EGFR在肺腺癌原發(fā)灶與淋巴結轉移灶中的表達意義

段國辰 郭濤 趙慶濤

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·論著·

EGFR在肺腺癌原發(fā)灶與淋巴結轉移灶中的表達意義

段國辰 郭濤 趙慶濤

目的 初步探討表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)在肺腺癌原發(fā)灶與淋巴結轉移灶中的表達及意義。方法 采用免疫組化方法比較46例肺腺癌患者原發(fā)灶與淋巴結轉移灶EGFR的表達及其意義。結果 EGFR在46例肺腺癌患者原發(fā)灶、淋巴結轉移灶中陽性表達率分別為47.8%、52.2%；原發(fā)灶與淋巴結轉移灶EGFR表達分別在不同臨床病理特征中差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；原發(fā)灶與淋巴結轉移灶中EGFR的表達具有一致性(K=0.563，P<0.05)，一致性為中等強度。結論 EGFR在肺腺癌原發(fā)灶與淋巴結轉移灶中均呈現(xiàn)表達。EGFR在肺腺癌原發(fā)灶與淋巴結轉移灶中的表達具有一致性，提示EGFR可能參與了肺腺癌的轉移過程。

表皮生長因子；肺腺癌；免疫組化；原發(fā)灶；淋巴結轉移灶

流行病學研究顯示，肺癌為全球性疾病且發(fā)病率高[1]。近年來，肺癌在我國人群中患病率與死亡率逐年上升，我國已成為世界肺癌大國，肺癌已成為嚴重危害人民健康的疾病之一。由于臨床癥狀出現(xiàn)較晚，大多數患者就診時往往已經晚期，從而失去早期手術機會達到根治性治療的目的。傳統(tǒng)的治療方法如化療，雖然能緩解患者的病情，但不能改善患者的生存質量，部分患者容易出現(xiàn)耐藥、復發(fā)及轉移，放療使肺野的照射面積較大，容易發(fā)生放射性毒性，而且效果不盡如人意。隨著人們對分子生物學研究與認識的不斷加深，肺癌的治療有了進一步發(fā)展，以表皮生長因子受體(EGFR)為分子靶點的靶向治療成為了研究焦點。研究發(fā)現(xiàn)，EGFR隸屬于酪氨酸激酶家族，是一種重要的跨膜受體。EGFR能夠識別并結合表皮生長因子配體，激活下游信號轉導通路，調節(jié)細胞的增殖、分化、遷移等細胞生命活動，進而參與了腫瘤的形成、侵襲及轉移[2,3]。對于中晚期肺腺癌患者，檢測EGFR的表達往往選取腫瘤原發(fā)病灶的活組織標本。然而，在實際的臨床工作中，由于經支氣管鏡活檢或CT引導下穿刺活檢獲取的組織量較少，檢測EGFR的陽性表達率低。而患者的淋巴結轉移灶活組織標本相對較易獲取，目前關于原發(fā)灶EGFR與淋巴結轉移灶EGFR的表達是否一致，及其在轉移過程中是否發(fā)生改變尚未被透徹闡明。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2010年1月至2012年12月在河北省人民醫(yī)院胸外科住院并接受外科手術治療的46例肺腺癌患者石蠟包埋的組織切片。

1.2 納入及排除標準

1.2.1 納入標準：①在河北省人民醫(yī)院胸外科接受肺葉切除+淋巴結清掃術手術治療的患者；②術前均未接受化療、放療等治療，術后均接受4個療程DC方案化療；③經術后病理與免疫組化證實均為腺癌(兩名病理醫(yī)師獨立完成)，伴有淋巴結有轉移，石蠟包塊完整；④臨床病例、病理資料齊全肺腺癌患者；⑤術前檢查雙側頸部B超、頭顱CT、全身骨顯像、腹部增強CT或行全身PET-CT均未發(fā)現(xiàn)轉移者。

1.2.2 排除標準：①觀察原發(fā)灶及相應淋巴結轉移灶的HR染色片，其中原發(fā)灶中癌細胞較少或相應淋巴結轉移灶中癌細胞較少者；②術前接受化療、放療者；③病例資料不完善者；④組織蠟塊太薄者。

