卵黃抗體的特性及在水禽疾病防治上的應(yīng)用

于新友　李天芝

摘要：卵黃抗體是禽類經(jīng)特異性抗原刺激由B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生并移行至卵黃中的特異性抗體。卵黃抗體具有制作簡(jiǎn)單方便、性質(zhì)穩(wěn)定、產(chǎn)量高，成本低等多種優(yōu)點(diǎn)，在動(dòng)物的疾病診斷、治療、預(yù)防等方面有著廣泛的應(yīng)用。本文就卵黃抗體的特性及在水禽疾病防治中的應(yīng)用情況進(jìn)行綜述。

關(guān)鍵詞：卵黃抗體；水禽疾?。环乐?；應(yīng)用

卵黃抗體（IgY）又稱卵黃免疫球蛋白，是禽類經(jīng)特異性抗原刺激由B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生并移行至卵黃中的特異性抗體。1893年，Klemperer首次報(bào)道了雞卵黃中富含抗體，1969年，Leslie和Clem將這種抗體命名為IgY，此后，各國(guó)學(xué)者就卵黃抗體不斷進(jìn)行深入研究，卵黃中IgY的濃度很高，而其它免疫球蛋白在卵黃里的含量很少，可以忽略不計(jì)。IgY具有強(qiáng)大的免疫功能。并具有穩(wěn)定性強(qiáng)、耐酸性、耐高溫、特異性強(qiáng)、制備簡(jiǎn)單、成本低、適宜規(guī)?；a(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)，目前卵黃抗體己被廣泛應(yīng)用于畜禽疾病的防治中，符合目前我國(guó)大陸地區(qū)的畜禽養(yǎng)殖條件與實(shí)際狀況，具有非常廣闊的應(yīng)用前景。本文綜述了卵黃抗體的特性及在水禽疾病防治中的應(yīng)用研究情況。

1.卵黃抗體的特性

1.1卵黃抗體的結(jié)構(gòu)特點(diǎn) IgY分子量為180kD，其結(jié)構(gòu)與IgE類似，同樣由兩條重鏈（H鏈）與兩條輕鏈（L鏈）組成，重鏈由1個(gè)可變區(qū)（V）與4個(gè)恒定區(qū)（Cul Cv4）組成，分子量為67-70kD，輕鏈分子量為22-30kD。IgY與IgG相比沒有鉸鏈結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)更為穩(wěn)定，與IgG相比IgY疏水性更強(qiáng)，這與IgY存在于脂類含量較高卵黃內(nèi)的環(huán)境中是相對(duì)應(yīng)的。Igy等電點(diǎn)在pH值5.7-7.6之間。

1.2卵黃抗體的優(yōu)勢(shì)

1.2.1產(chǎn)量高、成本低、便于規(guī)模化生產(chǎn) 卵黃抗體是從雞蛋中提取的，一枚蛋可獲得50～100mg IgY，其中2%-10%為特異性抗體，平均1只雞每年可得到22500mg抗體，產(chǎn)量比較高。1只蛋雞每周的抗體產(chǎn)量相當(dāng)于9～10只鴨子的抗體產(chǎn)量。而且飼養(yǎng)母雞也比較方便，其所產(chǎn)的蛋具有均一性好、收集方便快捷以及價(jià)格價(jià)格便宜等優(yōu)點(diǎn)，卵黃中沒有其他的免疫球蛋白，純度相對(duì)較高，提取抗體的技術(shù)已經(jīng)成熟，可以進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)、提純方便，并在制備卵黃抗體時(shí)，不需要采集動(dòng)物血液，不會(huì)對(duì)動(dòng)物造成任何損傷，符合動(dòng)物保護(hù)原則的要求。

1.2.2理化性質(zhì)穩(wěn)定 穩(wěn)定性好、耐酸堿，4℃條件下，甚至可保存5～10年，其抗體活性無顯著損失，在室溫條件下，可保持抗體活性半年不變，37℃條件下，也可保持活性1個(gè)月。65℃時(shí)可以保持24h以上；在70℃時(shí)，當(dāng)加熱90min后，卵黃抗體的活性才會(huì)發(fā)生明顯的下降。IgY在pH值4～11時(shí)IgY能保持穩(wěn)定，活性幾乎不變，低于pH3.0時(shí)活性迅速下降。IgY耐高滲、耐高壓，60%濃度的蔗糖溶液中仍有活性，4000kg/cm2高壓下，仍可保持活性。IgY還有耐反復(fù)凍融的特性。卵黃抗體對(duì)胃蛋白酶抵抗力較強(qiáng)，能抵抗幼齡動(dòng)物腸道中胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的消化。這些特性使IgY的生產(chǎn)、加工、貯存、攝取及消化過程中維持其結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定和發(fā)揮生物學(xué)作用具有重要意義。

