液相色譜—高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜法快速篩查食品中香港規(guī)例農(nóng)藥殘留

潘孝博+伊雄海+時(shí)逸吟+趙善貞+盛永剛+鄧曉軍+朱堅(jiān)+丁卓平

摘 要 建立了液相色譜四級(jí)桿串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜法測(cè)定食品中249種香港《食物內(nèi)殘余除害劑規(guī)例》農(nóng)藥殘留的篩查方法。樣品經(jīng)1%甲酸乙腈提取，改進(jìn)的QuEChERS方法提取凈化，Agilent Poroshell 120 ECC18色譜柱（150 mm×3 mm i.d.， 2.7 μm）分離，流動(dòng)相為0.1%甲酸水和甲醇溶液， 梯度洗脫，電噴霧離子源，正模式下偵測(cè)，建立了一級(jí)精確質(zhì)量和二級(jí)碎片離子質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)，并且對(duì)11種典型食品的基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行考察，基質(zhì)匹配外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，在10～500 μg/kg濃度范圍內(nèi)，249種目標(biāo)化合物線性關(guān)系良好（r>0.99），方法定量限為10～100 μg/kg（S/N≥10），在大米、香菇、黃豆、菠菜、西紅柿、西蘭花、柚子、韭菜、胡蘿卜、生菜、黃瓜中3個(gè)添加水平的平均回收率范圍分別為23.2%～133.2%， 35.6%～137.6%和38.7%～140.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在1.3%～19.2%之間（n=6）。方法操作簡(jiǎn)便，耗時(shí)短，靈敏度高，穩(wěn)定性好，用于日常篩查檢測(cè)可顯著降低檢測(cè)成本，具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

關(guān)鍵詞 液相色譜四級(jí)桿串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜法； 篩查； 農(nóng)藥殘留

20151116收稿； 20160304接受

本文系上海出入境檢驗(yàn)檢疫課題（Nos. HK0082015，HK0052015）、上海市技術(shù)性貿(mào)易措施應(yīng)對(duì)專(zhuān)項(xiàng)（Nos. 14TBT006，15TBT004，15TBT005）和上海市技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)專(zhuān)項(xiàng)（No. 15DZ0503201）資助

Email： yixh@shciq.gov.cn

1 引 言

2014年8月1日開(kāi)始實(shí)施的香港食物中殘余除害劑管理制度《食物內(nèi)殘余除害劑規(guī)例》（簡(jiǎn)稱(chēng)《規(guī)例》）規(guī)管農(nóng)藥數(shù)量360種、7083個(gè)限量標(biāo)準(zhǔn)，涉及584種（類(lèi)）食品、農(nóng)產(chǎn)品[1]，遠(yuǎn)低于《GB 27632014食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量》有關(guān)限量要求標(biāo)準(zhǔn)，許多限量標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)地未制定。中國(guó)內(nèi)地是香港特區(qū)食品的主要供應(yīng)地，占香港進(jìn)口總量的9成以上，將直接影響內(nèi)地每年約47億美元供港食品農(nóng)產(chǎn)品[2]，《規(guī)例》的出臺(tái)對(duì)供港食品提出了更高的質(zhì)量安全要求，同時(shí)也對(duì)農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)提出挑戰(zhàn)。然而，目前我國(guó)缺乏針對(duì)《規(guī)例》中農(nóng)藥的高通量檢測(cè)技術(shù)。針對(duì)香港《規(guī)例》特別是其獨(dú)有目標(biāo)物建立篩查檢測(cè)方法，對(duì)于供港食品監(jiān)督檢測(cè)部門(mén)提供技術(shù)支持，以及我國(guó)內(nèi)地尚未在《規(guī)例》中規(guī)定殘留限量的農(nóng)藥提供檢測(cè)方法的參考，都具有重要意義。

