CT引導(dǎo)下穿刺活檢檢測EGFR、ALK基因臨床價值分析

胡曉菲 汪俊 王鋼勝

CT引導(dǎo)下穿刺活檢檢測EGFR、ALK基因臨床價值分析

胡曉菲 汪俊 王鋼勝

目的 探討CT引導(dǎo)下肺癌穿刺活檢表皮生長因子受體(EGFR)、間變淋巴瘤激酶(ALK)基因檢出率及陽性率，并對其臨床應(yīng)用價值進(jìn)行分析。方法選取臨床確診的肺癌患者280例，保留CT引導(dǎo)下穿刺活檢標(biāo)本，分為2組：觀察組(n=200,應(yīng)用粗針穿刺)和對照組(n=80,應(yīng)用細(xì)針穿刺)，2組對臨床病理特征與基因突變相關(guān)性、陽性率、檢出率、腫瘤細(xì)胞數(shù)量及術(shù)后并發(fā)癥情況比較。結(jié)果女性患者EGFR基因突變率為66.04%，男性基因突變患者28.74%，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，非吸煙患者EGFR基因突變率為57.24%，吸煙患者29.63%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；年齡、病理學(xué)分期EGFR基因突變率區(qū)別差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。腺癌患者EGFR基因突變率顯著高于其他類型肺癌(P<0.05)；ALK基因表達(dá)在不同性別、年齡、病理學(xué)分化程度，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。其Ⅳ期患者ALK基因突變率較其他期患者高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。EGFR、ALK基因檢出率、陽性率比較，觀察組較對照組高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，觀察組檢測出平均腫瘤細(xì)胞個數(shù)多于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。對照組并發(fā)癥總發(fā)生率高于觀察組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論EGFR、ALK基因粗針檢出率高于細(xì)針檢出率，但細(xì)針檢出率仍有一定臨床診斷意義，且并發(fā)癥發(fā)生發(fā)生率低于粗針，可以根據(jù)患者實際情況進(jìn)行選擇不同的針型，均具有一定的臨床診斷價值。

肺癌；基因突變；活檢；表皮生長因子受體；間變淋巴瘤激酶

肺癌在我國的發(fā)病率居高不下，近年來更呈現(xiàn)出明顯的上升趨勢[1]。其中80%以上的肺癌發(fā)病類型為非小細(xì)胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)，其主要包括腺癌、鱗癌等，腺癌是其中較為常見的病理組織類型，患者確診時多已出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移病灶，晚期患者5年生存率只有15%[2]。通過對NSCLC相關(guān)驅(qū)動基因的深入研究、分子靶向治療研究的不斷深入，人們發(fā)現(xiàn)靶向藥物治療的臨床效果顯著。目前的針對性治療的分子靶向藥物多為酪氨酸激酶抑制劑(tyrosine kinase inhibitor,TKIs)及克唑替尼(crizotinib)，其主要作用于表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)及間變淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)，臨床效果優(yōu)異[3]。臨床上應(yīng)用CT引導(dǎo)下經(jīng)皮肺穿刺活檢術(shù)用于診斷肺部疾病已經(jīng)十分常見。常用的有細(xì)針穿刺、粗針穿刺活檢術(shù)，由于該術(shù)式為創(chuàng)傷性輔助檢查，臨床上并發(fā)癥發(fā)生率較高，而從實用角度來講，針對何種情況下使用臨床并發(fā)癥較小的細(xì)針穿刺術(shù)式成為臨床診斷關(guān)注的重點。本研究旨在對NSCLC患者行CT引導(dǎo)下檢測EGFR與ALK基因突變與臨床病理表現(xiàn)之間的內(nèi)在關(guān)系及粗/細(xì)針穿刺活檢的臨床應(yīng)用價值進(jìn)行分析，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年1月至2015年2月于鄂東醫(yī)療集團(tuán)黃石市中心醫(yī)院臨床確診的肺癌患者280例，保留CT引導(dǎo)下穿刺活檢標(biāo)本。對照組(n=80)采用CT引導(dǎo)下的細(xì)針穿刺活檢術(shù)，其中男44例，女36例；年齡22～72歲，平均年齡(58.1±7.8)歲，中位年齡59歲。觀察組(n=200)采用同樣CT引導(dǎo)下粗針穿刺活檢術(shù)，其中男130例，女70例；年齡28～80歲，平均年齡(60.2±8.2)歲，中位年齡60歲。所有納入研究患者術(shù)前未進(jìn)行放化療及靶向治療，且知情同意進(jìn)行臨床研究。