1.2.3治療效果好，無副作用 用卵黃抗體治療畜禽疾病時(shí)起作用快，效果好，對(duì)病原的特異性強(qiáng)，病原不會(huì)產(chǎn)生耐藥性，不會(huì)產(chǎn)生繼發(fā)感染的現(xiàn)象，有可能替代抗生素用于畜禽疾病的治療，安全可靠，無毒副作用和不良反應(yīng)，當(dāng)IgY與病原發(fā)生作用后，殘留部分會(huì)被機(jī)體視為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)分解掉。

IgY作為一種優(yōu)質(zhì)蛋白源，對(duì)畜禽還有一定的促生長(zhǎng)作用。

1.3卵黃抗體的作用機(jī)理 IgY抗菌的機(jī)理主要是IgY能粘附于細(xì)菌的細(xì)胞壁，破壞細(xì)菌的完整性，從而抑制菌的生長(zhǎng)繁殖，也可以直接粘附于菌毛上和鞭毛上，使其不能粘附于腸上皮細(xì)胞，阻礙細(xì)菌擴(kuò)散、運(yùn)動(dòng)。Igy還能與細(xì)菌毒素發(fā)生中和反應(yīng)，減輕細(xì)菌毒素對(duì)動(dòng)物機(jī)體的損傷。IgY抗病毒的機(jī)理主要是IgY與病毒顆粒表面多個(gè)受體結(jié)合時(shí)會(huì)破壞病毒的結(jié)構(gòu)，影響病毒膜與細(xì)胞表面的融合，抑制病毒核酸在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制。lgY也可以粘附于病毒衣殼上，抑制病毒的生長(zhǎng)繁殖。此外，部分IgY在腸道消化酶作用下，降解為容易被腸道吸收的可變小劇，這些小肽都含有抗體末端，易被腸道吸收，進(jìn)入血液后能與特定的病原粘附因子結(jié)合，使病原失去致病性，保護(hù)易感細(xì)胞免受病原的粘附和破壞。

2.卵黃抗體在水禽疾病防治上的應(yīng)用

2.1卵黃抗體在小鵝瘟防治上的應(yīng)用 小鵝瘟是由小鵝瘟病毒引起的雛鵝的一種急性或亞急性敗血性傳染病，要危害3-20日齡小鵝，特別是10日齡之內(nèi)的雛鵝，傳播速度快，發(fā)病率和死亡率高達(dá)100%，臨床表現(xiàn)為下痢、腿癱瘓、精神萎靡、食欲廢絕，給世界養(yǎng)鵝業(yè)造成了嚴(yán)重的損失。由于小鵝瘟主要危害雛鴨，而雛鵝的免疫功能未完全發(fā)育成熟，疫苗免疫效果不理想，種鵝接種疫苗后會(huì)產(chǎn)生應(yīng)激，產(chǎn)蛋下降，且因個(gè)體差異、飼養(yǎng)管理等因素的影響，母源抗體參差不齊。因此，利用卵黃抗體進(jìn)行被動(dòng)免疫來防治是非常有效的方法。藏玉婷等將實(shí)驗(yàn)室試制的3批小鵝瘟卵黃抗體，瓊擴(kuò)效價(jià)為1：16，分別稀釋成瓊擴(kuò)效價(jià)為1.4、1：8，分別按每只0.5ml接種3日齡易感雛鵝，24h后，試驗(yàn)組與對(duì)照組攻擊小鵝瘟病毒。結(jié)果顯示：雛鵝注射相同劑量不鬧瓊擴(kuò)效價(jià)的卵黃抗體，隨著卵黃抗體瓊擴(kuò)效價(jià)的升高，對(duì)雛鵝的保護(hù)率也隨之升高，當(dāng)抗體效價(jià)為抗體效價(jià)為1：4時(shí)，攻毒保護(hù)率為56.67%；抗體效價(jià)為1：8時(shí)，攻毒保護(hù)率為83.33%，抗體效價(jià)為1：16時(shí)，攻毒保護(hù)率為96.67%；對(duì)照組90%死亡，確定抗體效價(jià)1：16時(shí)為小鵝瘟卵黃抗體血清學(xué)效檢標(biāo)準(zhǔn)。閆妍等為探討小鵝瘟卵黃抗體對(duì)不同日齡雛鵝在小鵝瘟病毒攻擊后的治療試驗(yàn)，將小鵝瘟強(qiáng)毒（H株）病毒液接種1、4、7日齡健康易感雛鵝，攻毒后將鵝按患病程度劃分為輕度患病及重度患病組，分別皮下注射瓊擴(kuò)效價(jià)為1：16的三批小鵝瘟卵黃抗體實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品，雛鵝注射劑量為1.0ml/只，注射后觀察10日，記錄雛鵝發(fā)病情況。結(jié)果表明，在觀察期內(nèi)，輕度患病雛鵝1日齡治愈率為97.44%，4日齡治愈率為94.87%，7日齡治愈率為90.48%，未注射抗體對(duì)照組1日齡92.31%死亡，4日齡91.67%死亡，7日齡85.71%死亡，重度患病雛鵝1日齡治愈率為6.06%，4日齡治愈率為10.00%，7日齡治愈率為9.52%，未注射抗體對(duì)照組1日齡100%死亡，4日齡100%死亡，7日齡90.00%死亡。

