不同標(biāo)本類型間髓過氧化物酶水平的檢測(cè)分析*

王永博，錢 凈，陳慧琳

(1.昆明醫(yī)科大學(xué)臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)專業(yè)碩士研究生，昆明 650011；2.昆明醫(yī)科大學(xué)附屬甘美醫(yī)院檢驗(yàn)科，昆明 650011；3.云南省昆明市盤龍區(qū)婦幼保健中心 650011)

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·論 著·

不同標(biāo)本類型間髓過氧化物酶水平的檢測(cè)分析*

王永博1，錢 凈2△，陳慧琳3

(1.昆明醫(yī)科大學(xué)臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)專業(yè)碩士研究生，昆明 650011；2.昆明醫(yī)科大學(xué)附屬甘美醫(yī)院檢驗(yàn)科，昆明 650011；3.云南省昆明市盤龍區(qū)婦幼保健中心 650011)

目的 探討不同標(biāo)本類型間髓過氧化物酶(MPO)檢測(cè)結(jié)果的差異性、抗凝劑的選擇及檢測(cè)結(jié)果的比對(duì)。方法 同時(shí)采集165例健康體檢人群含乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)、肝素鈉兩種抗凝劑的血漿標(biāo)本及不含抗凝劑的普通生化管的血清標(biāo)本，分別檢測(cè)3種標(biāo)本類型中MPO水平，并對(duì)各組檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果 同一例體檢者不同抗凝劑的血漿標(biāo)本間及與不含抗凝劑的血清標(biāo)本間MPO檢測(cè)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 不同標(biāo)本類型對(duì)血液標(biāo)本中MPO水平檢測(cè)結(jié)果差異較大，建議各個(gè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)時(shí)根據(jù)不同抗凝劑制訂相應(yīng)的參考區(qū)間；由于EDTA-K2抗凝血漿不受體外白細(xì)胞中MPO釋放的影響，推薦采用EDTA-K2抗凝血作為檢測(cè)MPO水平的首選。

髓過氧化物酶； 抗凝劑； 標(biāo)本類型； 參考區(qū)間

冠心病已成為現(xiàn)代社會(huì)病死率最高的疾病之一，而心肌梗死又是冠心病人群猝死率最高的病因[1]。髓過氧化物酶(MPO)作為一種重要的含鐵溶酶體，存在于髓系細(xì)胞(主要是中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞)的嗜苯胺藍(lán)顆粒中，是髓細(xì)胞的特異性標(biāo)志，是過氧化物酶家族中重要的成員。當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)炎性反應(yīng)時(shí)，MPO迅速?gòu)闹行粤＜?xì)胞中釋放到循環(huán)系統(tǒng)中，參與機(jī)體的炎性反應(yīng)[2]。有研究顯示，在確診的冠心病患者粥樣斑塊中，有大量具有MPO活性的中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等浸潤(rùn)，提示MPO對(duì)粥樣斑塊的形成及演變具有重要的作用[3]。文獻(xiàn)[4-5]研究表明，MPO通過促進(jìn)脂質(zhì)等蛋白質(zhì)的過氧化反應(yīng)來促進(jìn)炎性反應(yīng)，參與動(dòng)脈粥樣硬化過程的發(fā)生、發(fā)展。但目前國(guó)內(nèi)關(guān)于MPO的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)尚未推廣，尤其是MPO檢測(cè)時(shí)不同標(biāo)本類型的選擇更是沒有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，本文就不同標(biāo)本類型間MPO的檢測(cè)差異及抗凝劑的選擇進(jìn)行探討，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2015年3～4月在昆明醫(yī)科大學(xué)附屬甘美醫(yī)院健康體檢者142例，其中男72例、女70例，年齡21～87歲，平均56歲。將142例研究對(duì)象按年齡進(jìn)行分組，分為小于30歲、30～<40歲、40～<50歲、50～<60歲、60～<70歲、≥70歲共6組。研究對(duì)象納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)無任何影響檢測(cè)結(jié)果的生理指征;(2)未服用藥物或進(jìn)行飲食治療;(3)發(fā)育、精神正常，無心血管及臟器的器質(zhì)性疾病;(4)3個(gè)月內(nèi)無輸血和手術(shù)史;(5)女性不在月經(jīng)期、妊娠期或哺乳期;(6)無酗酒史。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)急、慢性感染性疾病;(2)肝、腎功能不全;(3)骨髓移植術(shù);(4)風(fēng)濕性瓣膜性心臟病;(5)嚴(yán)重創(chuàng)傷或腫瘤;(6)免疫性疾病及其他影響炎癥指標(biāo)的疾病。

