞0.05)；TG含量在90 mg/kg組出現(xiàn)最大值且顯著高于其他納米鋅組(P＜0.05)。

3 討論

3.1 納米硒鋅對半滑舌鰨生長性能的影響

鋅是水產(chǎn)動物生長發(fā)育所必需的微量元素之一，缺鋅會導(dǎo)致魚體出現(xiàn)生長發(fā)育緩慢、體型短小、死亡率上升及白內(nèi)障等癥狀。而適量的鋅則會促進(jìn)魚體的生長。譚麗娜[14]研究結(jié)果表明，鋅極顯著地提高幼建鯉特異性生長速率、攝餌量、飼料利用率、蛋白質(zhì)效率；畢惠[15]研究結(jié)果表明，鋅對泥鰍的增重有顯著作用；孫蓬[16]研究甘氨酸鋅對點(diǎn)帶石斑魚末重、增重率及特定生長率均有顯著影響；蕭培珍[17]日糧鋅補(bǔ)充量對異育銀鯽增重率、體重特定生長率、飼料系數(shù)、蛋白質(zhì)效率有一定的影響，各試驗(yàn)組間存在顯著性差異。

本試驗(yàn)研究結(jié)果顯示，在基礎(chǔ)飼料中添加納米鋅及無機(jī)鋅對半滑舌鰨存活率、肥滿度及特定生長率無顯著性影響，而對末重、增重率、飼料效率及蛋白質(zhì)效率有不同程度的影響，均為當(dāng)納米鋅添加量為90 mg/kg出現(xiàn)最大值且顯著高于除納米鋅60 mg/kg外其余各組，與崔立嬌等[18]對星斑川鰈幼魚研究結(jié)果類似（鋅的總添加量為150 mg/kg）；周立斌等[19]對花鱸生長的研究表明，當(dāng)添加量為159.9 mg/kg時(shí)，花鱸的增重率達(dá)到最大值。

3.2 納米鋅對半滑舌鰨肌肉營養(yǎng)成分的影響

本試驗(yàn)測定的營養(yǎng)組分包括水分、粗蛋白、粗脂肪及粗灰分，粗蛋白是飼料中含氮化合物的總稱，既包括真蛋白又包括非蛋白含氮化合物；粗脂肪是飼料中的一個(gè)重要組成部分，雖然各種動物對它的需要量不大，但是不能缺少，它在動物營養(yǎng)中起著很重要的作用；粗灰分是魚體樣品在550～600℃高溫爐中將所有有機(jī)物質(zhì)氧化后剩余的殘?jiān)?，主要為礦物質(zhì)氧化物或鹽類等無機(jī)物質(zhì)。結(jié)果顯示在基礎(chǔ)飼料中添加納米鋅及無機(jī)鋅對半滑舌鰨水分、粗灰分、粗蛋白及粗脂肪均無顯著性影響，這與張佳明[20]研究結(jié)果相一致；葉超霞等[21]對斜帶石斑魚飼料中添加鋅的研究發(fā)現(xiàn)鋅對肌肉水分、脂肪無顯著影響。

3.3 納米鋅對半滑舌鰨血液生化指標(biāo)的影響

魚類的血細(xì)胞是反映魚體免疫能力的一個(gè)重要指標(biāo)，具有吞噬、分泌等功能，可參與機(jī)體的傷口修復(fù)、防御等生理機(jī)制，因此血液指標(biāo)可以為檢驗(yàn)機(jī)體的生理狀態(tài)健康提供一定的依據(jù)[22]。本試驗(yàn)研究結(jié)果顯示，隨著納米鋅含量的增加半滑舌鰨Hb呈先下降后上升的趨勢，且60、90 mg/kg組顯著低于對照組及W60組，說明添加低濃度納米鋅可能對半滑舌鰨Hb產(chǎn)生抑制作用，影響其攜氧能力。NBT陽性細(xì)胞是吞噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的總稱，它是研究細(xì)胞數(shù)量和吞噬能力的極好指標(biāo)，通過提高NBT陽性細(xì)胞數(shù)來提高魚類非特異性免疫功能[23]。本試驗(yàn)中，NBT陽性細(xì)胞總體呈下降趨勢，其中120、180 mg/kg組及W60組顯著低于其余各組，這說明大劑量的納米鋅對NBT陽性細(xì)胞具有抑制作用。王鏡巖等[24]認(rèn)為血清中有兩種蛋白質(zhì)，一種是白蛋白，可以修補(bǔ)組織，還可以維持血漿滲透壓；另一種是球蛋白，參與機(jī)體非特異性免疫。血漿A/G值是反映魚類非特異性免疫力的重要指標(biāo)，A/G值越低說明免疫球蛋白含量越高，免疫力越高[25]。本試驗(yàn)中，A/G比值在90 mg/kg組出現(xiàn)最低值且顯著低于納米鋅其余各組，但與W60組無顯著性差異。

3.4 納米鋅對半滑舌鰨GOT和GPT的影響

GPT和GOT廣泛存在于動物線粒體中，是對調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)代謝起重要作用的氨基酸轉(zhuǎn)氨酶[26]。轉(zhuǎn)氨酶是反映魚體肝胰臟是否正常的一項(xiàng)重要指標(biāo)。在通常情況下，機(jī)體內(nèi)血清中是一直維持一定的GPT活性，只有當(dāng)肝胰臟、腎臟等出現(xiàn)異常時(shí)才會引起GPT活性顯著升高[27]。本試驗(yàn)中，血清GOT最大值出現(xiàn)在無機(jī)鋅組且顯著高于除對照組之外其余各組；而肝胰臟GOT活力在30、90 mg/kg組呈現(xiàn)較大值且顯著高于其他各組，血清GPT活力在90 mg/kg組出現(xiàn)最大值且與無機(jī)鋅組差異不顯著，說明飼料中添加適量納米鋅沒有對肝臟造成損傷。

3.5 納米鋅對半滑舌鰨CHO和TG的影響

動物血清中包括四大脂類，它們分別為膽固醇（CHO）、甘油三酯（TG）、磷脂以及非脂化脂肪酸，其中CHO和TG能夠反映魚體內(nèi)脂類代謝吸收情況[28]。CHO是動物機(jī)體組織細(xì)胞中不可缺少的重要物質(zhì)，它的作用是參與形成細(xì)胞膜，同時(shí)也是某些酶及激素合成原料，CHO過低或過高都會對機(jī)體產(chǎn)生不利影響[29]。TG是生物體內(nèi)含量最多的一種脂類，它能夠被大部分組織所利用產(chǎn)生各種能量，能夠間接反映機(jī)體生長狀況。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，半滑舌鰨在飼喂84 d后，CHO在無機(jī)鋅組出現(xiàn)最大值，但除顯著高于對照組及30 mg/kg組外與其它各組無顯著性差異；而TG最大值出現(xiàn)在90 mg/kg且顯著高于其它各組；飼料中脂類的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)及貯存場所，一般是以TG結(jié)合蛋白質(zhì)形成乳糜微粒的形式完成的[30]。說明添加量為90 mg/kg時(shí)，半滑舌鰨對飼料中脂類的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)能力最強(qiáng)。

4 結(jié)論

綜上所述，在基礎(chǔ)飼料中納米鋅添加量為90 mg/kg時(shí)，既可以提高半滑舌鰨的生長性能，又可以提高其免疫力，同時(shí)對其肝臟影響較小。