冷沉淀制備過程質(zhì)控及其臨床應(yīng)用效果探討

蔣永紅

吉林省琿春市無償獻(xiàn)血中心采制科，吉林琿春 133300

冷沉淀制備過程質(zhì)控及其臨床應(yīng)用效果探討

蔣永紅

吉林省琿春市無償獻(xiàn)血中心采制科，吉林琿春 133300

目的 探討冷沉淀制備全程中的質(zhì)量控制方法及在嚴(yán)格質(zhì)控條件下去冷沉淀血漿可達(dá)到的臨床應(yīng)用效果。方法 回顧性分析該站2014年全年2 062份冷沉淀制備成功率，并總結(jié)出一套冷沉淀全程質(zhì)控方案，將實施后2015年全年2 271份冷沉淀制備成功率與實施前2014數(shù)據(jù)進(jìn)行對比，分析質(zhì)控方案效果。采取同一血樣分為3份，分別制備為新鮮冷凍血漿、普通冷凍血漿以及去冷沉淀血漿；分別測定3樣本中的凝血因子FV、FⅦ、FⅧ、FⅨ，纖維蛋白原及總蛋白數(shù)值并進(jìn)行對比分析。結(jié)果 質(zhì)控組冷沉淀制備合格率為99.91%，對照組冷沉淀制備合格率為75.02%，質(zhì)控組冷沉淀制備合格率為99.91%，顯著高于對照組，P<0.01；新鮮冷凍血漿中FⅧ （64.3± 11.2）%、FⅨ（83.9±9.6）%、纖維蛋白原（2.8±0.9）g/L及總蛋白（59.8±5.7）g/L均明顯高于去冷沉淀血漿，P<0.05，普通冷凍血漿中FⅧ（59.6±15.2）%、FⅨ（80.3±11.5）%纖維蛋白原（2.6±0.7）g/L及總蛋白（58.6±4.8）g/L均明顯高于去冷沉淀血漿，P<0.05。 結(jié)論 冷沉淀制備過程全程嚴(yán)格質(zhì)量控制可有效提高制備合格率，去冷沉淀血漿與新鮮冷凍血漿、普通冷凍血漿中的凝血因子FV、FⅦ、FⅧ、FⅨ，纖維蛋白原及總蛋白數(shù)值差異較大，因此去冷沉淀血漿在臨床應(yīng)用中無法達(dá)到新鮮冷凍血漿、普通冷凍血漿的臨床效果，臨床上應(yīng)根據(jù)具體情況選擇應(yīng)用。

冷沉淀；全程質(zhì)控；去冷沉淀血漿

冷沉淀是臨床中一種常見的血液制品，主要含有凝血因子FV、FⅦ、FⅧ、FⅨ，纖維蛋白原五項成分[1]。主要用于先天或繼發(fā)性的甲型血友病、手術(shù)與創(chuàng)傷后凝血功能障礙以及部分低纖維蛋白原血癥患者的臨床治療當(dāng)中[2]?，F(xiàn)將該院2014年1月—2015年12月間的冷沉淀制備數(shù)據(jù)進(jìn)行具體分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以該站2014年全年進(jìn)行的2062份冷沉淀制備樣本作為對照組，總結(jié)2014年冷沉淀制備經(jīng)驗后制定出一套全程質(zhì)控方案，實施1年后以2015年全年進(jìn)行的2 271份冷沉淀制備樣本作為質(zhì)控組，對比兩組制備的冷沉淀制備成功率。同時隨機(jī)抽取45份符合《獻(xiàn)血者健康檢查要求》的全血樣本[3]，樣本每份300 mL，全部樣本采集過程順暢無污染，采集后以血液保存液Ⅱ行抗凝處理，采集后6 h內(nèi)完成該次研究的全部后續(xù)操作。

1.2 設(shè)備試劑

凝血因子系列檢測使用CA-1 500全自動型凝血儀及專用試劑進(jìn)行檢測，蛋白檢測使用NSA-400全自動型生化儀及專用試劑檢測，低溫融化設(shè)備使用科瑞特Cyto Therm CT-4 T的6℃低溫融化箱；新鮮冷凍血漿使用血漿速凍機(jī)制備，普通冷凍血漿使用低溫冰箱制備。

1.3 質(zhì)控制備方法

確保全程冷鏈系統(tǒng)完備，樣本采集后置于2～6℃冰箱內(nèi)儲存，需運(yùn)輸?shù)氖褂媒禍睾蟮难簩Ｓ帽乩洳叵浔４妗Ｓ? h內(nèi)分離200 mL新鮮血漿，再取2份15 mL樣本，其中1份置入血漿速凍機(jī)內(nèi)速凍至-50℃制備為新鮮冷凍血漿樣本，第2份置于4℃的低溫冰箱之中制備為普通冷凍血漿樣本，全過程中盡量避免或縮短樣本暴露時間。次日將200 mL新鮮冷凍血漿置入1～6℃的Cyto Therm CT-4T低溫融化箱中快速融化，以離心法進(jìn)行血漿平衡離心。融化過程控制在99～120 min，觀察血漿融化至直徑2～3 cm左右、厚度約為1 cm左右冰塊時取出樣本，于4℃離心溫度下以4 000 r/離心15 min，分離取得上清去冷沉淀血漿，取20 mL白色沉淀物即為冷沉淀，迅速置入血漿速凍機(jī)冷凍，同時取15 mL去冷沉淀血漿樣本置入零下20℃冰箱內(nèi)儲存。檢測新鮮冷凍血漿、普通冷凍血漿、去冷沉淀血漿中的凝血因子FV、FⅦ、FⅧ、FⅨ，纖維蛋白原及總蛋白含量，同時檢測冷沉淀當(dāng)中的FⅧ及纖維蛋白數(shù)值。