2.2卵黃抗體在防治鴨病毒性肝炎上的應(yīng)用鴨病毒性肝炎是由鴨病毒性肝炎病毒（DHV）引起雛鴨的一種急性、高度致死性傳染病，主要危害1～3周齡雛鴨，死亡率高達(dá)90%-95%，臨床上發(fā)病急、傳播快、死亡率高，病死雛鴨主要表現(xiàn)為角弓反張，剖檢病變?yōu)楦闻K水腫，有針頭大至黃豆粒大出血點(diǎn)，給養(yǎng)鴨業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。鴨病毒性肝炎同小鵝瘟一樣，疫苗免疫效果不理想，采用卵黃抗體防治該病效果最好。馬秀麗等應(yīng)用雛鴨病毒性肝炎病毒弱毒疫苗和油乳劑滅活苗多次免疫產(chǎn)蛋雞，制備雞抗鴨病毒性肝炎高免卵黃抗體，自制鴨病毒性肝炎病毒高免卵黃抗體的療效取決于卵黃抗體的中和效價(jià)及治療的時(shí)間。實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)及臨床應(yīng)用結(jié)果表明，卵黃抗體的中和效價(jià)應(yīng)達(dá)28以上，并且在感染DHV 24h以內(nèi)對(duì)雛鴨進(jìn)行肌肉注射，治療結(jié)果顯示，抗體中和效價(jià)達(dá)28以上者治療效果較好，總治愈率在80%以上。張占龍等將鴨甲肝病毒基因A型（DHAV-A）和基因c型（DHAV-C）制備二聯(lián)油乳劑滅活苗多次免疫高產(chǎn)蛋雞制備基因A型和基因c型鴨甲肝病毒雙價(jià)卵黃抗體，取得了良好的試驗(yàn)結(jié)果。制備的雙價(jià)卵黃抗體對(duì)DHAV-A和DHAV-C的抗體中和效價(jià)分別達(dá)到29.7和29.3，對(duì)DHAV-A和DHAV-C的攻毒保護(hù)率均達(dá)到100%，對(duì)人工感染DHAV-A的治療率達(dá)到100%人工感染DHAV-C的治療率達(dá)到90%。宋揚(yáng)等取3批實(shí)驗(yàn)室試制的卵黃抗體，按0.5ml/只接種3日齡SPF雛鴨，1.0ml/只接種6日齡SPF雛鴨，分別在注射抗體后1、3、5和7d攻毒，觀察攻毒保護(hù)情況。結(jié)果顯示，3和6日齡雛鴨接種抗體后1-5d注射1型和3型鴨甲型肝炎強(qiáng)毒，攻毒保護(hù)率均在90%以上.雛鴨接種抗體后7d注射鴨甲型肝炎強(qiáng)毒的攻毒保護(hù)率僅在70%-76.7%之間，攻毒對(duì)照組90%-100%死亡，健康對(duì)照組100%健活。

