托吡酯對腦缺血再灌注損傷大鼠神經(jīng)功能的影響

朱曉峰 徐 耀 張桁忠(通訊作者)

蘇北人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 揚(yáng)州 225001

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托吡酯對腦缺血再灌注損傷大鼠神經(jīng)功能的影響

朱曉峰 徐 耀 張桁忠(通訊作者)

蘇北人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 揚(yáng)州 225001

目的 分析托吡酯對腦缺血再灌注損傷大鼠神經(jīng)功能的影響。方法 隨機(jī)雙盲法將36只雄性SD大鼠分為3組，各12只，通過線栓法形成腦缺血再灌注模型，A組大鼠行假手術(shù)，B組大鼠行8 mg/mL托吡酯治療，A組、C組(腦缺血再灌注)則于同時(shí)間點(diǎn)給予10 mL/kg生理鹽水干預(yù)，比較B、C 2組大鼠神經(jīng)功能評分，同時(shí)比較3組大鼠腦組織Glu、GABA、GABA/Glu水平。結(jié)果 A組大鼠無神經(jīng)功能缺損癥狀發(fā)生，B組神經(jīng)功能評分為(2.90±0.92)分，顯著高于C組的(1.55±0.74)分，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。3組大鼠Glu、GABA、GABA/Glu水平兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 托吡酯能明顯促進(jìn)腦缺血再灌注損傷大鼠神經(jīng)功能改善，可能是通過抑制Glu水平，增多GABA含量達(dá)到神經(jīng)保護(hù)的目的。

托吡酯；腦缺血再灌注；大鼠模型；神經(jīng)功能

相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(Glu)在缺血性損傷中起重要參與作用，前者為中樞系統(tǒng)重要抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，且它由Glu脫羧而成，兩者于大腦皮質(zhì)及海馬神經(jīng)元中共存[1]。為此可將GABA、Glu作為神經(jīng)保護(hù)的可能作用機(jī)制之一。托吡酯作為臨床一種常見抗癲癇藥物，近年來較多研究發(fā)現(xiàn)它能明顯提高抑制性遞質(zhì)GABA功能，拮抗Glu相關(guān)受體亞型，對腦損傷神經(jīng)保護(hù)功能明顯，同時(shí)可明顯減少其毒性作用[2]，理論上可用于腦損傷后神經(jīng)保護(hù)。鑒于對人類的保護(hù)，本研究對雄性SD大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，探討托吡酯對腦缺血再灌注損傷大鼠神經(jīng)功能的影響，以為臨床腦缺血疾病治療提供參考。報(bào)告如下。

1 材料與方法

1．1 材料 選擇36只健康雄性SD大鼠，由揚(yáng)州大學(xué)提供，質(zhì)量282～322 g，平均(295.5±10.2)g。隨機(jī)雙盲法將大鼠分為A組(假手術(shù))、B組(缺血再灌注大鼠，托吡酯干預(yù))與C組(缺血再灌注大鼠，生理鹽水注射)，各12只。

1．2 方法 通過線栓法完成腦缺血再灌注大鼠模型，具體操作：3 mL/kg水合氯醛(濃度10%)于大鼠腹腔注射，成功麻醉后于頸正中行切口，頸外動(dòng)脈遠(yuǎn)端、頸總動(dòng)脈近端(活結(jié))均由4-0絲線結(jié)扎，然后將3/0號單股尼龍線(事前將線頂端燒鈍)由頸外動(dòng)脈插入頸內(nèi)動(dòng)脈，栓線深度19～21 mm，待大腦中動(dòng)脈起始端被阻斷后于頸外動(dòng)脈近分叉處結(jié)扎固定線栓，縫合皮膚。缺血120 min后抽出線栓，同時(shí)將頸總動(dòng)脈活結(jié)松開，形成缺血再灌注模型。A組假手術(shù)，除開不插線，其他操作相同。B組大鼠在插線、拔線時(shí)行8 mg/mL托吡酯(西安楊森制藥有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字H20020555)腹腔注射，A組、C組大鼠則于相同時(shí)間點(diǎn)行10 mL/kg生理鹽水腹腔注射。

1．3 觀察指標(biāo)

1．3．1 神經(jīng)功能評分：通過Zausinger 6分法[3]評價(jià)，0分：不能行走；1分：可自由行走，但會(huì)向病變對側(cè)旋轉(zhuǎn)；2分：固定尾巴后向病變對側(cè)旋轉(zhuǎn)；3分：若向病變對側(cè)施壓，大鼠難以抵抗；4分：病變對側(cè)前爪不能伸直或全身對側(cè)屈曲；5分：不存在神經(jīng)功能缺損癥狀。于大鼠清醒狀態(tài)下再灌注2～24 h評分。

1．3．2 Glu、GABA、GABA/Glu水平：大鼠再灌注24 h后馬上將其處死取腦，分離出右側(cè)額葉頂葉皮質(zhì)，稱重后加入預(yù)冷腦組織勻液(比例1：10)，超聲勻漿后常規(guī)離心，轉(zhuǎn)速12 000 r/min，20 min，提取出上清液保存在-70℃冰箱中。GABA、Glu均通過高效液相色譜法測定。

