尿素13C 呼氣試驗與血清抗體和組織病理學在檢測幽門螺旋桿菌感染的比較

李安全 周小微1.福建醫(yī)科大學附屬南平市第一醫(yī)院消化內(nèi)科，福建南平 353000；2.福建醫(yī)科大學附屬南平市第一醫(yī)院檢驗科，福建南平 353000

尿素13C 呼氣試驗與血清抗體和組織病理學在檢測幽門螺旋桿菌感染的比較

李安全 周小微
1.福建醫(yī)科大學附屬南平市第一醫(yī)院消化內(nèi)科，福建南平 353000；2.福建醫(yī)科大學附屬南平市第一醫(yī)院檢驗科，福建南平 353000

目的 比較檢測幽門螺旋桿菌（Hp）感染不同方法的敏感性及特異性。 方法 隨機選取200例2014年5月～2015 年12 月在我院住院患者，所選中的病例同步完成病理組織學檢查、血清抗體檢查和尿素13C 呼氣試驗檢測。病理組織學Hp陽性為診斷標準。最后比較這三種方法的陽性率、敏感性、特異性。結果 尿素13C呼氣試驗、血清抗體、病理組織學三種檢測方法的陽性率分別為81.5%，84.0%，78.5%，差異無統(tǒng)計學意義（χ2=1.998，P＞0.05）。尿素13C呼氣試驗、血清抗體、病理組織學三種檢測方法的敏感性分96.97%，97.64%，95.63%，差異無統(tǒng)計學意義（χ2=3.07，P＞0.05）。尿素13C呼氣試驗、血清抗體、病理組織學三種檢測方法的特異性分別為91.43%，93.33% ， 90.00%，差異無統(tǒng)計學意義（χ2=3.07，P＞0.05）。結論 尿素13C 呼氣試驗、血清抗體、組織病理學三種不同檢查方法在檢測幽門螺旋桿菌感染差異小，但尿素13C呼氣試驗操作簡單，無侵入性損傷，無痛苦，患者容易接受，是一種較理想的幽門螺旋桿菌檢測方法。

幽門螺旋桿菌；尿素13C呼氣試驗；病理組織學；血清抗體

幽門螺旋桿菌（helicobacter pylori，Hp）是引起很多消化道疾病的首要致病菌，如消化道潰瘍、胃癌、慢性胃炎等主要病因。因此如何快速、敏感的檢測出是否感染幽門螺旋桿菌，為進一步對上消化道疾病的診斷、治療以及預防中具有重要意義。本實驗通過3種不同的檢測幽門螺旋桿菌感染的方法，比較各種方法敏感性、特異性，發(fā)現(xiàn)一種應用于臨床工作中即簡便又實用方法。本研究通過比較3種檢測幽門螺旋桿菌的方法，現(xiàn)報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

選擇2014年5月～2015 年12 月在我院消化內(nèi)科住院患者200例，其中男108 例，女92 例；年齡15～88歲；平均（59.1±20.5）歲。入選標準：有上腹痛、腹脹、上腹不適、早飽、食欲減退等不同消化道癥狀，胃鏡檢查及病理活檢檢查證實。其中慢性胃炎47例，胃潰瘍66例，十二指腸球部潰瘍82例，胃癌5例。所有病例均為隨機選擇，男女不限，年齡≥15歲。排除標準：患口腔能產(chǎn)尿素酶疾病，1個月內(nèi)因不同原因使用具有抑制或殺幽門螺旋桿菌抗生素、鉍劑、質子泵抑制劑。受試者均行胃鏡檢查，同時內(nèi)鏡下活檢胃黏膜組織進行病理組織學，并在結束胃鏡檢查后行血清抗體、尿素13C呼氣試驗檢測。

1.2材料

1.2.1口服尿素13C膠囊 半衰期為5.15h，尿排泄為主，國家食品藥品監(jiān)督管理局標準YBH06682005，H20110130，深圳市中核海得威生物科技有限公司。尿素13C呼氣試驗藥盒（尿素13C膠囊1粒，鋁塑包裝；集氣袋2個），液閃儀。

