隴南油橄欖主要病原真菌的分離與鑒定*

何明崗, 梁小剛, 曹永紅, 呂瑞娥

(1.甘肅省隴南市康縣林業(yè)局，甘肅 康縣 746599； 2.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)院林學(xué)專業(yè)，甘肅 蘭州 730070；3.甘肅隴南市經(jīng)濟林研究院，甘肅 武都 746000)

?

隴南油橄欖主要病原真菌的分離與鑒定*

何明崗1, 梁小剛2, 曹永紅3, 呂瑞娥3

(1.甘肅省隴南市康縣林業(yè)局，甘肅 康縣 746599； 2.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)院林學(xué)專業(yè)，甘肅 蘭州 730070；3.甘肅隴南市經(jīng)濟林研究院，甘肅 武都 746000)

為了解隴南油橄欖存在的主要病原真菌種類，對來自隴南兩個縣的10份油橄欖病害樣本進行分離鑒定，經(jīng)鑒定隴南油橄欖病害的主要病原真菌為：煤炱屬(CapnodiumMont)、炭疽菌屬(ColletotrichumCda.)、環(huán)梗孢屬(SpillocaeaFr.)。煤炱屬、炭疽菌屬、環(huán)梗孢屬分布范圍廣，在油橄欖的葉片、果實都能分離到。葉部是病原真菌存在的最主要部位。

油橄欖；病原真菌；種類；鑒定；隴南

油橄欖(Oleaeuropaea)是地中海地區(qū)傳統(tǒng)而重要的木本油料樹種之一，已有40多個國家引種栽植油橄欖[1]。隴南從1976年開始引種油用油橄欖，上世紀90年代后期進入發(fā)展高峰期，目前隴南的武都、文縣、宕昌3縣、區(qū)40個鄉(xiāng)鎮(zhèn)種植面積達0.33萬hm2。2003年油橄欖果實產(chǎn)量達200萬kg，產(chǎn)油3.2萬kg，特別是隴南境內(nèi)的白龍江沿岸，其生長狀況良好、掛果期提前，出油率、油品質(zhì)量等多項指標優(yōu)于原產(chǎn)地，是隴南山區(qū)群眾致富的支柱產(chǎn)業(yè)[2]。但由于當?shù)胤N植面積增大，管理技術(shù)較為粗放，造成油橄欖生長過程中出現(xiàn)了孔雀羽斑病(CycloconiumoleaginnumCast)、炭疽病(GloeasporiumolivarumAlm)、煤污病(Capnodiumeleaophilum)。因此，明確當?shù)赜烷蠙熘饕≡婢姆N類對于提高防治效率具有重要意義。本實驗通過對隴南地區(qū)油橄欖樣品病原真菌的分離鑒定，明確了目前隴南油橄欖上的上存在的病害真菌微生物種類，為油橄欖病害防治提供了清晰的對象。

1.材料與方法

1.1材料

供試油橄欖樣本來自甘肅省林業(yè)科學(xué)技術(shù)推廣總站(采自甘肅省隴南市)，分離獲得的真菌菌株保存于甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)院森林培育實驗室。

1.2病原菌分離

剪取油橄欖葉片、果實、枝病健交界處,隨即選取9個病斑塊，大小為0.3 cm×0.5 cm用自來水沖洗干凈，再用吸水紙吸干組織表面水分，用無菌水潤洗2―3次后，用75 %乙醇處理15 s，無菌水沖洗1次，重復(fù)三次，用無菌濾紙吸干水分后置于PDA平板上(培養(yǎng)皿直徑9cm)， 每皿3小片，3個重復(fù)，25℃恒溫暗培養(yǎng)。3d后進行菌株分離、純化、鑒定、科赫法則驗證和經(jīng)過多次轉(zhuǎn)接獲得純培養(yǎng)物，PDA斜面4℃冰箱保存?zhèn)溆?。為抑制細菌生長，配制PDA時在滅菌前每升培養(yǎng)基中加入2 mL氯霉素[3]。

2.結(jié)果與分析

2.1調(diào)查取樣地點

調(diào)查取樣點見表1.采集樣本來源于甘肅省隴南市武都縣和文縣的十個油橄欖栽植區(qū)，具有一定的普遍性。10份病害樣品來自于葉、果等。

表1 調(diào)查取樣地點

2.2病原真菌種類分析

從采集的油橄欖病害樣本中分離到的病原真菌有3種。分別為煤炱屬(CapnodiumMont)、炭疽菌屬(ColletotrichumCda.)、環(huán)梗孢屬(SpillocaeaFr.)。在這三種真菌中，炭疽菌屬(ColletotrichumCda.)、環(huán)梗孢屬(SpillocaeaFr.)為油橄欖常見的病原真菌，其余一種未見在油橄欖上有發(fā)生報道。

2.3病原物形態(tài)鑒定

分離到的各種病原真菌在培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)及孢子特征(圖1、圖2、圖3)如下：