2 結(jié)果

2．1 神經(jīng)功能評分 A組大鼠均存活，可自由行走，無1例表現(xiàn)出神經(jīng)功能缺損癥狀。B組大鼠于再灌注2 h內(nèi)死亡1只。C組大鼠于再灌注后2 h內(nèi)死亡1只，再灌注后12 h死亡1只。B組大鼠神經(jīng)功能評分明顯高于C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

表1 B組、C組大鼠神經(jīng)功能評分比較，分)

2．2Glu、GABA、GABA/Glu水平B組Glu水平明顯低于A組、C組(t值分別為3.841、4.707，P<0.05)；B組GABA、GABA/Glu分別明顯高于A組(t值為5.914、2.305，P<0.05)，均明顯低于C組(t值為4.065、13.484，P<0.05)。A組、C組Glu、GABA、GABA/Glu水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為3.254、8.872、17.994，P<0.05)。見表2。

表2 3組大鼠 Glu、GABA、GABA/Glu水平比較

注：與A組比較，*P<0.05；與C組比較，#P<0.05

3 討論

受腦組織缺血缺氧、血管再灌注損傷等多種因素影響，缺血性腦血管疾病神經(jīng)元可能變性壞死或凋亡[4]。腦缺血后中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮性氨基酸大量釋放，致使細(xì)胞外液中谷氨酸、γ-氨基丁酸上升，產(chǎn)生神經(jīng)毒性加快神經(jīng)元變性壞死速度，可能機(jī)制包括：(1)腦缺血后興奮性氨基酸增多，對N-甲基-D-門冬氨酸受體刺激而讓鉀離子、氯離子至細(xì)胞內(nèi)，易引發(fā)神經(jīng)元水腫癥狀[5]；(2)腦缺血后增加鈣離子內(nèi)流幾率，致使細(xì)胞內(nèi)鈣離子數(shù)目太多而將磷脂酶A2或C等激活，損傷神經(jīng)細(xì)胞?？梢娚窠?jīng)保護(hù)重點(diǎn)在于抑制神經(jīng)元興奮，而神經(jīng)元興奮抑制關(guān)鍵在于氨基酸抑制，進(jìn)而減少其毒性作用。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為中樞神經(jīng)系統(tǒng)重要成分包括Glu、GABA等，正常生理環(huán)境下，因機(jī)體內(nèi)有Glu攝取系統(tǒng)且攝取能力強(qiáng)，可保持細(xì)胞Glu維持低水平，僅有少許Glu作為興奮性神經(jīng)遞質(zhì)在大腦學(xué)習(xí)、記憶等多種信號傳導(dǎo)功能中起參與作用[6]。而一旦腦缺血發(fā)生，Glu釋放過度，激活n-甲基-D-天門冬氨酸產(chǎn)生興奮毒性作用，促進(jìn)神經(jīng)元壞死或死亡。GABA主要由Glu脫羧而來，存在于大腦皮質(zhì)及海馬神經(jīng)元中，通常情況下Glu含量為GABA的4倍左右。當(dāng)Glu產(chǎn)生興奮性毒性后，抑制性遞質(zhì)GABA通過對GABA投射神經(jīng)元位相性抑制可達(dá)到拮抗神經(jīng)元的目的。于海寧等[7]人研究表明腦缺血時(shí)除了Glu水平上升外，抑制性氨基酸GABA濃度亦明顯上升，且兩者呈正相關(guān)性。托吡酯作為臨床一種新型抗癲癇藥物，主要成分為氨基硫酸酯，近年來較多研究及臨床表明托吡酯在神經(jīng)細(xì)胞元中有一定的作用，可能機(jī)制包括：(1)托吡酯對神經(jīng)元方便可有效阻斷，但該作用與托吡酯使用后時(shí)間有關(guān)，主要是通過阻斷鈉通道達(dá)到阻斷神經(jīng)元放電的目的；(2)該藥物通過激活GABAA受體頻率，以提高氯離子內(nèi)流，進(jìn)而以增強(qiáng)抑制中樞神經(jīng)遞質(zhì)作用；(3)托吡酯通過使谷氨酸AMPA受體活性下降以抑制中樞神經(jīng)遞質(zhì)[8]。本文結(jié)果顯示，B組大鼠Glu、GABA水平明顯比C組低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示托吡酯能明顯降低腦缺血再灌注大鼠Glu、GABA水平，有利于其神經(jīng)功能恢復(fù)，與劉姜冰等[9]研究結(jié)果基本一致。另外，B組大鼠神經(jīng)功能評分明顯比C組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示托吡酯對腦缺血再灌注大鼠有神經(jīng)保護(hù)作用，可能與其降低Glu、GABA水平有關(guān)。

綜上所述，托吡酯對腦缺血再灌注損傷大鼠神經(jīng)有保護(hù)作用，可能是通過降低Glu及GABA水平達(dá)到明顯改善大鼠神經(jīng)功能的目的，值得臨床進(jìn)一步研究應(yīng)用。

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(收稿2015-09-26)

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