首先：受試者應在早上空腹時或禁食2h以上受試。其次：在貼有2個集氣袋上，受試者填好所需資料。

受試者維持正常呼吸，按以下步驟操作：（1）受試者取下集氣袋蓋帽，將氣體徐徐吹入集氣袋，當氣充滿后，立即將集氣袋蓋帽蓋緊，這次收集的呼氣為0min呼氣。（2）受試者先服一粒尿素13C膠囊后飲80～100mL涼開水送服，靜坐。然后受試者按收集呼氣方法，呼氣收集管收集30min的呼氣，扭緊呼氣收集管蓋帽。（3）最后將收集到0、30min的集氣袋，在相應的儀器上進行13CO2檢測。如果呼氣袋出現(xiàn)漏氣現(xiàn)象，只需當場重新吹起即可。

常用δ‰來表示測定結果，稱為千分差值

公式計算結果=δ‰（30min）-δ‰（0min）。

當時≥4.0±0.4時，判定受試者為Hp 陽性。

1.2.2 血清抗體 HP IgG抗體試劑盒（產(chǎn)品標準編號YZB國4915-2012，國食藥監(jiān)械（準）字2012第3401447號）。主要組成成分（幽門螺旋桿菌抗體檢測試劑40人份；一次性塑料吸管）。受試者在早晨空腹時靜脈血2mL，分離血清，盡量使用新鮮標本，如無及時檢驗2～8℃保存3d；操作方法：（1）從原裝鋁箱中取出試劑。（2）將試劑置于干凈平臺上，用塑料吸管吸取樣板，垂直滴注3滴（約100μL）無空氣氣泡的血清于試劑的加樣孔內(nèi)。（3）等紅色條帶的出現(xiàn)，結果應在10～20min內(nèi)判讀。

結果判定。陽性：兩條紅色條帶出現(xiàn)；陰性：僅質控區(qū)出現(xiàn)一條紅帶。

1.2.3病理組織 首先在胃鏡下取胃竇、胃體的大小彎黏膜組織各1 塊共4塊。取得標本浸入10%中性福爾馬林中固定12h，分別使用不同濃度乙醇、二甲苯透明組織，透明好注入石蠟包埋，在切片機切片厚度定為3μm連續(xù)切片，取適合組織，再使用甲苯胺藍法染色：（1）石蠟切片二甲苯常規(guī)脫蠟；（2）滴1%甲苯胺藍液染色5～8min；（3）接著蒸餾水洗；（4）急速分化使用95%乙醇；（5）無水乙醇脫水2min，二甲苯透明，中性樹膠封片。閱片均由指定的一位具有豐富經(jīng)驗的病理科醫(yī)師閱片。判定標準是按照全國慢性胃炎研討會共識意見和胃及十二指腸黏膜活檢病理判定。

1.3統(tǒng)計學方法

運用SPSS17.0軟件進行數(shù)據(jù)錄入及統(tǒng)計分析，各組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計意義。

2　結果

2.1陽性率比較

通過三種不同檢測方法檢測200例患者感染Hp的陽性率結果見表1，尿素13C呼氣試驗、血清抗體、病理組織學三種檢測方法的陽性率分別為81.5%，84.0% ，78.5%，三種方法陽性率比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

表1　3種不同檢測方法所測定的結果比較

2.2敏感性和特異性比較

以病理組織及13C呼氣試驗均陽性判為真陽性。Hp診斷的敏感性、特異性在三種不同方法檢測結果見表2。尿素13C呼氣試驗、血清抗體、病理組織學三種檢測方法的敏感性分別為96.97%，97.64%，95.63%，差異無統(tǒng)計學意義。尿素13C呼氣試驗、血清抗體、病理組織學三種檢測方法的特異性分別為91.43%，93.33%， 90.00%，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

