固相萃取-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測定蔥姜蒜中12種農(nóng)藥殘留量

梅文泉，陳興連，汪祿祥，邵金良，耿慧春，王 麗

(云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所 農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心， 云南 昆明 650223)

固相萃取-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測定蔥姜蒜中12種農(nóng)藥殘留量

梅文泉，陳興連，汪祿祥，邵金良，耿慧春，王 麗

(云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所 農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心， 云南 昆明 650223)

建立了固相萃取-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法同時測定蔥姜蒜中12種農(nóng)藥殘留量的方法。試樣經(jīng)乙腈提取后，采用氟羅里硅土固相萃取小柱凈化，然后用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法對12種農(nóng)藥進行定量分析。結(jié)果表明，采用氟羅里硅土固相萃取小柱凈化，能有效去除蔥姜蒜樣品中的色素、油脂等雜質(zhì)，凈化后得到的樣液清亮、透明。12種農(nóng)藥在0.005～0.22 mg/kg添加水平下的回收率為81.0 %～120 %，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.33 %～16.2 %，12種農(nóng)藥檢出限為0.003～0.05 mg/kg。

蔥；姜；蒜；農(nóng)藥；殘留；測定

測定蔬菜中的有機氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留常用的方法有GB/T 5009.19-2008[1]、NY/T 761-2008[2]和GB/T 5009.110-2003[3]等，以上方法均為氣相色譜-電子捕獲檢測器測定法。蔥姜蒜是較為特殊的樣品，用以上方法測定蔥姜蒜中的12種有機氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留時，由于蔥姜蒜中的特殊化合物與有機氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥性質(zhì)相似，會對電子捕獲檢測器的測定產(chǎn)生干擾,影響對12種農(nóng)藥進行正常測定[4]。2014年開始，中華人民共和國農(nóng)業(yè)部在全國范圍內(nèi)對蔥姜蒜中包括上述12種有機氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留進行專項例行監(jiān)測。因此建立一種簡單、快速、準(zhǔn)確、適用的測定蔥姜蒜中12種有機氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留的方法非常必要。蔥姜蒜樣品基質(zhì)復(fù)雜，含有較多的色素、油脂等雜質(zhì)，必須對其進行凈化處理才能上機測定。有關(guān)有機氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留測定方法有氣相色譜法[5-7]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[8-11]、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[12-14]等。文章在參考上述文獻的基礎(chǔ)上，采用乙腈提取，氟羅里硅土固相萃取小柱凈化，12種農(nóng)藥經(jīng)HP-5MS石英毛細(xì)管柱分離后用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法同時測定。通過反復(fù)試驗，優(yōu)化了氣相色譜-質(zhì)譜條件，建立了蔥姜蒜中12種有機氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留的測定方法。12種農(nóng)藥選擇離子質(zhì)量色譜圖峰形好；同時以色譜保留時間和選擇離子豐度比定性，大大消除了蔥姜蒜樣品中雜質(zhì)的干擾，使定性更準(zhǔn)確。方法凈化效果好，回收率、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差及檢出限令人滿意，可應(yīng)用于蔥姜蒜中12種有機氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留的測定。

表1 GC/MS-SIM法分析12種農(nóng)藥的保留時間、采集時間和監(jiān)測離子

注：表1括號中的數(shù)字為離子豐度比。

Notes: Numbers in brackets represented ion abundance ratio.

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

美國熱電公司TRACE GC ULTRA -DSQ氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，帶電子轟擊電離離子源(EI)，TriPlus自動進樣器，化學(xué)工作站。

氟羅里硅土固相萃取小柱：色譜科產(chǎn)品,Florisil，1000 mg/6 mL；乙腈為分析純；丙酮和正己烷為色譜純。

12種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品為α-666、β-666、γ-666、五氯硝基苯、δ-666、乙烯菌核利、三唑酮、二甲戊靈、腐霉利、蟲螨腈、pp'-DDE、pp'-DDD。濃度均為1000 μg/mL，購于農(nóng)業(yè)部天津環(huán)境保護科研監(jiān)測所。

