■趙 峰 王 波 夏中生* 于俊勇 肖有恩
(1.海南廣播電視大學(xué)農(nóng)林醫(yī)藥科技學(xué)院,海南海口 570203;2.廣西大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,廣西南寧 530004;3.廣西農(nóng)墾永新畜牧集團(tuán)有限公司良圻原種豬場,廣西橫縣 530317)
飼用抗生素一直是防止仔豬斷奶腹瀉、促進(jìn)動(dòng)物生長的主要措施之一,但抗生素濫用導(dǎo)致動(dòng)物腸道的繼發(fā)感染,耐藥菌產(chǎn)生,產(chǎn)品藥物殘留,對(duì)生態(tài)環(huán)境和食品安全帶來威脅等問題已引起廣泛關(guān)注,我國2015年新《環(huán)保法》和《食品安全法》的實(shí)施,以及《飼料質(zhì)量安全管理規(guī)范》的相繼出臺(tái),禁用動(dòng)物飼用抗生素,尋求抗生素的替代品,研發(fā)安全、高效、綠色的新型環(huán)保型飼用抗生素替代產(chǎn)品已是大勢所趨,迫在眉睫。近年來,有關(guān)抗生素替代產(chǎn)品研究開發(fā)主要有酸化劑、酶制劑、功能性寡糖、益生菌、植物提取物等,用以調(diào)節(jié)動(dòng)物腸道微生態(tài),提高動(dòng)物免疫力,改善動(dòng)物生長性能,但試驗(yàn)研究大多使用單個(gè)產(chǎn)品,且效果不一(Bovera F等,2012;Rapha?le等,2017;Kim等,2011;劉虎傳等,2012;賴昭凱等,2012;王金旭等,2014)。本試驗(yàn)根據(jù)仔豬腸道微生態(tài)平衡原理,研究飼糧中添加果寡糖與復(fù)合益生素對(duì)斷奶仔豬生長性能、血清生化指標(biāo)和健康狀況的影響。探討其替代抗生素的可行性,為新型復(fù)合微生態(tài)制劑替代飼用抗生素在動(dòng)物健康養(yǎng)殖中合理應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。
果寡糖 (fructooligosaccharide,F(xiàn)OS)由南寧某公司生產(chǎn)提供粉狀制劑,果寡糖含量30%;復(fù)合益生素(Complex-probiotic-preparation,CPP)由江蘇某公司生產(chǎn)提供的粉狀復(fù)合益生素制劑,主要含丁酸梭菌、枯草芽孢桿菌等,有效活菌數(shù)3×109CFU/g。
抗生素為金霉素預(yù)混劑(Aureomycin premix,AP),市售產(chǎn)品,含金霉素10%。
試驗(yàn)于2016年8~10月在廣西農(nóng)墾良圻原種豬場進(jìn)行。選用240頭健康狀況良好,體重約7.2 kg的杜×長×大三元雜交斷奶仔豬,隨機(jī)分為6組,每個(gè)組2個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)20頭豬(公母各半),其中1組為對(duì)照組,飼喂基礎(chǔ)飼糧;2組為抗生素組,在基礎(chǔ)飼糧中添加0.10%AP;3、4、5、6組為分別在基礎(chǔ)飼糧中添加0.05%CPP、0.10%FOS、0.20%FOS、0.10%FOS+0.05%CPP?;A(chǔ)飼糧參照NY/T 65—2004推薦8~20 kg仔豬的營養(yǎng)需要配制,其飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1,各組飼糧營養(yǎng)水平一致。
表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))
試驗(yàn)前,對(duì)整棟豬舍進(jìn)行全面消毒,空欄7 d以上。將選好的試驗(yàn)豬轉(zhuǎn)入消毒后的豬舍,對(duì)分組后的21日齡左右斷奶仔豬,進(jìn)行7 d預(yù)試,試驗(yàn)期35 d。試驗(yàn)豬舍自然光照,通風(fēng)良好,溫濕度適宜。每日飼喂2~3次。自由采食,每次以吃飽后略有剩余為度,自由飲水。按豬場常規(guī)方法進(jìn)行免疫疫苗注射和飼養(yǎng)管理。每天清理豬欄一次,保持舍內(nèi)衛(wèi)生,隨時(shí)觀察豬群采食、糞尿排泄等行為,記錄仔豬采食量,觀察記錄豬群腹瀉發(fā)病用藥情況等狀況。
試驗(yàn)初始日和結(jié)束日空腹稱取各組豬體重、計(jì)算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)、料重比(F/G)。
