可溶性CD44s、SF、LDH在鑒別巨幼細(xì)胞貧血和骨髓增生異常綜合征中的意義

楊潔 楊永賓 李杰 張曉霞 王瑞倉(cāng) 郝洪嶺 李燕 袁軍 趙培

可溶性CD44s、SF、LDH在鑒別巨幼細(xì)胞貧血和骨髓增生異常綜合征中的意義

楊潔 楊永賓 李杰 張曉霞 王瑞倉(cāng) 郝洪嶺 李燕 袁軍 趙培

目的 測(cè)定巨幼細(xì)胞貧血(MA)和骨髓增生異常綜合征(MDS)患者的血清可溶性CD44s(solCD44s)、乳酸脫氫酶(LDH)、血清鐵蛋白(SF)水平，來(lái)探討此三項(xiàng)指標(biāo)在MDS與MA的鑒別診斷中的意義。方法112例初診患者為研究對(duì)象，其中MDS患者58例(MDS組)，MA患者39例(MA組)，健康成年人15例作為對(duì)照(對(duì)照組)。留取血清標(biāo)本，采用ELISA法檢測(cè)血清solCD44s，速率法測(cè)定LDH水平及電化學(xué)發(fā)光免疫分析法(ECLIA)測(cè)定SF水平。結(jié)果MDS組血清solCD44s水平明顯高于對(duì)照組與MA組(P<0.05)，MA組與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。MDS組與MA組血清LDH水平均明顯高于對(duì)照組，兩兩比較MDS組LDH水平低于 MA組(P<0.05)。MDS組與MA組血清SF水平均明顯高于對(duì)照組，兩兩比較MDS組SF水平高于MA組(P<0.05)。結(jié)論MDS患者血清可溶性CD44s、SF水平較MA患者明顯升高，MDS患者LDH水平低于MA患者。血清可溶性CD44s、LDH、SF可作為MA與MDS鑒別診斷的參考指標(biāo)。

可溶性 CD44s；巨幼細(xì)胞貧血；乳酸脫氫酶；骨髓增生異常綜合征

骨髓增生異常綜合征(myelodysplasticsyndrome,MDS)是一組以感染、貧血、出血為主要臨床表現(xiàn)的克隆性造血干細(xì)胞疾病，單獨(dú)的基因事件(如基因突變等)并不能解釋MDS的病程，目前的觀點(diǎn)是基因改變和表觀遺傳修飾共同作用，導(dǎo)致了MDS無(wú)效造血、表型異質(zhì)性、易向白血病轉(zhuǎn)化等特點(diǎn)[1]。巨幼細(xì)胞貧血(MA)與MDS血常規(guī)都可有貧血、伴或不伴白細(xì)胞及血小板減少，臨床表現(xiàn)都以貧血為主，骨髓可見(jiàn)病態(tài)造血現(xiàn)象，這些表現(xiàn)有很大的相似性，甚至有些MDS表現(xiàn)全血細(xì)胞減少，檢測(cè)血清葉酸和(或)維生素 B12水平低下，無(wú)原始細(xì)胞比例增高或增高不明顯，且未發(fā)現(xiàn)染色體克隆性表現(xiàn)，此類MDS早期與MA鑒別有一定困難。因兩種疾病治療與預(yù)后截然不同，因此二者的鑒別具有重要的臨床意義。CD44是單鏈膜表面糖蛋白，屬于黏附分子家族，它與細(xì)胞黏附、淋巴細(xì)胞活化和歸巢、腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[2]。血清可溶性CD44(solCD44s)是指CD44從細(xì)胞表面脫落而釋放入血[3]，此過(guò)程需在蛋白水解酶作用下完成。目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于實(shí)體腫瘤、白血病、惡性淋巴瘤等患者的血清solCD44s水平升高的報(bào)道已較多，而血清solCD44s水平在MDS患者升高的報(bào)道相對(duì)較少[4],到目前為止尚未見(jiàn)到MA患者血清solCD44s水平的研究報(bào)道。本研究以MA和MDS患者為主要對(duì)象，采用ELISA方法測(cè)定此兩種疾病患者血清solCD44s水平，速率法測(cè)定血清乳酸脫氫酶(LDH)水平和電化學(xué)發(fā)光免疫分析法測(cè)定血清鐵蛋白(SF)水平，探討以上三項(xiàng)指標(biāo)在MA與MDS鑒別診斷的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2011年2月至2015年2月收治的血液病初診患者97例，其中MDS 58例，MA 39例。血液病的診斷符合《血液病診斷與治療標(biāo)準(zhǔn)》[5](張之南主編)。MDS組中男38例，女20例；年齡33～81歲，平均年齡(61±8)歲。MA組中男21例，女18例；年齡39～80歲，平均年齡(40±9)歲。在我院體檢的健康成年人15例為對(duì)照組，其中男6例，女9例；年齡32～57歲，平均年齡(47±8)歲。3組一般資料具有均衡性。