3　討論

幽門螺旋桿菌是一種彎曲、螺旋形或S形的革蘭染色陰性微需氧桿菌。1979年澳大利亞學者Warren及Marshall[1]首次從胃黏膜分離培養(yǎng)出幽門螺桿菌，隨后發(fā)現(xiàn)消化性潰瘍和慢性胃炎的首要病因是幽門螺旋桿菌，國際癌腫研究機構認為幽門螺旋桿菌引起胃癌第I類致癌原[2]，十二指腸潰瘍大約90%～100%和胃潰瘍大約80%～90%存在Hp 感染，慢性胃炎患者約80%～95%的存在幽門螺桿菌感染[3]，甚至是心腦血管疾病危險因素[4]。本實驗研究表明，Hp在慢性胃炎的感染率為57.45%，胃潰瘍?yōu)?7.5%，十二指腸球部潰瘍93%，胃癌60%，除了慢性胃炎感染率較低外，其他與上述結果相似。本實驗慢性胃炎感染Hp比較低可能與地域感染水平低有一定關系。幽門螺旋桿菌定植到胃后，首先通過細菌菌膜表面的尿素酶，尿素酶能分解尿素產(chǎn)生氨，形成氨云圍繞在菌體周圍，并能分泌不受中性粒細胞殺傷的過氧化物歧化酶和過氧化氫酶，是幽門螺旋桿菌能夠存活在人體胃內(nèi)主要原因。幽門螺旋桿菌通過黏附素，牢牢地與上皮細胞連接在一起。幽門螺旋桿菌通過胃泌素水平升高促進胃酸分泌增加，高酸度可以使胃黏膜形成潰瘍。高胃酸通過胃的蠕動到達十二指腸，通過的高胃酸可引起十二指腸黏膜損傷，使十二指腸黏膜變成胃上皮化生。幽門螺旋桿菌具有分泌細胞毒素、炎癥介質、免疫、泌酸、氧化均為致病因素，參與致病因子有毒力因子、細胞因子、自由基、毒力基因等[5]。尿素酶、帶鞭毛的動力、黏附素、超黏附因子、脂多糖、磷脂酶A 的過氧化氫酶等毒力因子[6]引起消化道疾病。因幽門螺旋桿菌可引起炎癥反應，其中DNA 的片段轉移及其代謝產(chǎn)物對胃十二指腸黏膜的轉化等作用最終可能導致消化道腫瘤的發(fā)生[7]。

表2　三種方法對Hp診斷的結果比較

組織病理學檢測是通過單獨使用蘇木素和署紅即可識別組織中的幽門螺旋桿菌。組織病理學檢測是幽門螺旋桿菌檢測金標準之一，原位熒光雜交技術可應用于甲醛固定的活組織標本中幽門螺旋桿菌及其耐藥性的檢測， 其敏感性為92.4%[8]。該方法受感染水平高低及“局灶”胃竇、胃體黏膜分布，同時受內(nèi)鏡醫(yī)師經(jīng)驗臨床取材局限性，病例切片，病理診斷醫(yī)師的認真態(tài)度及水平等多因素干擾，更多是取材過小過淺甚至活檢到壞死組織等，造成假陰性，提高陽性率可多處活檢。有研究報道， 活檢胃竇、角切跡和胃體3 處標本判斷Hp 感染的準確率近100%[9]。組織病理學檢測與其他2種方法比較特異性、敏感性稍差，與本實驗敏感性95.63%，特異性90%表現(xiàn)相符。比較三種方法結果顯示差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。組織病理學檢測屬于有創(chuàng)檢查，不適合Hp根治后復查及普查，因此，一種新的替代金標準的方法對于臨床篩選與療效觀察非常重要[10]。

因幽門螺旋桿菌能產(chǎn)生尿素酶的特性，予受試者口服尿素13C膠囊后，胃內(nèi)幽門螺旋桿菌能產(chǎn)生尿素酶，尿素酶迅速將尿素分解為NH3和CO2，CO2經(jīng)血液進入肺而排出體外，將排出的CO2收集后在儀器上測量，13C呼氣試驗就是根據(jù)該原理進行檢測Hp感染。目前國際公認的檢測幽門螺桿菌的金標準之一是13C 尿素呼氣試驗，它既適用于診斷也適用于對根除治療的監(jiān)測[11]。本實驗結果其敏感性為96.97%，特異性為91.43%，表明該實驗確敏感性、特異性均非常高，比較三種方法結果顯示，無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。特異性較敏感性稍低，不排除部分患者未漱口，口腔存在其他桿菌能產(chǎn)生尿素酶有關，同時部分患者有口服抑制Hp藥物，甚至因近期進食含有抗生素的肉類，間接服用抗Hp藥物可能。有研究顯示，經(jīng)鼻進行試驗的結果可能會稍改善[12]。因13C 是穩(wěn)定性核素，不存在放射性污染，對兒童， 孕婦尤為適用[13]。同時13C呼氣試驗又屬于無創(chuàng)性檢測，非常適合用于診斷、根治幽門螺旋桿菌后復查及健康人群普查。