1.2 氣相色譜-質(zhì)譜條件

色譜柱為Agilent HP-5MS石英毛細(xì)管柱(30 m×0.32 mm× 0.25 μm)；進樣口溫度250 ℃，載氣為純度大于或等于99.999 %的氦氣，載氣流量1.2 mL/min。柱箱溫度：初溫50 ℃，保留1 min,以30 ℃/min升至150 ℃，再以5.0 ℃/min升至250 ℃，再以20 ℃/min升至280 ℃，保留5 min；進樣量1 μL，不分流進樣。傳輸線溫度280 ℃，電離方式為電子轟擊電離(EI)，電離能量70 ev，離子源溫度230 ℃，運行24 min后關(guān)閉燈絲電流。掃描模式為選擇離子掃描(SIM)。取單個標(biāo)樣確定各種農(nóng)藥的保留時間。GC/MS-SIM法分析12種農(nóng)藥保留時間、采集時間和監(jiān)測離子見表1。

1.3 樣品制備

1.3.1 提取 蔥姜蒜樣品搗碎，稱取15.00 g樣品置于150 mL錐形瓶中，加30 mL乙腈,在勻漿機中勻漿提取1.0～1.5 min。勻漿好的樣品過濾到預(yù)先加入約5 g NaCl 的100 mL具塞量筒內(nèi)。過濾后量筒蓋上蓋子，充分振搖1 min后靜置10 min。吸取上層乙腈相10 mL，置于100 mL燒杯中，將燒杯置于水浴鍋(80 ℃)上，向燒杯中通入氮氣，吹至乙腈還有2～3滴時即取出，使剩余乙腈在室溫下自然揮發(fā)完全，在燒杯中加入2 mL丙酮+正己烷(10+90)溶解樣品，待凈化。

1.3.2 凈化 氟羅里硅土固相萃取小柱置于150 mL平底燒瓶(濃縮瓶)瓶口上，用6 mL丙酮/正己烷(10∶90)淋洗小柱，棄淋洗液。將燒杯中的樣液加到小柱上，待樣液下降到SPE小柱底部圓盤時，用6 mL丙酮/正己烷(10∶90)洗脫，待洗脫液下降到SPE小柱底部圓盤時用洗耳球吹出留存在SPE小柱填料中的殘液。承接于濃縮瓶的樣液、洗脫液待濃縮。

1.3.3 濃縮 將平底燒瓶置于40 ℃旋轉(zhuǎn)真空蒸發(fā)器上濃縮樣品，濃縮干后取出平底燒瓶，待平底燒瓶冷卻至室溫后，用移液管準(zhǔn)確吸取5.00 mL正己烷放入平底燒瓶中，輕搖晃動充分溶解樣品，將樣品溶液倒入樣品瓶中上機測定。

1.4 蔥姜蒜中農(nóng)藥含量計算公式

蔥姜蒜中農(nóng)藥含量按下面公式計算:

表2 12種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

式中：X——蔥姜蒜中農(nóng)藥的含量，單位為mg/kg；m1——稱樣量(g)；c——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的農(nóng)藥濃度(μg/mL)；V1——定溶體積(mL)；V2——分取體積(mL)；V3——最后定容體積(mL)。

本實驗條件：V1為30 mL；V2為10 mL；V3為5 mL；m1為15 g。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別取濃度為1000 μg/mL的12種標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL，用正己烷定容至50 mL，即配成濃度為40 μg/mL的單標(biāo)貯備液。該貯備液置于棕色貯液瓶于4 ℃冰箱中保存。根據(jù)12種農(nóng)藥在質(zhì)譜上的響應(yīng)情況，按表2配制12種農(nóng)藥的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.6 12種農(nóng)藥在蔥姜蒜中的添加回收率、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差及方法檢出限的測定