1.2 儀器與試劑 采用Olympus AU5421全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)標(biāo)本中MPO水平，試劑由北京九強(qiáng)生物技術(shù)股份有限公司提供的膠乳增強(qiáng)免疫比濁法檢測(cè)MPO試劑盒。校準(zhǔn)品批號(hào)15-0424，質(zhì)控品批號(hào)15-0424，試劑批號(hào)150424，均由廠家提供。

1.3 方法

1.3.1 質(zhì)量控制 首先對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，性能驗(yàn)證通過后對(duì)給定的校準(zhǔn)品校準(zhǔn)，然后對(duì)提供的配套質(zhì)控品進(jìn)行測(cè)定，保證配套質(zhì)控品的測(cè)量結(jié)果必須在靶值范圍內(nèi)，以保證后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。

1.3.2 標(biāo)本的收集及測(cè)量 將符合入選和排除標(biāo)準(zhǔn)的健康體檢者血清標(biāo)本采集后2 h內(nèi)，室溫下4 000 r/min，離心10 min，分離出血清及血漿標(biāo)本，將血漿分為乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝血漿和肝素鋰抗凝血漿，分裝EP管并做好標(biāo)記，置于-80 ℃冰箱保存以備檢測(cè)。待標(biāo)本收集完成后，集中檢測(cè)，來評(píng)價(jià)不同標(biāo)本類型間MPO水平檢測(cè)結(jié)果的差異性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。數(shù)據(jù)分布的正態(tài)性檢驗(yàn)采用Kolmogorov-Smirnow檢驗(yàn)，組間比較用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)，其中不同年齡組MPO(多組間)比較采用Kruskal-WzllisH檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各年齡組中3種標(biāo)本類型的MPO檢測(cè)結(jié)果 對(duì)3種標(biāo)本類型的標(biāo)本MPO檢測(cè)值進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)(Kolmogorov-Smirnow檢驗(yàn))，EDTA-K2抗凝血漿、血清與肝素鋰抗凝血漿正態(tài)性檢驗(yàn)結(jié)果Z分別為2.954、1.328、1.364(P<0.05)，數(shù)據(jù)均為偏態(tài)分布資料。各年齡組中3種標(biāo)本類型檢測(cè)的MPO水平結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

2.2 不同性別間3種標(biāo)本類型的MPO水平檢測(cè)結(jié)果 不同性別間3種標(biāo)本的MPO水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表1 各年齡組中3種標(biāo)本類型的MPO檢測(cè)結(jié)果(ng/mL)

表2 3種不同標(biāo)本類型的不同性別的MPO檢測(cè)結(jié)果(ng/mL)

3 討 論

MPO是由活化的中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞等在機(jī)體炎癥過程中分泌到細(xì)胞外液的一種含鐵血紅素蛋白酶。而炎癥在冠心病等心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中起到了十分重要的作用。Anatoliotakis等[6]研究表明，MPO作為炎性反應(yīng)的標(biāo)志物可以促進(jìn)基質(zhì)蛋白聚糖的降解，并最終促使動(dòng)脈粥樣硬化斑塊失去穩(wěn)定。也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)在急性心肌梗死患者外周血中MPO水平也明顯升高，提示有助于早期診斷急性心肌梗死[7]。還有研究發(fā)現(xiàn)，在急性心肌梗死患者胸痛癥狀發(fā)作后2 h內(nèi)MPO就已明顯升高，并可以被實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)到，而被臨床廣泛應(yīng)用于判斷心肌細(xì)胞受損的cTNT需要在心肌梗死發(fā)生后3～6 h才升高[8-9]。MPO作為一項(xiàng)炎癥指標(biāo)，目前已被認(rèn)為是穩(wěn)定性冠心病以及急性心肌損傷最有潛力的心肌生物標(biāo)志物之一，是未來發(fā)生心肌梗死的獨(dú)立影響因素[10]。