目前，農(nóng)藥殘留檢測(cè)的方法主要有氣相色譜法[3]和液相色譜法[4，5]，這些方法主要針對(duì)單類(lèi)別目標(biāo)化合物檢測(cè)，儀器靈敏度已逐漸不能完全滿(mǎn)足國(guó)內(nèi)外對(duì)殘留物越來(lái)越低及不得檢出的限量要求，且定性能力較差。近年來(lái)，色譜與單級(jí)或串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)的結(jié)合，靈敏度和定性能力的逐步提升，氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法和液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法已成為農(nóng)藥殘留痕量分析的主流技術(shù)[6～8]，通過(guò)選擇離子監(jiān)測(cè)模式及多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式實(shí)現(xiàn)多種化合物的同時(shí)定性定量檢測(cè)，由于受儀器掃描速度限制，檢測(cè)通量有限且只適合已知目標(biāo)物的檢測(cè)。隨著高分辨質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展，飛行時(shí)間質(zhì)譜法憑借高通量、高分辨率、譜庫(kù)檢索、不依靠標(biāo)準(zhǔn)品也可分析等能力開(kāi)始在痕量分析領(lǐng)域得到應(yīng)用，配合高通量、全質(zhì)量數(shù)據(jù)采集以及譜庫(kù)檢索等功能可以快速、準(zhǔn)確對(duì)大量化合物篩查測(cè)定[9]。研究者也在食品農(nóng)殘檢測(cè)領(lǐng)域進(jìn)行了探索性的研究[10～12]，然而這些研究主要針對(duì)單一基質(zhì)中多類(lèi)化合物篩查或多種基質(zhì)中一類(lèi)化合物篩查，且前處理較為復(fù)雜，試劑用量大，檢測(cè)周期長(zhǎng)等特點(diǎn)，不能適應(yīng)實(shí)際工作中遇到的多種復(fù)雜基質(zhì)中跨類(lèi)別化合物非定向高通量篩查的要求。

本研究建立了應(yīng)對(duì)香港《規(guī)例》多組分高通量篩查系統(tǒng)平臺(tái)，根據(jù)目標(biāo)物性質(zhì)不同，采用LCQTOF技術(shù)可檢測(cè)249種化合物。 本實(shí)驗(yàn)采用改進(jìn)的QuEChERS法進(jìn)行前處理，應(yīng)用LCQTOF技術(shù)，實(shí)現(xiàn)《規(guī)例》中249種目標(biāo)物在11種典型食品基質(zhì)中殘留量的定性定量檢測(cè)。本方法將液相四級(jí)桿串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜高分離定性能力與QuEChERS前處理快速靈敏高效等特點(diǎn)充分結(jié)合，具有前處理易操作、檢測(cè)周期短、篩查通量高、定性準(zhǔn)確等特點(diǎn)。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器和試劑

Agilent G6540液相色譜四級(jí)桿串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜儀，配有Dual Agilent Jet Stream Electrospray Ionization （Dual AJS ESI）源； MilliQ超純水機(jī)（美國(guó)Millipore公司）； PL602L電子天平（瑞士MettlerToledo公司）； Allegra X30R Centrifuge離心機(jī)； 乙腈、甲醇（ HPLC純，迪馬科技有限公司）； 乙酸銨、無(wú)水MgSO4、NaCl、二水合檸檬酸鈉、檸檬酸二鈉鹽均為分析純（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）； 甲酸（純度98%，德國(guó)Fluka公司）； 十八烷基鍵合硅膠吸附劑（C18）、N丙基乙二胺吸附劑（PSA）、石墨化炭黑（GCB）（上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司）； 249種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品： 純度≥95%（Dr.Ehrenstorfer GmbH）。

2.2 色譜質(zhì)譜條件

Agilent Poroshell 120 ECC18色譜柱（150 mm×3 mm i.d.， 2.7 μm）； 柱溫40℃； 進(jìn)樣量3 μL； 流動(dòng)相： A相為0.1%（V/V）甲酸溶液（含5 mmol/L乙酸銨），B相為甲醇溶液。梯度洗脫程序： 0～1.0 min，95% A； 1.0～6.0 min，95%～40% A； 6.0～16.0 min， 40%～0% A； 16.0～20.0 min， 0% A； 20.0～25.0 min，0～95% A。流速： 0.4 mL/min。