稱取不含12種農(nóng)藥殘留的蔥姜蒜樣品各4份，每份15.00 g，其中1份為對照，另外3份均加入按1.5配置的12種混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.94 mL，使樣品中12種農(nóng)藥的含量分別為α-666 0.10 mg/kg，β-666 0.125 mg/kg，γ-666 0.05 mg/kg，五氯硝基苯 0.15 mg/kg，δ-666 0.22 mg/kg，乙烯菌核利 0.12 mg/kg，三唑酮 0.20 mg/kg，二甲戊靈 0.20 mg/kg，腐霉利 0.20 mg/kg，蟲螨腈 0.20 mg/kg，pp'-DDE 0.05 mg/kg，pp'-DDD 0.20 mg/kg。充分混勻放置30 min后按1.4步驟進行處理，測定方法回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

為消除蔥姜蒜基質(zhì)對測定結(jié)果的影響，分別以不含待測農(nóng)藥的蔥姜蒜基質(zhì)溶液作為溶劑來配制標(biāo)準(zhǔn)溶液。

方法檢出限根據(jù)獲得的色譜圖按信噪比10倍條件計算。

2 結(jié)果與分析

2.1 選擇離子色譜圖

2.1.1 12種農(nóng)藥標(biāo)樣選擇離子色譜圖 12種農(nóng)藥標(biāo)樣選擇離子色譜圖見圖1。

2.1.2 蔥姜蒜樣品空白選擇離子色譜圖 蔥樣品空白選擇離子色譜圖見圖2；姜樣品空白選擇離子色譜圖見圖3；蒜樣品空白選擇離子色譜圖見圖4。

由圖1～3可以看出，蔥樣品空白選擇離子色譜圖背景較為干凈；姜在10 min左右有一些雜峰；而蒜樣品空白有較多的基質(zhì)雜峰。實際測定過程中采用基質(zhì)配標(biāo)的方法，即分別以不含待測農(nóng)藥的蔥姜蒜基質(zhì)溶液作為溶劑來配制標(biāo)準(zhǔn)溶液，可以一定程度上消除基質(zhì)干擾，使結(jié)果更準(zhǔn)確。

2.1.3 蔥姜蒜中添加12種農(nóng)藥選擇離子色譜圖 按1.6在蔥姜蒜中添加12種農(nóng)藥，添加后按1.3處理樣品，上機測定。蔥樣品中添加12種農(nóng)藥選擇離子色譜圖見圖5； 姜樣品中添加12種農(nóng)藥選擇離子色譜圖見圖6；蒜樣品中添加12種農(nóng)藥選擇離子色譜圖見圖7。

2.2 不同洗脫體積對測定12種農(nóng)藥回收率的影響

在大蒜樣品中添加12種農(nóng)藥然后按1.3處理樣品。樣品凈化過程中分別采用3.0、6.0、9.0、12.0、15.0和18 mL丙酮+正己烷(1+9)作為洗脫液進行試驗，測定12種農(nóng)藥經(jīng)氟羅里硅土固相萃取小柱凈化后的峰面積見表3。

由表3可見，采用6.0、12.0、18.0和24.0 mL作為洗脫劑，每種農(nóng)藥的峰面積變化都不大?？紤]到節(jié)省試劑和減小有機溶劑可能對環(huán)境造成的污染，試驗用6.0 mL丙酮+正己烷(1+9)對12種農(nóng)藥進行洗脫。

1.α-666，2.β-666， 3.γ-666， 4.五氯硝基苯， 5.δ-666， 6.乙烯菌核利， 7.三唑酮，8.二甲戊靈，9.腐霉利， 10.pp'-DDE，11.蟲螨腈，12.pp'-DDD1.α- HCH，2.beta-HCH， 3.gamma-HCH， 4.quintozene， 5.delta- HCH，6.vinclozolin，7.Triadimefon，8.Pendimethalin，9.Procymidone，10.4,4’-DDE，11.chlorfenapyr， 12.4,4’-DDD圖1 12種農(nóng)藥標(biāo)樣選擇離子色譜圖Fig.1 The SIM chromatogram of 12 pesticide standards

圖2 蔥樣品空白選擇離子色譜圖Fig.2 The background SIM chromatogram of onion sample

圖3 姜樣品空白選擇離子色譜圖Fig.3 The background SIM chromatogram of ginger sample

圖4 蒜樣品空白選擇離子色譜圖Fig.4 The background SIM chromatogram of garlic

圖5 蔥樣品中添加12種農(nóng)藥選擇離子色譜圖Fig.5 The SIM chromatogram of 12 pesticides adding in onion

