肉羊細(xì)管凍精制作技術(shù)研究

尼 珍

(西藏自治區(qū)農(nóng)科院畜牧獸醫(yī)研究所,西藏拉薩 850000)

肉羊細(xì)管凍精制作技術(shù)研究

尼 珍

(西藏自治區(qū)農(nóng)科院畜牧獸醫(yī)研究所,西藏拉薩 850000)

細(xì)管凍精技術(shù)的主要目的一是為了有效保存和利用優(yōu)秀地方肉羊品種的遺傳資源；二是提高優(yōu)良種公羊的利用率和良種覆蓋面，充分節(jié)省購買、運(yùn)輸和飼養(yǎng)成本。為了更好地研究細(xì)管凍精的實(shí)際冷凍效果，筆者選取了四種凍精稀釋液配方，通過實(shí)驗(yàn)，了解不同配方在冷凍和解凍后的實(shí)際效果，希望能夠?yàn)榻窈筮M(jìn)一步做好肉羊的細(xì)管凍精提供一定的依據(jù)和參考。

肉羊 細(xì)管凍精制作技術(shù) 研究

1 前言

優(yōu)質(zhì)肉用綿羊品種特性的遺傳是尤為重要的，僅僅依靠傳統(tǒng)的方法，難以實(shí)現(xiàn)優(yōu)良品種遺傳資源的有效傳承，而通過細(xì)管凍精技術(shù)，則恰恰可以較好地解決上述難題，達(dá)成預(yù)期的良好的效果。

2 關(guān)于肉羊細(xì)管凍精制作技術(shù)的實(shí)驗(yàn)研究與分析

2.1 實(shí)驗(yàn)用的動物

實(shí)驗(yàn)主要選用了薩?？朔N公羊，需要注意的是，在實(shí)驗(yàn)開始前的1個(gè)月左右的時(shí)間，就要做好實(shí)驗(yàn)用羊的飼養(yǎng)與管理工作。

2.2 精液的采集與品質(zhì)的鑒定

精液的采集主要是通過假陰道式的采精方法完成的，待精液采集完成后，通過對顏色、渾濁度以及顯微鏡下的存活率和密度等進(jìn)行品質(zhì)的鑒定，如果活率和密度均達(dá)到相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)后，方可進(jìn)行冷凍保存實(shí)驗(yàn)。

2.3 關(guān)于稀釋液

實(shí)驗(yàn)主要是選取了四種稀釋液，成分主要為乳糖、葡萄糖、檸檬酸鈉和雙蒸水，分別編號為1號、2號、3號和4號（表1）。但是，需要注意的是，不同的稀釋液，在具體的處理上也存在不同程度的差別，其中1號、2號和4號都是采用一步法完成稀釋的，只是在稀釋的比例上有所區(qū)別，1號和2號是按照1：3的比例的進(jìn)行稀釋，而4號則是按照1：7的比例進(jìn)行稀釋。

表1 基礎(chǔ)液及I液、II液的配方分析

需要注意的是，3號稀釋液需要兩步法完成稀釋，第一步就是在室溫的條件下用含有卵黃的I液按照1：1的比例進(jìn)行稀釋，待溫度降到5℃的時(shí)候，進(jìn)行冷凍，只是在冷凍之前的1.5h左右，要用含有甘油的II液進(jìn)行等倍的稀釋。

在降溫的處理程序上，1號、2號和3號的降溫程序頗為類似，主要是依托保溫瓶，充分利用冰塊，將水的溫度調(diào)整到3～5℃，形成降溫冰水。然后將盛有精液的試管封口后放置在大燒杯中，進(jìn)行降溫處理。

4號的降溫方法有所不同，稀釋以后，在室溫的條件下進(jìn)行分裝后，裝入容器內(nèi)，兩頭分別用棉花封住，然后用8層紗布裹住，置于5℃的恒溫箱中保存2～4h，需要注意的是，在冷凍前要進(jìn)行活力的檢查，熏蒸時(shí)，使用泡沫盒存放液氮以減少液氮的揮發(fā)，先將擺放好吸管的吸管架置于液氮揮發(fā)的霧氣上方20s左右，然后再將吸管架放置液氮面，細(xì)管距離液氮面5cm，熏蒸5min然后放入液氮罐中冷凍保存。