1.2 儀器與試劑 人solCD44s ELISA 試劑盒(博海生物技術(shù)有限公司)，全自動(dòng)酶標(biāo)儀。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)本采集：治療前將試驗(yàn)對(duì)象及對(duì)照組病例采集空腹靜脈血3 ml于無(wú)抗凝試管，采集后2 h內(nèi)離心(2 000 r/min，5 min)，在EP管內(nèi)留取上層血清，每管分裝為0.5 ml，保留在-80℃冰箱待測(cè)。

1.3.2 血清solCD44s水平檢測(cè)：應(yīng)用ELISA方法，按說(shuō)明書(shū)將試劑盒從8℃取出，先在室溫下平衡30 min后開(kāi)啟，再進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品稀釋(應(yīng)用試劑盒提供的原倍標(biāo)準(zhǔn)品，在小試管中進(jìn)行稀釋)，然后進(jìn)行加樣、溫育、配液、洗滌、加酶、溫育、洗滌、顯色、終止、測(cè)定(注：加終止液后立即將空白孔調(diào)零，450 nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的吸光度，此過(guò)程在15 min內(nèi)完成)。

1.3.3 LDH:速率法測(cè)血清LDH，由我院檢驗(yàn)科代為完成。

1.3.4 SF:電化學(xué)發(fā)光免疫分析法測(cè)SF，由我院核醫(yī)學(xué)科代為完成。

2 結(jié)果

2.1 血清solCD44s 的水平比較 對(duì)照組血清solCD44s水平為(341.07±64.94)μg/L。MDS組血清solCD44s水平為(564.51±121.96)μg/L，明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。MA 組血清solCD44s水平為(375.93±71.97)μg/L，與對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。MDS 組血清solCD44s水平明顯高于 MA組(P<0.05)。見(jiàn)表1。

2.2 血清 LDH測(cè)定 血清LDH測(cè)定：MA組為(815.97±358.58)U/L，MDS組為(348.97±134.76)U/L，均顯著高于對(duì)照組(151.83±37.29)U/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。MA組患者血清LDH水平高于MDS組(P<0.05)。SF測(cè)定MA組為(432.17±96.02)ng/ml，MDS組為(673.85±336.51)ng/ml，均顯著高于對(duì)照組(153.59±67.85)ng/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。MA組患者SF水平顯著低于MDS組(P<0.05)。見(jiàn)表1。

組別血清solCD44s水平(μg/L)血清LDH水平(U/L)SF水平(ng/ml)MA組(n=39)375.93±71.97815.97±358.58*432.17±96.02*MDS組(n=58)564.51±121.96*348.97±134.76*#673.85±336.51*#對(duì)照組(n=15)341.07±64.94151.83±37.29153.59±67.85

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與MA組比較，#P<0.05

3 討論

MA是由于缺乏葉酸和(或)維生素B12，引起脫氧核糖核酸(DNA)合成障礙導(dǎo)致的貧血。MDS是造血干細(xì)胞惡性克隆性疾病，屬于惡性腫瘤。二者疾病性質(zhì)不同，治療及預(yù)后也截然不同。MA和MDS在臨床上都以貧血為主要表現(xiàn)，伴或不伴出血、感染，外周血象都可有一系、兩系或全血細(xì)胞減少，常表現(xiàn)大細(xì)胞性貧血，骨髓形態(tài)學(xué)檢查都可看到紅系、粒系、巨核細(xì)胞的生成異常，如巨幼樣改變、紅細(xì)胞大小不均、可見(jiàn)異形紅細(xì)胞及有核紅細(xì)胞，粒細(xì)胞分葉過(guò)多，可見(jiàn)大巨核細(xì)胞等，兩者容易混淆[6]，且主觀因素影響較大。所以找到能夠鑒別二者的檢驗(yàn)指標(biāo)十分重要。

血清solCD44s是由CD44胞漿外段從細(xì)胞表面脫落釋放入血而來(lái)，此過(guò)程需在蛋白水解酶作用下完成，而內(nèi)生蛋白水解酶則來(lái)自于快速增殖的惡性腫瘤細(xì)胞，由此造成solCD44s的增高。在細(xì)胞與細(xì)胞以及細(xì)胞與基質(zhì)間的信號(hào)傳導(dǎo)及相互作用中，CD44胞漿外段的脫落起到了重要的調(diào)控作用[7]。文獻(xiàn)報(bào)道，CD44高表達(dá)于所有AML亞型原始細(xì)胞上[8]，已有文獻(xiàn)報(bào)道血清solCD44s水平增高與某些人類腫瘤的不良預(yù)后有關(guān)[9]。并有相關(guān)文獻(xiàn)提到惡性血液病患者血清solCD44s水平有所升高[10]，如慢性粒細(xì)胞白血病(CML)、急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)、AML及MDS等，并提出solCD44s可以作為影響MDS生存的一個(gè)獨(dú)立預(yù)后因素。CD44的胞外裂解常見(jiàn)于包括髓系腫瘤在內(nèi)的很多類型的人類腫瘤[11]，此過(guò)程活躍，受高度調(diào)控。已脫落下來(lái)的solCD44s，其生物學(xué)功能仍被保留[12]，即參與細(xì)胞活化、抑制腫瘤生長(zhǎng)、誘導(dǎo)凋亡。轉(zhuǎn)染的solCD44s可發(fā)揮巨大作用，導(dǎo)致細(xì)胞增殖，并增加抗凋亡能力，因此認(rèn)為solCD44s在腫瘤細(xì)胞可成為一個(gè)新靶點(diǎn)[13]。Moreno等[14]提出，血清solCD44s與腫瘤負(fù)荷相關(guān)，認(rèn)為其可成為髓系腫瘤(包括MDS)可靠的腫瘤標(biāo)志物。本研究中MDS的solCD44s明顯高于對(duì)照組和MA組，這可能與solCD44s在惡性腫瘤中表達(dá)水平較高有關(guān)。而MA組與對(duì)照組相比無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這也與其疾病性質(zhì)相符，因此solCD44s可以作為鑒別MA與MDS的一項(xiàng)輔助指標(biāo)。