圖6 姜樣品中添加12種農(nóng)藥選擇離子色譜圖Fig.6 The SIM chromatogram of 12 pesticides adding in ginger

圖7 蒜樣品中添加12種農(nóng)藥選擇離子色譜圖Fig.7 The SIM chromatogram of 12 pesticides adding in garlic

2.3 方法靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度的測定

按1.6測定12種農(nóng)藥在蔥姜蒜中的添加回收率、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差及方法檢出限，結(jié)果見表4。

由表4可以看出，12種農(nóng)藥平均回收率為81.0 %～120 %，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差2.33 %～16.2 %，檢出限0.003～0.05 mg/kg。

3 討 論

建立了采用氟羅里硅土固相萃取小柱(Florisil SPE)對蔥姜蒜樣品進行凈化，然后用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測定蔥姜蒜中12種農(nóng)藥殘留量的方法。結(jié)果表明，采用氟羅里硅土固相萃取小柱凈化，能有效去除蔥姜蒜樣品中的色素、油脂等雜質(zhì)，凈化后得到的樣液清亮、透明。在優(yōu)化的色譜-質(zhì)譜條件下，測定12種農(nóng)藥所獲得的添加回收率、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差及檢出限可滿足農(nóng)藥殘留檢測中對準(zhǔn)確度、精密度和靈敏度的要求[15-16]；方法所使用的有機溶劑種類和用量少，操作簡單、快速，具有應(yīng)用價值。應(yīng)用文章方法對采自農(nóng)貿(mào)市場和超市的40余份蔥姜蒜樣品中12種農(nóng)藥殘留進行了測定，結(jié)果令人滿意。

表3 不同洗脫體積對測定12種農(nóng)藥峰面積的影響

表4 12種農(nóng)藥在蔥姜蒜中的回收率、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差及檢出限測定結(jié)果

注：*為3次測定的平均值；RSD：相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

Notes：* meant the average of 3 repeats;RSD：Relative standard deviation.

[1]GB/T 5009.19-2008.食品中有機氯農(nóng)藥多組分殘留量的測定[S].

[2]NY/T 761-2008.蔬菜和水果中農(nóng)藥多殘留檢測方法[S].

[3]GB/T 5009.146-2003.食品中有機氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥多種殘留測定方法[S].

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(責(zé)任編輯 王家銀)

Determination of 12 Pesticide Residues in Onion, Ginger and Garlic by GC/MS-SPE

MEI Wen-quan, CHEN Xing-lian, WANG Lu-xiang, SHAO Jin-liang, GENG Hui-chun, WANG Li

(Quality Standardizing and Testing Technology Institute, Yunnan Academy of Agricultural Science, Supervision & Testing Center for Farm Products Quality, Ministry of Agriculture, Yunnan Kunming 650223,China)

The method for determination of 12 pesticide residues in onion, ginger and garlic was developed. The samples were extracted by acetonitrile, purified with florisil solid phase extraction, and quantified the 12 pesticides by GC/MS. The results showed that it could remove the impurities of pigment, lipid in sample using florisil solid phase extraction. The sample solution after purified was clear and translucent. Under these conditions, the average recoveries of 12 pesticides ranged from 81.0 % to 120 % at spiked level of 0.05-0.22 mg/kg, and the relative standard deviations were 2.33 %-16.2 %. The detection limit of 12 pesticides ranged from 0.003 mg/kg to 0.05 mg/kg.

Onion; Ginger; Garlic; Pesticide; Residues; Determination

1001-4829(2016)09-2138-06

10.16213/j.cnki.scjas.2016.09.022

2014-07-11

云南省科技創(chuàng)新平臺建設(shè)計劃項目云南省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測平臺(2014DA001);云南省創(chuàng)新團隊計劃項目(2015HC025)

梅文泉(1963-)，男，研究員，主要從事食品安全檢測研究工作，E-mail:wenquan_mei@hotmail.com。

O657.63

A