平均日增重(ADG,g)=(末重-始重)/試驗(yàn)天數(shù);
平均日采食量(ADFI,kg)=(飼喂料量-剩料量)/試驗(yàn)天數(shù);
料重比(F/G)=平均日采食量/平均日增重。
腹瀉的判斷為稀糞、不成形為準(zhǔn),分別記錄各重復(fù)每天仔豬腹瀉數(shù)。
腹瀉率(%)=正試期腹瀉仔豬頭次總數(shù)/(試驗(yàn)仔豬頭數(shù)×正試期天數(shù))×100;
死淘率(%)=(死亡數(shù)+淘汰數(shù))/總數(shù)×100。
結(jié)合飼養(yǎng)試驗(yàn),采用內(nèi)源指示劑法(即酸不溶灰分法,AIA法)測定飼糧能量、干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗纖維、無氮浸出物和粗灰分等養(yǎng)分表觀消化率。
于試驗(yàn)結(jié)束前7 d起采集4 d糞樣,每天上下午各收集一次(200~300 g),按重復(fù)將采集仔豬糞樣混合,加10%硫酸混合均勻進(jìn)行固氮后冷藏保存,同時(shí)采集飼糧樣本(200~300 g)。將各重復(fù)4 d所采集糞樣均勻混合再取樣,將糞樣、飼糧樣本帶回實(shí)驗(yàn)室分析,糞樣于烘箱中60~65℃烘干,粉碎,過40目篩后于4℃冰箱冷藏室保存?zhèn)溆?。測定飼糧和糞樣中干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗纖維、粗灰分等采用張麗英(《飼料分析及飼料質(zhì)量檢測技術(shù)》,2002)和楊勝(《飼料分析及飼料質(zhì)量檢測技術(shù)》,1993)的方法;飼糧和糞中的酸不溶灰分含量采用4 mol/l-HCl不溶灰分法測定。
內(nèi)源指示劑法飼糧養(yǎng)分表觀消化率(4 mol/l-HCl不溶灰分法)計(jì)算公式如下:
飼糧養(yǎng)分的表觀消化率(%)=[1-(b×c/a×d)]×100。
式中:a——飼糧中某養(yǎng)分的含量(%);
b——糞樣中某養(yǎng)分的含量(%);
c——飼糧中指示劑(4 mol/l HCl不溶性灰分)的含量(%);
d——糞樣中指示劑的含量(%)。
血清樣品的采集:飼養(yǎng)試驗(yàn)中期或結(jié)束前一天,各組每個(gè)重復(fù)選取2~3頭狀態(tài)良好的仔豬,于清晨空腹?fàn)顟B(tài)下,前腔靜脈采血5 ml,置于干凈的試管內(nèi),4 000 r/min離心15 min(4℃),分離血清,-20℃冰箱保存。
測定血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLO)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、尿素氮(BUN)、總膽固醇(T-CHO)、甘油三酯(TG)、葡萄糖(GLU)等,以及血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgE、IgM。采用奧林巴斯(OLYMPUS)生化分析儀(型號(hào)為AU400),根據(jù)相應(yīng)指標(biāo)選用雙縮脲法等和免疫比濁法等檢測方法進(jìn)行測定。
試驗(yàn)數(shù)據(jù)運(yùn)用Microsoft EXCEL2010版軟件進(jìn)行處理后,再用SPSS19.0數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析,用LSD和Duncan's法進(jìn)行多重比較(顯著性水平為0.05)。結(jié)果用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±SD)”表示。
表2 果寡糖和復(fù)合益生素對(duì)斷奶仔豬生長性能的影響
由表2可知,3、4、5、6組末重分別比對(duì)照組提高1.75%、6.12%、4.55%和9.04%,差異顯著(P<0.05);4、5組和6組與2組(抗生素組)無顯著差異(P>0.05)。4、6組平均日增重分別比對(duì)照組提高9.48%、13.77%,差異顯著(P<0.05);3、4、5、6組平均日增重與抗生素組無顯著性差異(P>0.05)。6組的平均日增重最大,達(dá)325.71 g;6組平均日采食量顯著高于對(duì)照組和2組(P<0.05);料重比除4組顯著低于對(duì)照組外(P<0.05),其他各試驗(yàn)組與對(duì)照組和抗生素組無顯著性差異(P>0.05)。