1.3 免疫組化方法 (1)組織切片依次經過二甲苯液10 min、無水乙醇6 min、95%乙醇6 min、85%乙醇6 min 進行脫蠟、水化組織切片，自來水沖洗切片3 min；(2)3%雙氧水孵育10 min，蒸餾水沖洗3次，以阻斷內源性過氧化物酶；(3)根據所應用的一抗的特殊要求，將組織切片放入盛有枸櫞酸鈉緩沖液的高壓鍋內，緩沖液剛好沒過組織切片，用微波爐將其煮沸約2 min；(4)冷卻后用PBS液沖洗，2 min×3次；(5)滴加足夠量的一抗，保證完全覆蓋組織面，保持組織面濕潤，置于37℃恒溫箱內孵育2 h，PBS液沖洗，2 min×3次；(6)滴加試劑1(Polymer Helper即用型)，完全覆蓋組織面，置于37℃恒溫箱內孵育20 min，PBS液沖洗，2 min×3次；(7)滴加試劑2(polyperoxidase-anti-mouse/rabbit IgG即用型)，完全覆蓋組織面，置于37℃恒溫箱內孵育45 min，PBS液沖洗，2 min×3次；(8)滴加新配制好的DAB溶液，置于37℃的恒溫箱內孵育10 min，取出，觀察切片顯色情況，直至切片顯色良好；(9)自來水充分沖洗后，蘇木精復染約5 min，依次于無水乙醇、95%乙醇、85%乙醇進行脫水、透明、封片。

1.4 結果判定標準 EGFR抗原是一種轉膜蛋白，主要存在于腫瘤細胞胞漿內，陽性顯色于胞膜、胞漿。陽性表達的判定標準[4-6]：腫瘤細胞的胞膜或胞漿有棕黃色顯色，明顯高于背景底色。綜合考慮癌細胞表達的陽性面積、強度及所占百分比計算結果。染色強度：不染色為陰性，淡黃色為(+)，棕黃色為(++)，黃褐色為(+++)；陽性細胞所占百分比：陽性10%為陰性，10%～30%為(+)，30%～50%為(++)，>50%為(+++)，對應的分值分別為0～3分。

1.5 統(tǒng)計學分析 應用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件，計數資料采用χ2檢驗，兩個變量因素的一致性比較采用Kappa一致性檢驗，一致性強弱判斷標準[7]：K=-1，完全不一致；K<0.4，差；0.4～0.75，中等；>0.75，強。選取α=0.05作為檢驗水準，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 肺腺癌患者原發(fā)灶和淋巴結轉移灶中EGFR的表達與不同臨床病理特征之間的關系 EGFR陽性表達位于腫瘤細胞的胞漿、胞膜,呈棕黃色或棕褐色,不同組織染色效果不同,EGFR在46例肺腺癌患者原發(fā)灶、淋巴結轉移灶中的陽性表達率分別為47.8%、52.2%。原發(fā)灶與淋巴結轉移灶EGFR表達分別在不同性別、年齡、分化程度、病變部位、吸煙史、TNM分期、腫瘤大小之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見圖1～3，表1、2。

圖1 肺腺癌患者原發(fā)灶中EGFR的陽性表達和陰性表達(HE×10)

2.2 肺腺癌患者原發(fā)灶和淋巴結轉移灶中EGFR的表達一致性 原發(fā)灶與淋巴結轉移灶中EGFR的表達具有一致性(K=0.563，P<0.05)，一致性為中等強度。見表3。

圖2 肺腺癌患者淋巴結轉移灶中EGFR的陽性表達和陰性表達(HE×10)

圖3 肺腺癌患者原發(fā)灶與相應淋巴結轉移灶中EGFR的陽性表達(HE×10)

表1 肺腺癌患者原發(fā)灶中EGFR的表達與不同臨床病理特征之間的關系 例(%)

3 討論

近幾年，肺腺癌發(fā)病率與死亡率逐年上升，尤其好發(fā)于年輕女性，吸煙、長期暴露于空氣污染和所在工作場所暴露于致癌原是肺癌風險增加的重要因素。非小細胞肺癌約占肺癌總病例數的75%～80%[1]。目前EGFR抑制劑靶向治療在臨床上的廣泛應用取得了很好的療效，給非小細胞肺癌患者尤其是中晚期患者帶來了福音，但是在我們臨床實際的治療工作中，有時由于支氣管活檢及穿刺活檢原發(fā)灶組織量較少，EGFR的檢測陽性率低，需行淋巴結轉移灶EGFR的檢測[8]，因此淋巴結轉移灶EGFR是否具有高表達水平，與原發(fā)灶表皮生長因子受體表達是否一致，成為EGFR靶向治療的必備條件，目前國內外相關的文獻報道較少。

表2 肺腺癌患者淋巴結轉移灶中EGFR的表達與不同臨床病理特征之間的關系 例(%)

表3 肺腺癌患者原發(fā)灶和淋巴結轉移灶中EGFR的表達一致性 n=46，例

EGFR屬于I型生長因子家族，是erbB家族成員之一。EGFR主要由三個部分構成：(1)胞外區(qū)(ECD)即多種多肽生長因子的配體結合區(qū);(2)疏水的跨膜區(qū)(TM);(3)胞內區(qū)。EGFR由1186個氨基酸組成[9]，是一種相對分子量約170 kDa的跨膜蛋白[10]，其基因位于人類的第7號染色體，長度約200 kb，由28個外顯子組成。EGF和TGFa等配體與EGFR的配體結合區(qū)相應位點結合后，EGFR的結構會發(fā)生變化即受體二聚合，進而形成受體同源或異源二聚體，最終激活以酪氨酸激酶為主要結構的胞內區(qū)，使得分子磷酸化。EGFR被活化后能夠連接PLCT、P13K等參與信號轉導途徑的細胞內蛋白質。不同受體類型及磷酸化結合位點，會導致相應的信號蛋白被激活。除此之外，EGFR還在腫瘤的分化、遷移、黏附、血管生成等關鍵特性中發(fā)揮著重要的作用[12,13]。