2.3卵黃抗體在防治鴨坦布蘇毒病病上的應(yīng)用鴨坦布蘇病毒病對(duì)蛋鴨危害嚴(yán)重，鴨群的發(fā)病率高達(dá)100%，死亡率在5%～15%，臨床表現(xiàn)主要為高熱、蛋鴨產(chǎn)蛋率嚴(yán)重下降、部分感染鴨拉綠色稀便并出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，病理變化為為卵巢充血、出血、萎縮、壞死，卵泡破裂，心內(nèi)膜出血，脾臟腫大。鄒曉娟斤等將鴨坦布蘇病毒濃縮后制備滅活苗，免疫試驗(yàn)雞制備卵黃抗體，雞胚中和試驗(yàn)表明，第3次免疫后15d，卵黃抗體中和效價(jià)為1：103.5，雛鴨攻毒保護(hù)試驗(yàn)結(jié)果表明，預(yù)防組和治療組的保護(hù)率分別達(dá)到90%和78%。胡紫霞等以鴨坦布蘇病毒AH-F10株制備的滅活免疫制劑免疫健康高產(chǎn)蛋雞，應(yīng)用瓊擴(kuò)方法檢測(cè)卵黃抗體效價(jià)，收集高效價(jià)卵黃，采用氯仿抽提和硫酸銨鹽析法純化卵黃抗體，測(cè)得抗坦布蘇病毒卵黃抗體瓊擴(kuò)效價(jià)達(dá)1：32以上，動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果表明其對(duì)鴨坦布蘇病毒病有明顯的防治效果。對(duì)雛鴨的保護(hù)力檢驗(yàn)，結(jié)果顯示，試驗(yàn)組鴨先注射卵黃抗體0.5ml/只，24h后，腿部肌注AH-F10毒株0.5ml/只，并設(shè)對(duì)照組，結(jié)果顯示，試驗(yàn)組鴨全部健活，1周后，剖檢無病變，對(duì)照組鴨死亡80%，且有不同程度的病理變化。人工感染鴨坦布蘇病毒病后3d，用制備純化的抗鴨坦布蘇病毒抗體緊急治療，注射后第2天采食量略有回升，精神狀態(tài)略有好轉(zhuǎn)。治療第4天，1周后鴨群的采食基本恢復(fù)正常，部分鴨開始產(chǎn)蛋。王領(lǐng)兄等用鴨坦布蘇病毒滅活疫苗免疫高產(chǎn)蛋雞，三次強(qiáng)化免疫后收集所產(chǎn)的高免雞蛋，制備抗鴨坦布蘇病毒卵黃抗體。瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)測(cè)定該卵黃抗體的效價(jià)達(dá)1：64，對(duì)鴨坦布蘇病毒強(qiáng)毒的攻毒保護(hù)率達(dá)100%。

2.4卵黃抗體在防治番鴨細(xì)小病毒病上的應(yīng)用番鴨細(xì)小病毒病由細(xì)小病毒引起雛番鴨的一種急性傳染病，以3周齡內(nèi)的雛番鴨多發(fā)，最早是3日齡發(fā)病，病鴨臨床表現(xiàn)為精神沉郁、厭食、怕冷、軟腳、張口呼吸，喙發(fā)紺，顯著消瘦，病理變化主要為纖維素性腸炎，十二指腸內(nèi)容物呈松散栓子狀，表層有脫落的粘膜附著，胰臟呈點(diǎn)狀壞死。趙瑞宏等用番鴨細(xì)小病毒連續(xù)免疫產(chǎn)蛋母雞3次，收集雞蛋，并制備出高免卵黃抗體。通過瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)對(duì)制備的卵黃抗體進(jìn)行效價(jià)測(cè)定，用雛番鴨進(jìn)行中和與治療試驗(yàn)。結(jié)果顯示，制備的卵黃抗體瓊擴(kuò)效價(jià)達(dá)到1：32，能有效中和番鴨細(xì)小病毒對(duì)雛番鴨的致病性，對(duì)發(fā)病的雛番鴨有很好的治療作用。

3.小結(jié)與展望

卵黃抗體在防治動(dòng)物疾病方面有很多優(yōu)點(diǎn)，如價(jià)廉、速效、生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)便、污染、無抗藥性、無殘留、安全等。將來在防治某些畜禽疾病方面很可能替代抗生素和化學(xué)合成藥物，同時(shí)還具有促生長(zhǎng)作用。在畜禽疾病防治方面有著廣闊的應(yīng)用前景。但在卵黃抗體的開發(fā)和臨床應(yīng)用方面也存在一些問題，首先，卵黃抗體是高蛋白物質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)豐富、生產(chǎn)制備過程中很容易受到細(xì)菌的污染。其次，卵黃抗體對(duì)疾病初期、臨床表現(xiàn)輕微時(shí)治療效果較好，當(dāng)病情發(fā)展到一定程度時(shí)，效果不佳。再次，半衰期短，不能持久發(fā)揮作用，一般用于疾病的預(yù)防和緊急治療，今后需要開發(fā)成一些長(zhǎng)效制劑，以達(dá)到最佳效果。最后，卵黃抗體還含有大量磷蛋白和脂肪，注入肌肉難以吸收而造成局部腫脹、壞死和過敏反應(yīng)。

目前，小鵝瘟、鴨肝炎的卵黃抗體研究較為成熟，市場(chǎng)上有商品化的卵黃抗體，在水禽這兩種疾病的防治方面起到了一定的作用，對(duì)這兩種毒株的選取，還需要進(jìn)一步的研究，選取與當(dāng)前流行毒株有交叉保護(hù)性的毒株制備卵黃抗體。在免疫抗原的制備和免疫程序上進(jìn)一優(yōu)化，以獲取最高的抗體滴度。深入研究卵黃抗體的制備和純化工藝，制備多價(jià)和多聯(lián)卵黃抗體，開發(fā)一些更加方面臨床免疫操作如飲水免疫的劑型。加快其他水禽卵黃抗體尤其是細(xì)菌病卵黃抗體的研發(fā)力度，今后卵黃抗體在水禽疾病防治方面必將發(fā)揮更大的作用。