在解凍的時(shí)候，將細(xì)管凍精放到42攝氏度的恒溫水浴鍋中進(jìn)行水浴解凍，5s就可以完成。

兩種方法對精液冷凍效果的影響，兩種方法的原精活力是相同的，解凍后的活力有所差異，差異非常顯著，采用液氮熏蒸法進(jìn)行解凍后的精子活力較高。

2.4 結(jié)果分析

通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，3號和4號的結(jié)果的是相對理想的（表2）。

表2 四種不同稀釋液結(jié)果分析

從上述表格的數(shù)據(jù)中，我們可以看出，3號稀釋液在進(jìn)行稀釋平衡后的活力是最低的，但是解凍之后的活力卻更加理想，能夠達(dá)到了0.39，究其原因，應(yīng)該是主要在于第二次稀釋后，精子在休眠的狀態(tài)下接觸到了甘油，因此對甘油的毒性并不是非常敏感的，而且甘油與精子的接觸時(shí)間也相對較短。總的來說，三種基礎(chǔ)液的效果有所不同，通過方差分析后發(fā)現(xiàn)，其中以4號的鮮精活力為最好，差異顯著（P小于0.01），平衡后的活力也是最高的，解凍后的活力也是最好的，差異顯著。

甘油是一種保護(hù)劑，而且非常容易滲入到精子中去，具有良好的吸水性，因此，一旦滲透到精子內(nèi)，可能會將原本的游離狀態(tài)的水取代，將一些電解質(zhì)排出，從而使得精子內(nèi)部的濃度在冷凍狀態(tài)的時(shí)候，有害性降低，而且參與到了糖酵解的實(shí)際過程中來。

另外，需要注意的是，甘油的濃度一定要嚴(yán)格控制，本實(shí)驗(yàn)4種稀釋液中所用甘油濃度是不同的，根據(jù)學(xué)者Fiser的研究來看，雖然甘油的濃度越高，效果越為理想，但是如果甘油的濃度超過了8%的話，毒性也會隨著增加，因此在實(shí)驗(yàn)過程中所用甘油的濃度也不宜太高。

關(guān)于解凍，通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在實(shí)際解凍的過程中，精子膜的通透性是會發(fā)生一定變化的，細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)一旦外流，就會導(dǎo)致精子的運(yùn)動器官受到某種程度的損傷，然后導(dǎo)致活力的下降。

卵黃的主要作用就是發(fā)揮其平衡作用，可通過卵黃中的脂蛋白與精子細(xì)胞膜所形成的復(fù)合物，共同來保護(hù)精子脂蛋白細(xì)胞膜層的完整性。

糖類的羥基同樣可以通過與鏡子膜磷脂的磷酸根的結(jié)合，發(fā)揮良好的穩(wěn)定作用，而二葡萄糖又能夠?qū)d羊精液中溶血卵磷脂A的活性產(chǎn)生某種程度的抑制作用。

通過幾種糖類的聯(lián)合應(yīng)用，可以從不同的方面發(fā)揮對精子的保護(hù)作用。從整體結(jié)果來看，與之前學(xué)者的研究結(jié)果基本是一致的，4號稀釋液的降溫程度有效避免了在5攝氏度條件下進(jìn)行分裝時(shí)候的輕微的溫度變化，但是需要注意的是，卻不適用于二步稀釋。

從上面的分析中，我們可以看出，在現(xiàn)場的條件下，是完全可以進(jìn)行精液冷凍的，從而保證優(yōu)質(zhì)的公羊得到更加充分的利用，盡量減少精液流通的中間環(huán)節(jié)，實(shí)現(xiàn)生產(chǎn)成本的降低，加快推進(jìn)肉羊改良工作的實(shí)際進(jìn)程。

3 結(jié)語

細(xì)管精液冷凍技術(shù)可以說是一種效果非常良好的技術(shù)，但是要想真正達(dá)到預(yù)期的良好效果，還是需要進(jìn)一步探索與創(chuàng)新的，尤其是在技術(shù)的推廣方面，更是需要多方面的共同努力。但是，需要注意的是，不同的稀釋液，無論是在平衡后的精子活力，還是在解凍后的精子活力方面，都存在一定的差異。通過實(shí)驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn)，在現(xiàn)場的條件下，以乳糖作為基礎(chǔ)液，添加卵黃、葡萄糖和甘油的二次稀釋以及以乳糖為基礎(chǔ)液，添加卵黃甘油的一次的稀釋的效果是相對較好的。

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