離子源： Dual AJS ESI源； 掃描方式： 正離子掃描； 掃描范圍m/z 50～1000； 毛細(xì)管電壓： 4000 V； 鞘氣溫度： 350℃； 鞘氣流速： 11 L/min； 干燥氣溫度： 280℃； 干燥氣流速： 9 L/min； 霧化氣壓力： 40 psi； 去簇電壓： 125 V； 錐孔電壓： 65 V； 八級(jí)桿射頻電壓： 750 V。

2.3 樣品前處理

2.3.1 提取 準(zhǔn)確稱(chēng)取10.0 g新鮮果蔬樣品（谷物稱(chēng)取5.0 g樣品，加入5 mL水），于50 mL塑料離心管中，加入10 mL 1%甲酸乙腈提取，快速加入4.0 g MgSO4、1.0 g NaCl、1.0 g二水合檸檬酸鈉、0.5 g檸檬酸二鈉鹽，劇烈振蕩1 min，靜置5 min，再次劇烈振蕩1 min，4500 r/min離心10 min。移取上清液6 mL至15 mL離心管。

2.3.2 凈化 在上述裝有上清液的離心管中加入150.0 mg C18，150.0 mg PSA，900.0 mg MgSO4，15.0 mg GCB粉末，振蕩混勻2 min，4500 r/min離心5 min，移取4 mL上清液，加入40 μL含5%甲酸的乙腈，混勻。取0.5 mL上述提取液，乙腈定容至1 mL，過(guò)膜后檢測(cè)。

2.4 數(shù)據(jù)庫(kù)的建立

2.4.1 一級(jí)精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫(kù) 在優(yōu)化的色譜質(zhì)譜條件下進(jìn)樣，對(duì)249種化合物先進(jìn)行一級(jí)質(zhì)譜全掃描，獲得目標(biāo)物的保留時(shí)間、母離子、質(zhì)量偏差，以及離子化形式等信息。通過(guò)在PCDL數(shù)據(jù)庫(kù)軟件中輸入每種農(nóng)藥的名稱(chēng)、保留時(shí)間、分子式、精確相對(duì)分子質(zhì)量、CAS號(hào)，建立了249種化合物的一級(jí)精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫(kù)。

2.4.2 二級(jí)碎片離子數(shù)據(jù)庫(kù) 將目標(biāo)物精確質(zhì)量母離子在不同碰撞能量下（10， 20， 30和45 eV）進(jìn)行測(cè)定，采集二級(jí)譜圖庫(kù)所需要的子離子信息，通過(guò)PCDL軟件，建立化合物二級(jí)信息譜庫(kù)，包括母離子、保留時(shí)間、不同碰撞能量下二級(jí)全掃描譜圖。

3 結(jié)果與討論

3.1 色譜柱的優(yōu)化

為了取得更好的分離效果，實(shí)驗(yàn)對(duì)比了Agilent ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18全多孔填料色譜柱（100 mm×3.0 mm i.d.， 1.8 μm）與Agilent Poroshell 120 ECC18表面多孔填料色譜柱（150 mm×3 mm i.d.， 2.7 μm）的柱效。結(jié)果顯示： Poroshell 120 ECC18的柱效為Eclipse Plus C18的90%，但壓力卻只有其60%。原因可能是由于表面多孔微粒色譜柱填料結(jié)構(gòu)的作用[13]。由于存在實(shí)心核，與全多孔顆粒填料相比，溶質(zhì)具有更短的擴(kuò)散通道，可有效減少色譜峰展寬，提高柱效。當(dāng)Poroshell 120 ECC18色譜柱與ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18色譜柱在相同柱壓時(shí)，前者柱效更高，較低的柱壓對(duì)于色譜柱的使用壽命，以及儀器的日常維護(hù)都具有重要作用，所以實(shí)驗(yàn)最終選用Poroshell 120 ECC18色譜柱。