6.可以以此教學(xué)模式為基礎(chǔ)，成立“大型養(yǎng)路機械專業(yè)”人才培養(yǎng)基地；研發(fā)“大型養(yǎng)路機械3D模擬仿真平臺”創(chuàng)建校內(nèi)培訓(xùn)基地，以安全的環(huán)境，真實地反映現(xiàn)場的工作過程，使學(xué)生得到初步鍛煉，擁有一定的技術(shù)水平，才可以到企業(yè)進行崗位實訓(xùn)，并取得相應(yīng)崗位證書。

圖1 煤炱屬；編號：6-1-G-1、8-2-Y-2、5-2-G-1、9-2-G-3

煤炱菌主要在熱帶和亞熱帶地區(qū)植物葉、果實和綠色莖表面生，偶爾浸入角質(zhì)層，靠蚜蟲和介殼蟲分泌的蜜露生活，形成暗色菌絲層，與植物沒有寄生關(guān)系，菌絲層在植物表面像一層黑紙，很容易揭下來。對植物的影響主要是遮光，阻礙光合作用，破壞觀賞植物外形美觀。[4]

煤炱屬(CapnodiumMont)菌絲絨毛狀，由圓形細胞組成。菌絲常由念珠狀或黏結(jié)的菌絲，子囊座無剛毛，表面光滑，或有菌絲狀附屬絲。子囊孢子具縱橫隔膜，磚格形，多胞、褐色[5]。

圖2 炭疽菌屬 編號：4-2-Y-1、2-1-G-1、2-1-G-2

果實、葉片、枝梢、花芽和葉芽均可受害。果實受害，初期有褐色小斑著生于果皮上，然后逐漸擴大為黑色圓形病斑，有時數(shù)個病斑連成不規(guī)則形，邊緣不明顯，后有輪生小黑點出現(xiàn)，即病菌的分生孢子盤[6]。

病斑多發(fā)生在新梢基部，呈梭形或橢圓形，略下陷，邊緣淡紅色，后期呈黑褐色，中部帶灰色，有黑色小點及縱向裂紋。葉片受害時，病斑常自葉尖處發(fā)生，呈半圓形，黑褐色或黃褐色，邊緣紫紅色，后期呈灰白色。枝干上的病斑呈梭形潰瘍或不規(guī)則下陷，剝?nèi)テ?，可見黑色木質(zhì)部[7]。

炭疽菌屬(ColletotrichumCda.)分生孢子單胞，無色，長橢圓形或彎月形，萌發(fā)后產(chǎn)生附著胞(Appressoria)；分生孢子盤平坦，上面敞開，下面略埋在基質(zhì)內(nèi)，分生孢子自茁壯的梗上頂生[8]。

孔雀斑病是油橄欖的主要病害之一，其為害特征為：病斑在葉片上初期為灰黑色小點，逐漸擴大，邊緣由淺褐色變?yōu)樯詈稚?，病斑外圍有一黃色暈環(huán)，形如孔雀斑，故名孔雀斑病。其為害部位主要為葉片，也能侵染果實及嫩枝，造成大量落葉、落果[3]。環(huán)梗孢屬(SpillocaeaFr.)菌絲在角質(zhì)層下，孢梗上部有環(huán)痕。分生孢子暗色，初單胞后雙胞。異名為CycloconiumCast.[2]。油橄欖孔雀斑病(S.oleaginum(Cast.)Hughes=CycloconiumoleaginumCast.)[3]

菌落及細胞形態(tài)：炭疽菌屬(ColletotrichumCda.)分生孢子單胞，無色，長橢圓形或彎月形，萌發(fā)后產(chǎn)生附著胞；分生孢子盤平坦，上面敞開，下面略埋在基質(zhì)內(nèi)，分生孢子自茁壯的梗上頂生[5]。(圖2)

菌落及細胞形態(tài)：環(huán)梗孢屬(SpillocaeaFr.)菌絲在角質(zhì)層下，孢梗上部有環(huán)痕。分生孢子暗色，初單胞后雙胞。異名為CycloconiumCast.[6]。(圖3)

圖3 環(huán)梗孢屬；編號：3-Y-3 6-G-3 4-Y-2 1-Y-3 10-Y-3

2.4病原物種類與其來源的寄主組織及地理分布的關(guān)系

病原真菌來自隴南油橄欖不同栽植區(qū)的不同組織部位，通過對分離鑒定到病原真菌的種類與其地理來源和組織部位的關(guān)系進行分析研究，發(fā)現(xiàn)煤炱屬只從武都縣油橄欖樣品中分離得到，而炭疽屬只從文縣的油橄欖樣品中分離得到，而環(huán)梗孢屬同時從武都縣和文縣的油橄欖樣品上分離得到。從病原真菌存在的寄主組織部位看，葉和果實是病原真菌主要寄生的部位，從油橄欖枝上未分離到病原真菌。

表2 病原物種類與其地理來源、組織部位的關(guān)系分析

2.5寄主不同組織部位與病原真菌種類分布關(guān)系

通過對寄主組織部位與病原真菌種類個數(shù)關(guān)系的進一步研究，發(fā)現(xiàn)從葉部分離得到的病原真菌種類及地域分布最多，其次是從果實中分離得到的，而未從油橄欖的枝上分離到病原真菌。