1.2 穿刺方法 對照組使用Cook 19G型同軸活檢針進(jìn)行穿刺，觀察組使用BioPince 17G全自動活檢針行活檢穿刺術(shù)。2組穿刺所獲得的腫瘤長度在1 cm左右，能夠滿足實驗室診斷要求。

1.3 檢測方法 EGFR基因突變檢測采用ARMS方法對CT引導(dǎo)下穿刺活檢標(biāo)本進(jìn)行：樣本HE切片后經(jīng)經(jīng)驗豐富的病理科醫(yī)生選擇合適的基因檢測的區(qū)域做成石蠟切片10～15張，層厚控制在5 μm左右，并用二甲苯對樣本進(jìn)行脫蠟處理，經(jīng)無水乙醇液浸泡后沖洗烘干備用，隨后離心提取樣本DNA。采用EGFR檢測試劑盒(廈門愛德生物醫(yī)藥科技有限公司生產(chǎn))檢測18～21外顯子突變情況。將提取后的DNA稀釋，加入2.25 μl Taq酶，搖勻后離心，加入PCR試管，設(shè)置參數(shù)為：1個循環(huán)95℃、5 min，15個循環(huán)95℃、25 s，64℃、20 s，72℃、20 s；再重復(fù)15個循環(huán)后手機(jī)FAM、HEX信號； ALK融合基因采用VENTANA ALK(D5F3)免疫組化方法進(jìn)行檢測，分析腫瘤細(xì)胞數(shù)量，計數(shù)采集100個完整細(xì)胞，其中出現(xiàn)15個以上異常細(xì)胞即為陽性。

1.4 結(jié)果判讀 在檢測前通過普通光鏡對標(biāo)本HE切片腫瘤細(xì)胞數(shù)量、有核細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行計數(shù)。所有數(shù)值判讀均由兩位病理科醫(yī)生獨立判讀記錄，對結(jié)果不一致的樣本進(jìn)行協(xié)商或由第三方進(jìn)行判讀。

2 結(jié)果

2.1 2組基因突變情況與病理特點關(guān)系比較 女性患者EGFR基因突變率為66.04%顯著高于男性基因突變患者28.74%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，非吸煙患者EGFR基因突變率為57.24%明顯高于吸煙患者29.63%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；年齡、分期基因突變率區(qū)別差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。組織學(xué)類型比較可以看出腺癌患者EGFR基因突變率顯著高于其他類型肺癌(P<0.05)；ALK基因表達(dá)與性別、年齡、病理學(xué)分化程度無顯著相關(guān)性，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。18例ALK基因突變腺癌患者均未吸煙，Ⅳ期患者ALK基因突變率較其他期患者高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 2組EGFR、ALK基因突變與病理關(guān)系比較 例

2.2 2組陽性檢出情況比較 CT引導(dǎo)下穿刺活檢EGFR基因，觀察組(45.50%)較對照組(25.00%)檢出率高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，陽性檢出率分別為6.25%、21.00%，觀察組高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。觀察組檢測出腫瘤細(xì)胞平均為(52.64±24.23)個，高于對照組(37.66±14.43)個，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。EGFR及ALK基因檢測陽性率觀察組均占優(yōu)(P<0.05)。見表2、3。

表3 2組活檢陽性率比較 例(%)

2.3 2組患者術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生情況比較 觀察組氣胸20例(10.00%)、滲血29例(14.50)、咯血10例(5.00%)而對照組為氣胸3例(3.75%)、2例滲血(2.50%)，無咯血病例，2組并發(fā)癥總發(fā)生數(shù)比較，細(xì)針穿刺活檢術(shù)優(yōu)于粗針，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 2組并發(fā)癥發(fā)生情況比較 例(%)

3 討論

NSCLC患者中EGFR基因突變率一般為50%左右，且主要發(fā)生突變的人群以亞裔血統(tǒng)、女性、無吸煙史、腺癌患者居多。大量研究報道，表皮生長因子受體(EGFR)屬于酪氨酸激酶受體的一種，在多數(shù)的NSCLC患者中表達(dá)上調(diào)，能夠作為治療NSCLC的一個重要靶點[4-8]。其靶點作用藥物酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-TKI)能夠有效提高晚期NLCLC患者臨床治療效果并提高患者生存時間，臨床有效率可達(dá)70%～80%，無進(jìn)展生存期可以達(dá)到9個月～1年，但其生物活性常具有一定的局限性，患者在20號外顯子、K-Ras突變或c-Met基因擴(kuò)增都會導(dǎo)致耐藥性的產(chǎn)生[9]。