3.2 流動(dòng)相的選擇

本實(shí)驗(yàn)根據(jù)極性大小為指標(biāo)將化合物分類(lèi)，并選擇了16種典型物質(zhì)作為前處理技術(shù)優(yōu)化的研究對(duì)象。弱極性物質(zhì)選擇菊酯類(lèi)農(nóng)藥溴氰菊酯與氟氰戊菊酯，強(qiáng)極性物質(zhì)選擇季銨鹽類(lèi)農(nóng)藥矮壯素以及三嗪類(lèi)農(nóng)藥滅蠅胺，中等極性物質(zhì)分別選擇氨基甲酸酯類(lèi)、煙堿類(lèi)、三唑類(lèi)、咪唑類(lèi)、苯氨基嘧啶類(lèi)、氰乙酰胺類(lèi)、甲氧基丙烯酸酯類(lèi)等12種農(nóng)藥。對(duì)以上16種物質(zhì)分別在乙腈水與甲醇水流動(dòng)相體系（水相中分別添加0.1%甲酸和5 mmol/L乙酸銨）色譜表現(xiàn)進(jìn)行對(duì)比研究。實(shí)驗(yàn)表明，在不同流動(dòng)相下目標(biāo)化合物的分離度存在差異，并且質(zhì)譜響應(yīng)強(qiáng)弱不同。在乙腈流動(dòng)相體系，目標(biāo)物出峰時(shí)間在1.0～14.2 min之間， 而在甲醇流動(dòng)相體系，目標(biāo)物在1.8～16.2 min之間出峰（圖1），物質(zhì)在甲醇流動(dòng)相體系中保留能力較強(qiáng)，例如滅蠅胺在乙腈水流動(dòng)相條件下無(wú)保留，而在甲醇水流動(dòng)相條件下保留情況良好，可能是由于乙腈和甲醇的洗脫能力以及粘度差異導(dǎo)致[14]。在質(zhì)譜響應(yīng)強(qiáng)度方面，化合物在甲醇水流動(dòng)相體系比在乙腈水流動(dòng)相體系響應(yīng)值高，這與藍(lán)芳等[15]的研究結(jié)果一致，推測(cè)原因?yàn)橐译媸欠琴|(zhì)子溶劑，甲醇是質(zhì)子溶劑，甲醇OH中的H可微弱電離，母離子受生成的加H形式的物質(zhì)離子促進(jìn)，故其峰面積提高。因此，本實(shí)驗(yàn)采用0.1%甲酸（含5 mmol/L乙酸銨）甲醇作為最優(yōu)流動(dòng)相。

3.3 樣品前處理方法優(yōu)化

3.3.1 提取溶劑的優(yōu)化 分別考察了乙酸乙酯、甲醇、乙腈和1%甲酸乙腈對(duì)16種典型的化合物的提取效率，標(biāo)準(zhǔn)品用空白基質(zhì)液配制，以黃瓜基質(zhì)中加標(biāo)濃度為10 μg/kg目標(biāo)物的回收率為考察指標(biāo)。結(jié)果顯示（表1），采用甲醇提取時(shí)共提物色素較少，回收率范圍為0%～49.0%，其中氟氰戊菊酯與溴氰菊酯無(wú)法回收。乙酸乙酯提取時(shí)，矮壯素?zé)o法回收，抗蚜威與多菌靈回收率小于20%。用乙腈提取時(shí)，目標(biāo)物回收率范圍在47.9%～123.4%之間。而采用1%甲酸乙腈提取時(shí)，考察的化合物回收率均在50.1%～107.1%之間，提取效果最佳，因此本實(shí)驗(yàn)選擇1%甲酸乙腈作為提取溶劑。

3.3.2 正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化吸附劑 采用正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化QuEChERS凈化組合粉末并比較實(shí)驗(yàn)因素主效應(yīng)大小。經(jīng)初步實(shí)驗(yàn)選定C18，PSA，GCB，MgSO4為凈化效果的主要影響因素，每種因素選擇3個(gè)水平，設(shè)計(jì)L9（34）4因素3水平實(shí)驗(yàn)，以黃瓜基質(zhì)中16種典型化合物平均回收率作為評(píng)定依據(jù)，通過(guò)正交找到最優(yōu)凈化組合。正交實(shí)驗(yàn)詳情如表2所示。