隨著國內外研究的深入，研究發(fā)現(xiàn)在多種腫瘤性疾病中EGFR均呈現(xiàn)高表達，其在腫瘤發(fā)病中的作用得到越來越多的關注。越來越多的證據表明EGFR在NSCLC原發(fā)灶中呈現(xiàn)高表達[14,15],且在癌旁正常組織中幾乎檢測不到其表達。有報道指出，EGFR在各種類型非小細胞肺癌原發(fā)灶組織中均呈現(xiàn)高表達[16]。我們的研究通過檢測肺腺癌患者原發(fā)灶中EGFR的表達，發(fā)現(xiàn)EGFR在肺腺癌原發(fā)灶中陽性表達率為47.8%，與以往的研究結果一致，提示EGFR與肺腺癌的發(fā)生相關,有可能以某種途徑參與其發(fā)病。已有文獻報道EGFR在女性NSCLC患者原發(fā)灶中的表達顯著高于男性[16]。有學者認為女性NSCLC患者EGFR高表達的原因可能與女性體內雌激素水平密切相關,雌激素可能作為一種促發(fā)劑刺激腺上皮細胞增殖，進而導致腫瘤發(fā)生[17]。也有學者認為EGFR在女性NSCLC中的高表達可能與EGFR的基因突變有關。鄭軍等[18]發(fā)現(xiàn)EGFR基因在女性患者中的突變率顯著升高。我們的研究證實女性肺腺癌患者原發(fā)灶中表達高于男性，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，與文獻不一致。造成這種結果的原因可能與本實驗病例數量相對較少有關，需加大樣本量進一步證實。

關于肺腺癌淋巴結轉移灶中EGFR的表達，目前國內外文獻報道較少。Rao等[19]研究了47例NSCLC患者原發(fā)灶與淋巴結轉移灶中EGFR的表達情況，結果顯示：淋巴結轉移灶EGFR的陽性表達為78.7%(37/47)，呈現(xiàn)高表達。我們的實驗結果顯示，肺腺癌患者淋巴結轉移灶中EGFR陽性表達率高于原發(fā)灶中EGFR陽性表達率，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，提示EGFR在淋巴結轉移灶中呈現(xiàn)高表達，有可能參與了肺腺癌的轉移過程。EGFR在不同臨床病理特征分組下各組間均差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

EGFR在肺腺癌原發(fā)灶與淋巴結轉移灶中的表達是否具有一致性，目前文獻結論尚不完全一致。Italiano等[20]研究發(fā)現(xiàn)，在30例NSCLC患者中，有10例表達不一致，經一致性檢驗，EGFR在NSCLC患者原發(fā)灶與淋巴結轉移灶中表達不一致，提示非小細胞肺癌原發(fā)灶向淋巴結轉移灶轉移過程中EGFR的表達不穩(wěn)定，可能發(fā)生了丟失。然而另一項研究表明，EGFR在肺腺癌患者原發(fā)灶和淋巴結轉移灶中的表達差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，提示EGFR在腫瘤的轉移過程中穩(wěn)定表達[21]。本研究結果顯示，原發(fā)灶與淋巴結轉移灶中EGFR表達一致33例，經一致性檢驗，肺腺癌患者原發(fā)灶與淋巴結轉移灶中EGFR的表達具有一致性(K=0.563，P<0.05)，一致性為中等強度。本試驗結果與Rao等[19]的研究結果一致，提示EGFR在腫瘤的轉移過程中穩(wěn)定表達，有可能通過檢測淋巴結轉移灶中EGFR的表達來預測原發(fā)灶中的表達情況。

總之，EGFR在肺腺癌原發(fā)灶與淋巴結轉移灶中均呈現(xiàn)高表達，EGFR在肺腺癌原發(fā)灶與淋巴結轉移灶中的表達具有一致性，提示EGFR在腫瘤的轉移過程中穩(wěn)定表達。EGFR參與肺腺癌的發(fā)生和轉移過程的具體機制尚未被透徹闡述，仍需進一步的研究探索。

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10.3969/j.issn.1002-7386.2016.23.014

050050 石家莊市，河北省人民醫(yī)院胸外二科(段國辰、趙慶濤)；河北大學附屬醫(yī)院(郭濤)

R 734.2

A

1002-7386(2016)23-3572-04

2016-06-16)