現(xiàn)代研究證實，NSCLC中ALK基因可能發(fā)生重排現(xiàn)象，單純ALK 基因重排發(fā)生率可達(dá)3%以上[10]。ALK基因突變患者于EGFR突變患者病理特征相近，臨床上常用克唑替尼作為針對性治療藥物，對于單純ALK基因重排患者，其藥物有效率可以達(dá)50%以上。

CT引導(dǎo)下的經(jīng)皮肺穿刺活檢術(shù)，具有創(chuàng)口較小、操作簡潔、并發(fā)癥發(fā)生率低等特點，現(xiàn)已作為臨床上組織活檢的重要應(yīng)用術(shù)式之一。通過肺部穿刺活檢，能夠針對臨床晚期NSCLC患者進(jìn)行有效診斷，在獲取一定的生物標(biāo)本后能夠進(jìn)一步對基因突變類型進(jìn)行研究，為下一步靶向藥物治療提供依據(jù)。與開放性手術(shù)取樣比較，穿刺活檢術(shù)的局限性表現(xiàn)在活檢標(biāo)本中有效研究細(xì)胞數(shù)目相對含量低、數(shù)目少，因此研究合適的穿刺針型、合適的活檢方法能夠為提高檢出陽性率提供一定依據(jù)。本研究中，2組患者CT引導(dǎo)下的穿刺活檢術(shù)均取得了較為滿意的效果。

從研究結(jié)果可以看出，EGFR基因突變與臨床病理特征的較強(qiáng)的相關(guān)性。臨床研究中，常用的基因突變檢測方法有DNA測序、ARMS、PCR-SSCP、mutant-enriched PCR、CE-LIF等，其中探針擴(kuò)增阻滯突變系統(tǒng)(ARMS)是將ARMS與Scorpions相結(jié)合的高校檢測EGFR突變的技術(shù)。已有相關(guān)研究將該方法應(yīng)用于NSCLC患者EGFR突變檢測，其總檢出率可在50%左右[11，12]。本研究中，共檢測到120例患者有EGFR突變基因表達(dá)，其突變率能夠達(dá)到42.86%；相關(guān)資料表明，不同種族、生活方式的突變率相差較大，其中有亞裔血統(tǒng)的患者突變率較歐美人種高出20%，而當(dāng)中中國人群NSCLC患者EGFR突變率相對值更高[13]。研究結(jié)果顯示，EGFR基因突變率女性患者明顯高于男性患者(25.00%，17.86%，χ2=35.92，P<0.05)；非吸煙患者突變率顯著高于吸煙患者(28.57%，14.29%，χ2=17.60，P<0.05)；腺癌基因突變率(37.50%，χ2=46.37，P<0.05)顯著高于其他組織學(xué)類型肺癌。而研究中EGFR基因突變率變化與患者年齡及病理分期無顯著相關(guān)性，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，所得結(jié)論與國內(nèi)外研究結(jié)果相近[14]。

ALK是一種受體類酪氨酸激酶，屬胰島素受體族系，在NSCLC中，ALK重排發(fā)生率為3%～7%，部分研究證實，EML4-ALK融合基因與EGFR相似均為NSCLC驅(qū)動基因之一[15]。本研究中，18例ALK基因陽性患者均無吸煙史且組織學(xué)分型均為腺癌。且沒有發(fā)現(xiàn)ALK基因表達(dá)與性別、年齡、分化類型呈相關(guān)性(P>0.05)，可以考慮與ALK基因表達(dá)陽性檢出者較少有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，無吸煙史患者較吸煙患者ALK基因表達(dá)率高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=12.62，P<0.05)，Ⅳ期患者突變率較非Ⅳ期患者顯著升高(χ2=21.68，P<0.05)，其主要與晚期患者無法進(jìn)行手術(shù)治療，活檢穿刺為其病理檢查首選相關(guān)。

研究結(jié)果顯示，觀察組EGFR、ALK基因突變檢出率高于對照組(χ2=11.77、28.46，P<0.05)，陽性率比較觀察組亦占優(yōu)(χ2=9.20、7.88，P<0.05)，觀察組檢出率高可能與檢出平均腫瘤細(xì)胞數(shù)量較對照組多有關(guān)。2組術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生情況比較可以看出，觀察組并發(fā)癥總發(fā)生率為29.50%，對照組并發(fā)癥總發(fā)生率為6.25%。細(xì)針穿刺活檢術(shù)優(yōu)于粗針，其差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=16.22，P<0.05)。