結(jié)果表明，影響回收率的因素主次為PSA>MgSO4>GCB>C18，即PSA對(duì)回收率的影響最大，MgSO4次之，C18比較小?？疾霢， B， C， D 4因素在3個(gè)水平上的變化，最佳的凈化組合為A2B2C3D1，即150.0 mg C18，150.0 mg PSA，900.0 mg MgSO4，15.0 mg GCB時(shí)目標(biāo)化合物平均回收率最高，凈化效果最好，本實(shí)驗(yàn)采用該組合作為最優(yōu)凈化方案。

3.4 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

3.4.1 母離子加合形式的選擇 離子源為電噴霧雙噴源，數(shù)據(jù)在正模式下采集，有225種化合物母離子加合形式為[M+H]+； 18種化合物加合形式為[M+NH4]+，一些菊酯類(lèi)物質(zhì)母離子為[M+NH4]+時(shí)響應(yīng)較好，并且響應(yīng)值在甲醇流動(dòng)相中比在乙腈流動(dòng)相中高（見(jiàn)圖1），劉浩等[16]的研究也發(fā)現(xiàn)相同現(xiàn)象； 水胺硫磷與溴螨酯監(jiān)測(cè)母離子加合形式為[M+Na]+； 矮壯素加合形式為[M-CL+H]+，王金花等[17]的研究也有相同發(fā)現(xiàn)； 敵草快監(jiān)測(cè)母離子加和形式為[M2++H]+，這與李捷等[18]實(shí)驗(yàn)結(jié)論相同； 有些化合物在離子化過(guò)程中會(huì)發(fā)生中性丟失現(xiàn)象，如百草枯與三環(huán)錫，加合形式分別為[M-H2O+H]+及[M-CH3+H]+。因篇幅有限，現(xiàn)將16種典型化合物保留時(shí)間、定量限及質(zhì)譜信息整理如表3所示。

3.4.2 二級(jí)質(zhì)譜最佳碰撞能量?jī)?yōu)化

對(duì)每種物質(zhì)采集10， 20， 30， 45 eV能量下二級(jí)質(zhì)譜圖，根據(jù)不同碰撞能量下母離子碎裂程度，選擇母離子特征離子明顯，碎片離子分布均勻，響應(yīng)良好的二級(jí)質(zhì)譜圖下的碰撞能量為最佳碰撞能量。

3.4.3 二級(jí)質(zhì)譜定性確證 通過(guò)對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行一級(jí)精確質(zhì)量質(zhì)譜分析，會(huì)有出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果的可能，此時(shí)需對(duì)疑似化合物進(jìn)行二級(jí)子離子信息確證。確證過(guò)程為： 在Targeted MS/MS采集模式下，輸入偵測(cè)疑似目標(biāo)物母離子，保留時(shí)間及最佳碰撞能量，測(cè)定結(jié)果用二級(jí)質(zhì)譜庫(kù)檢索，根據(jù)歐盟SANCO/12571/2013決議[19]，當(dāng)有兩個(gè)及兩個(gè)以上的特征離子匹配，則可確證其為目標(biāo)物。在確證的過(guò)程中為了排除雜質(zhì)離子對(duì)檢索的干擾，常需扣除背景。以霜脲氰為例，圖2為柚子基質(zhì)中背景扣除前后鏡像比對(duì)質(zhì)譜圖。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在樣品背景中含有m/z 95.0483和m/z 146.0827兩個(gè)干擾離子，從而使碎片離子的比例發(fā)生改變， 造成匹配檢索結(jié)果分值過(guò)低，扣除背景后干擾離子被排除，子離子的相對(duì)比例正常，提高了匹配分值，達(dá)到常規(guī)檢索確證得分60分的要求，這樣可以直接通過(guò)譜圖檢索得分情況對(duì)化合物進(jìn)行確證，而不用進(jìn)行手動(dòng)比對(duì)子離子匹配排查，大大節(jié)約數(shù)據(jù)處理時(shí)間。

3.5 基質(zhì)效應(yīng)的評(píng)價(jià)