LDH是一種糖酵解酶，廣泛存在于人體的各組織中，心肌、骨骼肌、腎臟含量最豐富，紅細(xì)胞及腫瘤組織中也極為豐富，目前該指標(biāo)的檢測(cè)在各大醫(yī)院廣泛開(kāi)展。正常人血清LDH含量極低，而血清LDH明顯升高多見(jiàn)于組織細(xì)胞破壞，LDH釋放入血。MA與MDS患者在紅細(xì)胞破壞過(guò)多，及骨髓中幼紅細(xì)胞溶血方面有相似之處，此時(shí)LDH釋放增加，導(dǎo)致血清LDH升高，但機(jī)制卻不同。MA是由于葉酸或維生素 B12缺乏致DNA合成障礙，引起細(xì)胞核發(fā)育障礙，該巨幼細(xì)胞易在骨髓內(nèi)破壞，出現(xiàn)無(wú)效性紅細(xì)胞生成，即骨髓原位溶血、紅細(xì)胞破壞增加導(dǎo)致了血清LDH增高。腫瘤細(xì)胞存在基因調(diào)控失調(diào)、細(xì)胞損傷、能量代謝障礙等特點(diǎn)，目前認(rèn)為L(zhǎng)DH升高與此有關(guān)，此機(jī)制致腫瘤細(xì)胞內(nèi)LDH釋放增多[15]，可反映腫瘤增殖活性[16]。MDS起源于早期多能造血干細(xì)胞，其發(fā)生和進(jìn)展是一個(gè)多步續(xù)過(guò)程，受損的干、祖細(xì)胞逐步成為單克隆造血，伴有基因組不穩(wěn)定性，基因突變率高[17]，易發(fā)生繼發(fā)性細(xì)胞遺傳學(xué)異常，MDS血清LDH升高與能量代謝障礙和細(xì)胞損傷相關(guān)。MA骨髓中存在大量巨幼細(xì)胞和大紅細(xì)胞，其生存期短，過(guò)早破壞，合并原位溶血，以上方面均較MDS突出，這些方面均導(dǎo)致LDH明顯升高。

SF是去鐵蛋白和Fe3+形成的復(fù)合物，是鐵的貯存形式。MA患者紅細(xì)胞破壞增多，骨髓增生紊亂，鐵利用障礙，SF輕度增高。而MDS屬于惡性腫瘤，腫瘤細(xì)胞鐵蛋白合成增加，清除障礙[18]，加之致癌因子對(duì)鐵代謝直接或間接的干擾，且MDS患者鐵利用障礙、骨髓無(wú)效造血、正常造血受抑等都導(dǎo)致SF明顯增高。

血清LDH、SF作為MA與MDS鑒別指標(biāo)的文獻(xiàn)報(bào)道已不少見(jiàn)[18]，但未見(jiàn)solCD44s在MA中表達(dá)的研究。本文進(jìn)行了MA與MDS兩種疾病血清solCD44s、LDH、SF的水平測(cè)定，認(rèn)為在MA與MDS二者鑒別中除了結(jié)合外周血及骨髓細(xì)胞形態(tài)、骨髓病理、細(xì)胞遺傳學(xué)以外，此三項(xiàng)指標(biāo)可以作為協(xié)助鑒別的血清學(xué)指標(biāo)，MA的LDH水平高于MDS，solCD44、SF水平低于MDS，參考這些指標(biāo)有助于提高診斷的準(zhǔn)確性。

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10.3969/j.issn.1002-7386.2016.24.026

050051 石家莊市，河北省人民醫(yī)院血液科(楊潔、李杰、張曉霞、王瑞倉(cāng)、郝洪嶺、李燕、袁軍)，普外二科(楊永賓)，檢驗(yàn)科(趙培)

郝洪嶺，050051 石家莊市，河北省人民醫(yī)院血液科；

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R 551.31

A

1002-7386(2016)24-3773-03

2016-08-05)