表3 果寡糖和復(fù)合益生素對(duì)斷奶仔豬健康狀況的影響(%)
由表3可知,單獨(dú)添加0.05%復(fù)合益生素(3組)、0.10%果寡糖(4組)及兩者聯(lián)合添加(6組)均能顯著降低仔豬腹瀉率(P<0.05),且與抗生素組無顯著性差異(P>0.05),其中6組的效果最好,仔豬腹瀉率比抗生素組降低了 62.86%(P>0.05),比對(duì)照組降低了94.63%(P<0.05),但對(duì)死淘率無明顯影響(P>0.05)。
表4 果寡糖和復(fù)合益生素對(duì)斷奶仔豬飼糧養(yǎng)分表觀消化率的影響(%)
由表4可知,添加不同水平果寡糖和復(fù)合益生素對(duì)斷奶仔豬飼糧粗蛋白質(zhì)表觀消化率無顯著影響(P>0.05);除3組(0.05%CPP)飼糧粗脂肪表觀消化率顯著高于對(duì)照組(P<0.05)外,其他各組粗脂肪表觀消化率與對(duì)照組無顯著差異(P>0.05);除抗生素組粗纖維表觀消化率顯著高于對(duì)照組外(P<0.05),其他各試驗(yàn)組與對(duì)照組和抗生素組均無顯著性差異(P>0.05)。
表5 果寡糖和復(fù)合益生素對(duì)斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的影響
由表5可見,不同水平果寡糖和復(fù)合益生素對(duì)斷奶仔豬血清總蛋白、白蛋白、球蛋白、白球比值、尿素氮、膽固醇、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、ALT/AST、空腹血糖等生化指標(biāo)無顯著影響(P>0.05)。但0.20%FOS組(5組)甘油三酯顯著低于0.05%CPP組(3組)(P<0.05),其他各組之間均無顯著性差異(P>0.05)。
本試驗(yàn)中,斷奶仔豬飼糧添加不同水平果寡糖和復(fù)合益生素,可不同程度提高平均日增重、降低料重比,改善仔豬生長性能。其中以聯(lián)合添加0.10%果寡糖制劑和0.05%復(fù)合益生素制劑對(duì)仔豬生長性能的改善效果最好,與對(duì)照組相比,平均日增重提高13.77%(P<0.05),料重比降低7.41%(P>0.05)。這可能是由于以丁酸梭菌、枯草芽孢桿菌為主要菌群的益生素在腸道產(chǎn)生有機(jī)酸、過氧化氫、各種消化酶、細(xì)菌素等物質(zhì),從而促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收轉(zhuǎn)化率;同時(shí)果寡糖又可以作為腸道益生菌生長的碳源,不能被大腸桿菌、沙門氏菌等有害微生物利用,而乳酸桿菌、雙歧桿菌等有益菌的利用率很高,從而產(chǎn)生協(xié)同作用,起到增加斷奶仔豬腸道有益微生物菌群,抑制有害菌群繁殖的作用,從而促進(jìn)腸道健康,提高仔豬生長性能。譚聰靈等(2010)在飼糧中添加FOS對(duì)生長豬的生長性能的研究中表明FOS可以提高仔豬的生長性能和飼料轉(zhuǎn)化率。汪彬等(2010)試驗(yàn)結(jié)果表明,單獨(dú)添加0.10%的益生菌、0.10%寡糖能夠不同程度地提高斷奶仔豬的生長性能。周盟(2013)在飼糧中添加植物乳桿菌、枯草芽孢桿菌及其復(fù)合菌對(duì)斷奶仔豬的影響,試驗(yàn)結(jié)果表明斷仔豬的料重比顯著降低,在一定程度上提高斷奶仔豬的生長性能,并且這種作用效果隨著仔豬生長而減弱。本試驗(yàn)結(jié)果與前人研究結(jié)果一致。在本豬場實(shí)際條件下以聯(lián)合添加0.10%果寡糖和0.05%復(fù)合益生素作用效果好,生長性能方面能達(dá)到0.10%抗生素的作用效果。
本試驗(yàn)在飼糧中添加果寡糖和復(fù)合益生素能降低斷奶仔豬腹瀉率。單獨(dú)添加0.10%果寡糖、聯(lián)合添加0.10%果寡糖和0.05%復(fù)合益生素對(duì)斷奶仔豬腹瀉率的影響與0.10%抗生素基本一致。這與李武(2012)和胡楠等(2007)報(bào)道的試驗(yàn)結(jié)果基本一致。這說明果寡糖和益生素能提高仔豬健康,降低仔豬腹瀉,適宜的添加水平能達(dá)到抗生素同樣的效果。這可能是由于果寡糖和以丁酸梭菌、枯草芽孢桿菌為主要菌群的益生素協(xié)同作用下,有益菌大量繁殖,從而調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)環(huán)境,使得有益菌群占據(jù)優(yōu)勢,競爭更多定植位點(diǎn),排斥病原菌,激活腸道免疫系統(tǒng),最終提高腸道免疫力(Ducatelle等,2015)。本試驗(yàn)表明在本豬場實(shí)際條件下,以聯(lián)合添加0.10%果寡糖和0.05%復(fù)合益生素作用效果好,腹瀉率方面比對(duì)照組降低94.63%(P<0.05),比0.10%抗生素組降低62.86%(P>0.05),提高了斷奶仔豬健康水平。