液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜中的基質(zhì)效應(yīng)由分析物的共流出組分影響電噴霧接口的離子化效率所致，表現(xiàn)為離子增強(qiáng)或抑制作用[20]。實(shí)驗(yàn)考察了11種典型食品的基質(zhì)效應(yīng)，在純?cè)噭┖筒煌|(zhì)提取液后添加標(biāo)樣，比較目標(biāo)物在純?cè)噭┖突|(zhì)液中的信號(hào)峰面積，得到基質(zhì)響應(yīng)相對(duì)強(qiáng)度（ME）為（基質(zhì)標(biāo)樣的峰面積/試劑標(biāo)樣的峰面積）×100%[21]。結(jié)果表明，在高含水量的果蔬中，如生菜、黃瓜、西紅柿、新鮮黃豆中至少有14種物質(zhì)基質(zhì)效應(yīng)在80%～120%之間，基質(zhì)效應(yīng)不明顯。在大米基質(zhì)中有11種物質(zhì)基質(zhì)效應(yīng)<80%，表現(xiàn)為基質(zhì)抑制效應(yīng)，可能是較低的含水量濃縮了基質(zhì)共萃物，導(dǎo)致基質(zhì)效應(yīng)較顯著。除此之外，在高蛋白低脂肪的鮮香菇有9種物質(zhì)基質(zhì)效應(yīng)<80%，表明在高含水量的基質(zhì)中，蛋白質(zhì)含量對(duì)基質(zhì)抑制的效果形成有一定影響，這與報(bào)道過(guò)的基質(zhì)組分對(duì)基質(zhì)效應(yīng)的影響結(jié)論類(lèi)似[22]。蟲(chóng)酰肼在大米、菠菜、西蘭花、柚子、胡蘿卜中基質(zhì)效應(yīng)>120%，表現(xiàn)基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，可能與該物質(zhì)的性質(zhì)有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)選用基質(zhì)匹配溶液校正方法對(duì)基質(zhì)效應(yīng)補(bǔ)償，保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3.6 方法學(xué)驗(yàn)證

3.6.1 線性范圍和定量限 以各種空白基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，各濃度點(diǎn)分別為10， 20， 50， 100和500 μg/kg。以峰面積y為縱坐標(biāo)，濃度x為橫坐標(biāo)，各目標(biāo)化合物在10～500 μg/kg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（r）均大于0.99。在基質(zhì)空白樣品中添加標(biāo)準(zhǔn)溶液，以S/N≥10確定方法定量限。結(jié)果顯示，目標(biāo)物中有163種物質(zhì)定量限為10 μg/kg，33種物質(zhì)定量限為20 μg/kg，36種物質(zhì)定量限為50 μg/kg，17種物質(zhì)定量限為100 μg/kg。

3.6.2 回收率及精密度 選用11種食品基質(zhì)考察本方法的準(zhǔn)確性，基質(zhì)選擇涉及成分較復(fù)雜的高含水量蔬菜，如菠菜、韭菜等； 也包括低水分、低脂肪、高淀粉谷物類(lèi)如大米、黃豆； 以及高酸、高含水量柑橘類(lèi)水果柚子。在上述空白基質(zhì)中做濃度為10、50和100 μg/kg的添加回收實(shí)驗(yàn)，在2.2節(jié)條件下測(cè)定，每個(gè)添加濃度水平做6份平行樣品。249種化合物在大米、香菇、黃豆、菠菜、西紅柿、西蘭花、柚子、韭菜、胡蘿卜、生菜、黃瓜中3個(gè)添加水平下的平均回收率分別為23.2%～133.2%， 35.6%～137.6%和38.7%～140.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在1.3%～19.2%之間（n=6）。

3.7 實(shí)際樣品測(cè)定

實(shí)驗(yàn)對(duì)某地區(qū)534例市售水果蔬菜進(jìn)行檢測(cè)，其中383例樣品未檢出，檢出率28.3%。葡萄、草莓、芹菜、青菜等樣品的農(nóng)藥檢出率較高。檢出頻率較高的為多菌靈和烯酰嗎啉等殺菌劑和殺蟲(chóng)劑。