表3 寄主不同組織部位與病原真菌種類分布關(guān)系分析

3.結(jié)論與討論

3.1 通過對來自隴南油橄欖病害樣本進行分離鑒定，鑒定后確定隴南油橄欖病害主要病原真菌為：煤炱屬(Capnodium Mont)、炭疽菌屬(Colletotrichum Cda.)、環(huán)梗孢屬(Spillocaea Fr.)。

從分離到的病原真菌中，炭疽菌屬(Colletotrichum Cda.)、環(huán)梗孢屬(Spillocaea Fr.)為油橄欖常見的病原真菌[7―8]，其余一種未見在油橄欖上有發(fā)生報道，其致病性有待進一步研究。

3.2 從病原真菌的地理分布看，發(fā)現(xiàn)煤炱屬(Capnodium Mont)只從武都縣油橄欖樣品中分離得到，而炭疽屬(Colletotrichum Cda.)只從文縣的油橄欖樣品中分離得到，而環(huán)梗孢屬(Spillocaea Fr.)同時從武都縣和文縣的油橄欖樣品上分離得到。這說明這三種菌是油橄欖栽培地區(qū)普遍存在的病原真菌，尤其是環(huán)梗孢屬(Spillocaea Fr.)地理分布最廣。

3.3 從病原真菌的寄主組織來源看，除油橄欖的枝、葉和果實都可以分離到三種病原真菌，且葉部是各種病原真菌存在的主要部位。其次是果實，而未從枝上分離到病原真菌，說明枝部不是主要的帶菌體。另外，從各種研究結(jié)果看，葉部是油橄欖發(fā)生病害的主要部位[9]，果實的病害種類雖然少于葉部病害，但因為造成的損失較嚴重，因此成為油橄欖病害的重災(zāi)區(qū)。油橄欖枝部的病害發(fā)生較少，目前報道的也僅有油橄欖炭疽病、油橄欖叢枝病、油橄欖等[10]。因此建議在掛果前以防治葉部病害為主，掛果期重點防治果實病害是降低油橄欖病害發(fā)生程度、降低經(jīng)濟損失的主要途徑。

[1] Fabbri, Batolini G, LambardiI M,etal. 0live Propagation Manual[M]. Landlinks Press, 2004: 1.

[2]趙紅霞.淺議隴南油橄欖病蟲害的綜合防治技術(shù)[J].甘肅林業(yè),2007,32(03):75.

[3]方中達.植病研究方法[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1979:115―116.

[4]張中義,冷懷瓊,張志銘，等.植物病原真菌學(xué).[M].成都:四川科學(xué)技術(shù)出版社,1988:212―213.

[5]邵力平,沈瑞祥,張素軒,等.真菌分類學(xué)[M].北京:中國林業(yè)出版社,1984:324―325.

[6]邵力平,沈瑞祥,張素軒,等.真菌分類學(xué)[M].北京:中國林業(yè)出版社,1984:314―316.

[7]王曉鳴，李建義.陜西省炭疽菌的研究.[J]真菌學(xué)報,1987,6(04):211―218.

[8]陳守常,張金鐘,張麗珠.油橄欖孔雀斑病研究[J].植物病理學(xué)報,1981,11(08):37―40.

[9]楊蘭英.云南油橄欖病蟲害調(diào)查與綜合治理研究[J].林業(yè)調(diào)查規(guī)劃,2007,32(01):138―141.

[10]孫志東,石英,吳劫,等.四川西昌油橄欖主要病蟲害調(diào)查及防治[J].四川林業(yè)科技,2010,31(02):97―98.

(責任編輯 徐成東)

Isolation and Identification of Main Pathogen Fungi Species of Olive in South Gansu

HE Minggang, Liang Xiaogang, CAO Yonghong & LU Ruier

(ForestryBureauofKangxianCounty,Kangxian, 746599,GansuProvince;ForestryDept.,CollegeofForestry,GansuAgricultureUniversity,Lanzhou, 730070,GansuProvince;GansuLongnancityInstituteofEconomicForest,Wudu, 746000,GansuProvince)

To make the main pathogen fungi species clear of olive in South Gansu ,10 disease samples from two county of South Gansu were collected and isolated, main pathogen fungi species of olive in South Gansu after identificated that wereCapnodiumMont andColletotrichumCda andSpillocaeaFr.CapnodiumMont andColletotrichumCda andSpillocaeaFr.were wide distribution,They were isolated in leaves and fruits .The main tissue of pathogenic fungi was leaves.

olive; pathogen fungi; species; identification; South Gansu

中央財政林業(yè)科技推廣示范項目，項目編號：2014ZYTG07；隴南市科技局科技項目，項目編號：2014-08資助。

2016 - 07 - 21

何明崗(1975―)，男，助理工程師，研究方向：經(jīng)濟林栽培。

呂瑞娥(1973―)，女，工程師，研究方向：經(jīng)濟林有害生物防治。

Q949.32

A

1671 - 7406(2016)09 - 0039 - 05