鑒于MPO的檢測(cè)對(duì)臨床心血管疾病的重要意義，在新研制試劑的試驗(yàn)方法時(shí)，實(shí)驗(yàn)室能夠真實(shí)地反映患者血液中MPO濃度水平顯得尤為重要。本實(shí)驗(yàn)是在國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863計(jì)劃)課題支持下，針對(duì)北京九強(qiáng)生物技術(shù)股份有限公司研制的膠乳增強(qiáng)免疫比濁法檢測(cè)血液中MPO水平的試劑盒展開研究的。選擇不同種類標(biāo)本類型進(jìn)行研究，以期為臨床選擇何種標(biāo)本類型提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。本研究結(jié)果顯示，3種不同類型標(biāo)本MPO水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。各年齡組間3種標(biāo)本類型的MPO水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，此結(jié)論與Sawicki等[11]研究發(fā)現(xiàn)一致。且含抗凝劑的兩組標(biāo)本MPO水平明顯低于不含抗凝劑組，考慮可能原因有(1)不含抗凝劑的普通生化管組血液凝固時(shí)，存在于多形核中性粒細(xì)胞中的MPO釋放到血清中；(2)白細(xì)胞、血小板等聚集時(shí)釋放出部分MPO到血清中；造成血清檢測(cè)結(jié)果明顯高于血漿檢測(cè)結(jié)果。這與Shih等[12]的研究一致；而兩抗凝劑組結(jié)果也存在差異，肝素抗凝劑組MPO水平明顯高于EDTA-K2抗凝組，考慮可能為(1)過量的肝素抗凝劑會(huì)引起白細(xì)胞聚集，導(dǎo)致中性粒細(xì)胞中MPO的釋放；(2)肝素刺激白細(xì)胞脫顆粒和血液凝固過程引起；有研究顯示，肝素抗凝血漿保存在-20 ℃以下相對(duì)穩(wěn)定，但在室溫下保存2 h將會(huì)導(dǎo)致MPO水平增加4倍[13]。另有研究表明，肝素能夠依賴性地降低多形核白細(xì)胞的百分比和抑制他們的呼吸(以減少M(fèi)PO從胞內(nèi)的嗜苯胺藍(lán)顆粒中釋放)[14]。Scheffer等[15]研究顯示，MPO水平在EDTA-K2抗凝管中，室溫下在上機(jī)檢測(cè)前2 h不隨時(shí)間而改變。結(jié)合以上研究觀點(diǎn)及本研究結(jié)果，考慮由于EDTA-K2抗凝血漿不受體外白細(xì)胞MPO釋放的影響，可以準(zhǔn)確反映循環(huán)血液中MPO水平，建議采用EDTA-K2抗凝血漿來檢測(cè)MPO水平。

本研究存在的問題：(1)未對(duì)標(biāo)本進(jìn)行及時(shí)檢測(cè)，而是保存后集中檢測(cè)，可能會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成一定的影響；(2)研究對(duì)象均是空腹血清標(biāo)本，欲知與非空腹血清標(biāo)本之間檢測(cè)是否有差別，仍需進(jìn)一步研究證明；(3)本研究標(biāo)本量不夠大，尚需擴(kuò)大標(biāo)本量進(jìn)一步研究證明。同時(shí)實(shí)驗(yàn)室必須根據(jù)自身實(shí)際情況選擇合適的標(biāo)本類型并建立適合的參考區(qū)間，以便更好地服務(wù)臨床、更好地為患者提供有價(jià)值的檢測(cè)結(jié)果。

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Detection and analysis of myeloperoxidase level in different types of samples*

WANGYongbo1，QIANJing2△,CHENHuilin3

(1.MasterPostgraduateStudentofClinicalLaboratoryDiagnosis,KunmingMedicalUniversity,Kunming,Yunnan650011,China; 2.DepartmentofClinicalLaboratory,AffiliatedGanmeiHospital,KunmingMedicalUniversity,Kunming,Yunnan650011,China;3.CenterofMaternalandChild>HealthCareofPanlongDistrict,Kunming,Yunnan650011,China)

Objective To explore the difference of myeloperoxidase(MPO)detection results among different types of samples,anticoagulant selection and comparison of detection results.Methods The plasma samples containing EDTA-K2or heparin and serum samples of common biochemical tube without containing anticoagulant were collected from 165 persons undergoing healthy physical examination.The MPO level in 3 kinds of sample was detected.Then the detection results in each group were performed the statistical analysis.Results The MPO detection results had statistical difference between plasma samples with different anticoagulants and between plasma samples with different anticoagulants and serum sample without anticoagulant in the same person(P<0.05).Conclusion Different samples types have larger difference in MPO detection results.It is suggested that each laboratory should formulate the corresponding reference intervals according to different anticoagulants; because EDTA-K2anticoagulation plasma is not affected by the release of MPO from in vitro leukocytes,it is recommended to adopt EDTA-K2anticoagulation blood as the first selected of MPO level detection.

myeloperoxidase; anticoagulant; types of samples; reference intervals

國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863計(jì)劃)資助項(xiàng)目(2011AA02A111)。

王永博，男，技師，主要從事臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)研究?！?/p>

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.23.003

A

1673-4130(2016)23-3246-03

2016-03-06

2016-05-24)