4 結(jié) 論

建立了針對(duì)香港《規(guī)例》中249種化合物的LCQTOF篩查與確證方法，對(duì)提取試劑、流動(dòng)相組成、凈化吸附劑組合、質(zhì)譜條件進(jìn)行優(yōu)化，并對(duì)基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行了評(píng)價(jià)，本實(shí)驗(yàn)方法將QuEChERS前處理與高分辨質(zhì)譜檢測(cè)結(jié)合，可實(shí)現(xiàn)11種復(fù)雜基質(zhì)中目標(biāo)化合物快速準(zhǔn)確篩查分析，本方法快速、高效、準(zhǔn)確度高，回收率符合國(guó)際上痕量分析的規(guī)定。

References

1 Hong Kong Department of Justice Bilingual Laws Information System， Pesticide Residues in Food Regulation （CAP132M）， http：//translate.legislation.gov.hk/gb/www.legislation.gov.hk/blis_pdf.nsf/6799165D2FEE3FA94825755E0033E532/841E356CA9DBCE94482579F30053D610？OpenDocument&bt=0， 2014

2 L Tian. China Food， 2014， （18）： 58-59

呂 田. 中國(guó)食品， 2014， （18）： 58-59

3 Shen Z G， He Z Y， Wang P， Zhou Z Q， Sun M J， Li J D， Liu D H. Anal. Chim. Acta， 2013， 793： 37-43

4 Li N， Chen J， Shi Y P. Talanta， 2015， 141： 212-219

5 RAO Zhu， LI Song， HE Miao， SU Jin. Chinese J. Anal. Chem.， 2007， 35（7）： 954-958

饒 竹， 李 松， 何 淼， 蘇 勁. 分析化學(xué)， 2007， 35（7）： 954-958

6 Mujawar S， Utture S C， Fonseca E， Matarrita J， Banerjee K. Food Chem.， 2014， 150（5）： 175-181

7 Kasiotis K M， Anagnostopoulos C， Anastasiadou P， Machera K. Sci. Total Environ.， 2014， 485486（7）： 633-642

8 YAN Rui， SHAO MingYuan， J FuLong， SONG DaQian， ZHANG HanQi， Y AiMin. Chinese J. Anal Chem.， 2013， 41（2）： 315-316

閆 蕊， 邵明媛， 鞠福龍， 宋大千， 張寒琦， 于愛(ài)民. 分析化學(xué)， 2013， 41（2）： 315-316

9 Meng Z， Shi Z H， Liang S X， Dong X F， Lv Y K， Sun H W. Food Control， 2015， 55： 158-165

10 Sivaperumal P， Anand P， Riddhi L. Food Chem.， 2015， 168： 356-365

11 YU Lu， SONG Wei， L YaNing， ZHAO MuYu， ZHOU FangFang， HU YanYun， ZHENG Ping. Chinese Journal of Chromatography， 2015， 33（6）： 597-612

余 璐， 宋 偉， 呂亞寧， 趙暮雨， 周芳芳， 胡艷云， 鄭 平. 色譜， 2015， 33（6）： 597-612

12 ZHAO ZhiYuan， SHI ZhiHong， KANG Jian， PENG Xing， CAO XinYue， FAN ChunLin， PANG GuoFang， L MeiLing. Chinese Journal of Chromatography， 2013， 31（4）： 372-379

趙志遠(yuǎn)， 石志紅， 康健， 彭 興， 曹新悅， 范春林， 龐國(guó)芳， 呂美玲. 色譜， 2013， 31（4）： 372-379

13 ZHU Jian. Journal of Inspection and Quarantine， 2012， 22（5）： 1-7

朱 堅(jiān). 檢驗(yàn)檢疫學(xué)刊， 2012， 22（5）： 1-7

14 WU Cheng， ZHAO ZhiQiang. Chinese Journal of Analysis Laboratory， 2015， 34（6）： 711-716

吳 成， 趙志強(qiáng). 分析試驗(yàn)室， 2015， 34（6）： 711-716

15 LAN Fang， ZHANG Yi， YUE ZhenFeng， LIN ShanShan， WU WeiDong， WU FengQi， ZHAO FengJuan， ZHANG Feng， CHENG Cheng. Journal of Instrumental Analysis， 2012， 12（31）： 1471-1478