從研究所得數(shù)據(jù)可以看出，EGFR基因及ALK基因檢出率相比，粗針活檢穿刺檢出率高于細(xì)針，但細(xì)針仍有一定的病理學(xué)診斷作用，對于晚期NSCLC患者，如創(chuàng)傷面較大可能會影響預(yù)后，因此CT引導(dǎo)下細(xì)針穿刺活檢仍有一定的適用范圍。

綜上所述，在實際臨床病理學(xué)診斷中，行CT引導(dǎo)下穿刺活檢術(shù)，常規(guī)角度來講，粗針活檢檢測陽性檢出率較高，但并發(fā)癥發(fā)生率較高，而細(xì)針雖然有一定的局限性，但操作過程中注意進(jìn)針方向、實施多點穿刺，在足夠病理學(xué)標(biāo)本的基礎(chǔ)上，提高腫瘤細(xì)胞包含量，可以增加基因檢測的準(zhǔn)確性，具有一定的臨床應(yīng)用價值。

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Clinical significance of detection of EGFR and ALK genes by CT guided puncture biopsy

HUXiaofei*,WANGJun,WANGGangsheng*.

*CentralHospitalofE’dongMedicalGroup,AffiliatedHospitalofHubeiCollegeofScienceandEngineering,Hubei,Huangshi435000,China

Objective To observe the detection rate and positive rate of epidermal growth factor receptor (EGFR) and anaplastic lymphoma kinase (ALK) gene by lung cancer puncture biopsy under CT guidance, and to analyze its clinical application value.Methods Two hundred and eighty specimens from the patients with lung cancer who were treated in our hospital from January 2013 to February 2015 were taken by CT guided puncture biopsy,which were divided into two groups:observation group (n=200,thick needle puncture) and control group (n=80,thin needle puncture).The clinicopathological characteristics, gene mutation correlation,positive rate, detection rate,tumor cell number and postoperative complications were observed and compared between two groups. Results The gene mutation rate of EGFR in female patients was 66.04%,however, which was 28.74% in male patients,there was a significant difference between two groups (P<0.05). Moreover there was a significant difference in gene mutation rate of EGFR between non-smoking patients and smoking patients (57.24% vs 29.63%,P<0.05).However there were no significant differences in patien’s age,pathological staging,gene mutation rate of EGFR between two groups (P>0.05).The gene mutation rate of EGFR in patients with lung adenocarcinoma was significantly higher than that in the patients with the other types of lung carcinomas (P<0.05). There were no significant differences in the expression levels of ALK among different sex and age, pathological differentiation degree (P>0.05), in which the gene mutation rate of ALK in patients at stage Ⅳ was significantly higher than that in the patients at the other stages (P<0.05). The detection rate and positive rate of EGFR,ALK in observation group were significantly higher than those in control group (P<0.05).The average tumor cell numbers detected in observation group were much more than those in control group (P<0.05).Besides the total incidence rates of postoperative complications in observation group were significantly higher than those in control group (P<0.05).Conclusion The detection rates of EGFR,ALK gene by thick needle puncture biopsy are higher than those by thin needle puncture biopsy, however, thin needle puncture biopsy has still certain clinical significance, moreover,the incidence rates of postoperative complications in thin needle puncture biopsy are lower than those in thick needle puncture biopsy,thus, both detection methods have certain clinical diagnostic value.

lung cancer;gene mutation; biopsy;epidermal growth factor receptor;anaplastic lymphoma kinase

10.3969/j.issn.1002-7386.2016.24.004

項目來源：湖北省衛(wèi)生和計劃生育委員會(編號：WJ2015MB278)

435000 湖北省黃石市，鄂東醫(yī)療集團(tuán)黃石市中心醫(yī)院(湖北理工學(xué)院附屬醫(yī)院)腫瘤內(nèi)科(胡曉菲、王鋼勝)；武漢科技大學(xué)附屬漢陽醫(yī)院婦科(汪俊)

汪俊，435000 武漢市，武漢科技大學(xué)附屬漢陽醫(yī)院婦科；

E-mail：451818725@qq.com

R 734.2

A

1002-7386(2016)24-3700-04

2016-07-13)