血清中幽門螺旋桿菌抗體檢查具有特異性高、敏感性強及穩(wěn)定性好等特點。幽門螺旋桿菌菌體表面存在多種抗原組可激發(fā)宿主的免疫應答誘導抗體產(chǎn)生。不同抗體種類由不同細菌的類型產(chǎn)生，分為分泌型和無分泌型，并可預測胃病的嚴重程度及耐藥性[14]。通過本實驗表明血清抗體敏感性、特異性均高，但比較三種方法結果顯示差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。但人體感染幽門螺旋桿菌后數(shù)周血中才會出現(xiàn)特異抗體， 且根除Hp后血清中抗體能夠維持6個月以上[15]。根據(jù)此特性，幽門螺旋桿菌抗體陽性不能判斷是否存在Hp活動性感染，同樣陰性不能排除初期的感染， 故該項檢查適用于流行病學的篩檢，不適用于臨床診斷。

綜上所述，侵入性檢查和非侵入性檢查是目前幽門螺旋桿菌檢查兩種方法，其中侵入性檢查主要有：活檢組織快速尿素酶試驗、病理組織學、細菌培養(yǎng)法及血清抗體等方法；非侵入性檢查主要有：尿素13C呼氣試驗、尿素14C 呼氣試驗、幽門螺旋桿菌抗體及同位素示蹤法等。通過對各種方法比較，發(fā)現(xiàn)各有優(yōu)缺點。尿素13C呼氣試驗既無侵入性檢查的創(chuàng)傷性及放射性損傷，同時操作較簡便相對Hp抗體測定、Hp 抗原測定、同位素示蹤法。尿素13C呼氣試驗以其無創(chuàng)傷，無放射性損傷，安全準確，簡便快捷，敏感性和特異性均較高等特點獲得相對優(yōu)勢，在臨床工作中應用較為理想。

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Comparison of13C urea breathe test, serum antibody and histopathology in detection of Helicobacter pylori infection

LI Anquan ZHOU Xiaowei
1.Department of Gastroenterology, Nanping First Hospital Affiliated to Fujian Medical University, Nanping 353000, China; 2.Clinical Laboratory, Nanping First Hospital Affiliated to Fujian Medical University, Nanping 353000, China

Objective To compare the sensitivity and specificity of three methods in detection of helicobacter pylori (Hp) infection. Methods 200 patients admitted in our hospital from May 2014 to May 2015 were selected randomly. These patients finished simultaneously the detecting of13C urea breath test, serum antibody and histopathology. Positive result on histopathology in detecting H. Pylori was viewed as the diagnostic criteria. Finally the positive rate, sensitivity and specificity of the three tests were calculated. Results The positive rate of13C urea breath test,serum antibody and histopathology was 81.5%, 84.0% and 78.5% respectively. There was no statistically significant difference of the three tests (χ2=1.998, P＞0.05). The sensitivity of13C urea breath test, serum antibody and histopathology was 96.97%, 97.64% and 95.63% respectively. The three tests had no significant difference(χ2=3.07, P＞0.05). The specificity of13C urea breath test, serum antibody and histopathology was 91.43%, 93.33% and 90.00% respectively. No significant difference was observed in the three tests (χ2=3.07, P＞ 0.05). Conclusion There is no significant difference of the three tests in detecting H. pylori infection.13C urea breath test is a simple, noninvasive and painless test. It is an ideal tool to detect helicobacter pylori.

Helicobacter pylori;13C urea breathe test; Histopathology; Serum antibody

R44

B

2095-0616（2016）17-208-04

（2016-03-31）