藍(lán) 芳， 張 毅， 岳振峰， 林珊珊， 吳衛(wèi)東， 吳鳳琪， 趙鳳娟， 張 峰， 程 程. 分析測(cè)試學(xué)報(bào)， 2012， 12（31）： 1471-1478

16 LIU Hao， GAN ZhiYong. Environmental Science and Management， 2014， 39（10）： 134-143

劉 浩， 甘志永. 環(huán)境科學(xué)與管理， 2014， 39（10）： 134-143

17 WANG JinHua， LU XiaoYu， HHUANG Mei， WU Zhuan， MA GuiPing， XU ChaoYi. Chinese J. Anal Chem.， 2007， 35（10）： 1509-1512

王金花， 盧曉宇， 黃 梅， 吳 瑑， 馬貴平， 徐超一. 分析化學(xué)， 2007， 35（10）： 1509-1512

18 LI Jie， YANG Fang， LU ShengYu， LIU ZhengCai， WANG Yan， LAN JinChang， JIANG JinBin， CHEN YanGui. Chinese Journal of Analysis Laboratory， 2014， 33（5）： 537-541

李 捷， 楊 方， 盧聲宇， 劉正才， 王 彥， 藍(lán)錦昌， 江錦彬， 陳言貴. 分析試驗(yàn)室， 2014， 33（5）： 537-541

19 Guidance Document on Analytical Quality Control and Validation Procedures for Pesticide Residues Analysis in Food and Feed. European Commission Health & Consumer Protection DirectorateGeneral， SANCO/12571/2013

食品及飼料品農(nóng)藥殘留分析質(zhì)量控制和驗(yàn)證程序指導(dǎo)文件. 歐洲委員會(huì)健康和消費(fèi)者保護(hù)總司. SANCO/12571/2013

20 Eeckhaut A V， Lanckmans K， Sarre S， Smolders I， Michotte Y. J. Chromatogr. B.， 2009， 877（23）： 2198-2207

21 Periata A， Kohlera I， Thomasb A， Nicolic R， Boccarda J， Veutheya J L， Schapplera J， Guillarme D. J. Chromatogr. A.， DOI：10.1016/j.chroma. 2015. 09.035

22 Godula M， Hajlov J， Alterov K. J. High Resolution Chromatogr.， 1999， 22（7）： 395-402

Abstract A method for screening of 249 residue compounds of pesticide in foods from the Hongkong′s regulation was developed by liquid chromatography coupled with quadrupole timeofflight mass spectrometry （LCQTOF/MS）. The target analytes were dissolved in acetonitrile with 1% formic acid， then extracted and purified by using a modified QuEChERS method. The chromatographic separation was performed on an Agilent Poroshell 120 ECC18 column （150 mm×3 mm i.d.， 2.7 μm） with gradient elution using 0.1% （V/V） formic acid and methanol as mobile phase. The target compounds were monitored under positive ionization mode with ESI source. The matrix effects in 11 kinds of typical foods were considered and the quantification was carried out by matrixmatched with external standard method. Two databases of accurate mass and fragment ions were created. The results demonstrated that the linear range was from 10 μg/kg to 500 μg/kg with good correlation coefficients （r>0.90）. The method quantitation limits were in the range of 10-100 μg/kg （S/N≥10）. For rices， mushrooms， soybeans， spinaches， tomatoes， broccolies， grapefruits， chives， carrots， lettuces and cucumbers， the average recoveries at three spiked levels were in the range of 23.2%-133.2%， 35.6%-137.6%， and 38.7%-140.2%， and the relative standard deviations （RSDs） were 1.3%-19.2% （n=6）. The method is simple， timesaving with high sensitivity and good reproducibility， as well as having practical application for its low test cost.

Keywords Liquid chromatography coupled with quadrupole timeofflight mass spectrometry； Pesticide； Screening； Pesticide residue