本試驗(yàn)中在斷奶仔豬飼糧中單獨(dú)或者聯(lián)合添加果寡糖和復(fù)合益生素能一定程度促進(jìn)斷奶仔豬對(duì)飼料粗脂肪、粗纖維的表觀消化率,與0.10%抗生素的作用效果無差異(P>0.05)。這可能是與在果寡糖和益生素的協(xié)同作用下,大量有益菌群繁殖,直接或者間接參與各種消化酶、維生素的合成,改善營養(yǎng)物質(zhì)消化代謝有關(guān)。馮仁勇等(2006)在飼糧中添加寡糖和復(fù)合益生素對(duì)斷奶仔豬的試驗(yàn)研究結(jié)果表明寡糖和益生菌聯(lián)合可以提高營養(yǎng)物質(zhì)的消化率。汪彬等(2010)在斷奶仔豬飼糧中單獨(dú)添加益生菌和果寡糖,飼料利用效率分別比對(duì)照組提高6.51%和7.69%;兩者聯(lián)合添加,飼料利用效率比對(duì)照組提高8.88%。本試驗(yàn)結(jié)果與前人報(bào)道一致。在本豬場實(shí)際條件下以添加0.10%果寡糖作用效果較好。
動(dòng)物血清生化指標(biāo)檢測目的在于了解動(dòng)物機(jī)體的生理生化和營養(yǎng)代謝情況,有時(shí)也可以檢查出動(dòng)物體內(nèi)潛伏的疾病,可用于防止病情突然發(fā)作并及時(shí)治療。本試驗(yàn)在結(jié)束前,抽取斷奶仔豬血液進(jìn)行生化指標(biāo)檢測以判斷用果寡糖和益生素替代抗生素后是否影響仔豬血清生化指標(biāo)和代謝功能。血清白蛋白和球蛋白共同組成血清總蛋白,血清總蛋白含量高則有利于機(jī)體獲得較強(qiáng)的免疫能力和代謝水平,保證動(dòng)物的健康生長。球蛋白在血清中的含量高低能一定程度上反映出機(jī)體免疫力水平,而白蛋白主要作用是調(diào)節(jié)細(xì)胞外環(huán)境并運(yùn)輸維生素、激素以及脂類物質(zhì)。本試驗(yàn)中,在斷奶仔豬日糧中添加果寡糖和復(fù)合益生素對(duì)斷奶仔豬血清免疫力的影響與0.10%抗生素的作用效果無顯著差異(P>0.05),與對(duì)照組相比也沒有明顯差異(P>0.05)。說明飼糧中添加果寡糖和復(fù)合益生素安全可行,對(duì)仔豬免疫系統(tǒng)不會(huì)造成不利影響。譚聰靈等(2010)和肖宏德等(2014)試驗(yàn)研究結(jié)果表明果寡糖、益生菌制劑可以提高斷奶仔豬血清免疫球蛋白水平,增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體免疫功能。本試驗(yàn)結(jié)果與前人報(bào)道不盡一致,可能是果寡糖添加量或益生菌菌種不同所致,其原因還需要進(jìn)一步的研究。本試驗(yàn)結(jié)果表明,仔豬飼糧中添加不同水平的果寡糖和復(fù)合益生素對(duì)斷奶仔豬血清尿素氮、膽固醇、ALT、AST、ALT/AST、空腹血糖等生化指標(biāo)無顯著差異(P>0.05),0.20%果寡糖組有降低血清甘油三酯的功效,試驗(yàn)結(jié)果與前人研究結(jié)果基本一致(譚聰靈等,2010);這說明飼糧中添加果寡糖和復(fù)合益生素對(duì)試驗(yàn)仔豬的生理生化功能有益無害,因此認(rèn)為果寡糖和復(fù)合益生素可以安全有效地添加到斷奶仔豬飼糧中替代抗生素,進(jìn)行仔豬生產(chǎn)。
飼糧中添加果寡糖和復(fù)合益生素制劑可不同程度提高斷奶仔豬平均日增重,降低料重比,促進(jìn)飼料營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收,提高飼料利用率,改善豬生長性能,提高抗病力,改善健康水平;其效果與使用抗生素?zé)o差異,可見本試驗(yàn)條件下利用果寡糖和復(fù)合益生素替代飼用抗生素飼喂斷奶仔豬是可行的。
綜合考慮本試驗(yàn)各項(xiàng)指標(biāo)分析結(jié)果,結(jié)合試驗(yàn)豬場的實(shí)際情況,在仔豬生產(chǎn)實(shí)踐中建議飼糧中以聯(lián)合添加0.10%果寡糖和0.05%復(fù)合益生素制劑為宜。
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