1.4 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

遵照GB18469-2012《全血及成分血質(zhì)量要求》中冷沉淀凝血因子之相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行，制備的每200 mL冷沉淀中FⅧ水平≥80 IU，纖維蛋白原水平≥150 mg，容量為標(biāo)示量mL的±10%。

1.5 統(tǒng)計方法

使用SPSS 18.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)計算，全部數(shù)據(jù)中計數(shù)資料采取χ2檢驗，用[n（%）]表示，計量資料采取均數(shù)t檢驗，用（±s）表示。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 質(zhì)控方案實施前后對比

實施全程質(zhì)控方案后質(zhì)控組冷沉淀制備合格率為99.91%，實施前的對照組冷沉淀制備合格率為75.02%，質(zhì)控組冷沉淀制備合格率顯著高于對照組，P＜0.01，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義。見表1。

表1 質(zhì)控方案實施前后冷沉淀制備合格率統(tǒng)計對比[n（%）]

表2 3種血漿標(biāo)本各項指標(biāo)統(tǒng)計對比（±s）

表2 3種血漿標(biāo)本各項指標(biāo)統(tǒng)計對比（±s）

注：去冷沉淀血漿分別與其它兩種樣本對比，*為P＜0.05。

普通冷凍血漿去冷沉淀血漿89.7±11.8 86.9±13.9 96.1±12.9 93.2±11.5 (59.6±15.2)* 16.7±5.1 80.3±11.5 76.3±9.8 (2.6±0.7)* 2.0±0.5 (58.6±4.8)* 55.1±5.6

2.2 3種血漿標(biāo)本各項指標(biāo)統(tǒng)計對比

經(jīng)測定新鮮冷凍血漿中FⅧ、FⅨ、纖維蛋白原及總蛋白含量明顯高于去冷沉淀血漿，P<0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；普通冷凍血漿中FⅧ、纖維蛋白原及總蛋白含量均明顯高于去冷沉淀血漿，P<0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。具體數(shù)據(jù)見表2。

2.3 冷沉淀檢測

經(jīng)測定冷沉淀當(dāng)中的FⅧ含量為(394.2±72.8)%，纖維蛋白原含量為(6.8±0.8)g/L。

3 討論

冷沉淀于二十世紀(jì)六十年代時被美國科學(xué)家Pool首先發(fā)現(xiàn)，當(dāng)時主要應(yīng)用于血友病的臨床治療當(dāng)中[5]。近些年來冷沉淀的臨床應(yīng)用已不再局限于纖維蛋白原與凝血因子缺乏導(dǎo)致的出血類疾病、傳統(tǒng)的甲型血友病等，在術(shù)后創(chuàng)傷、腫瘤手術(shù)、多發(fā)外傷、自發(fā)性氣胸、彌散性血管內(nèi)凝血DIC、黏膜與皮膚病、糖尿病足以及深度燒傷等的臨床中也被廣泛應(yīng)用，且應(yīng)用效果理想[6]。冷沉淀是臨床上維持患者生命力不可或缺的一項治療手段[7]。冷沉淀當(dāng)中的FⅧ因子十分不穩(wěn)定，F(xiàn)Ⅷ在體內(nèi)的生物半衰期具有較大變化，通常約為8～12 h，活性極易喪失。新鮮冷凍血漿融化后12 h內(nèi)FⅧ活性可逐漸喪失42%，24 h后則可喪失44%[8]。冷沉淀正被越來越廣泛的應(yīng)用于臨床治療當(dāng)中[9]，因此冷沉淀的制備質(zhì)量也越來越突顯其重要性。冷沉淀的制備過程中須進(jìn)行嚴(yán)格質(zhì)量把控。全血采集后應(yīng)立即置于2～6℃條件下冷藏。新鮮血漿袋的容量應(yīng)控制在<250 mL范圍內(nèi)并統(tǒng)一容量，避免因容量不同使融化時間及速凍效果產(chǎn)生差異。采集后6 h內(nèi)冰凍。低溫融化箱與離心機(jī)均應(yīng)嚴(yán)格控制溫度，應(yīng)于使用前達(dá)到要求溫度。

該次研究中新鮮冷凍血漿中FⅧ（64.3±11.2）%、FⅨ（83.9±9.6）%、纖維蛋白原（2.8±0.9）g/L及總蛋白（59.8±5.7）g/L均明顯高于去冷沉淀血漿，P<0.05，普通冷凍血漿中FⅧ（59.6±15.2）%、纖維蛋白原（2.6± 0.7）g/L及總蛋白（58.6±4.8）g/L均明顯高于去冷沉淀血漿，P<0.05。說明冷沉淀血漿中各項指標(biāo)的含量與新鮮冷凍血漿、普通冷凍血漿差異較大。黎美君等[10]在相關(guān)研究中指出去冷沉淀血漿中FⅧ水平為（16.0± 5.3%、FⅨ水平為（75.5±9.9）%、纖維蛋白原為（2.1±0.3）g/L、總蛋白為（55.4±4.7）g/L，與該次研究結(jié)果去冷沉淀血漿中 FⅧ水平為（16.7±5.1）%、FⅨ水平為（76.3± 9.8）%、纖維蛋白原為（2.0±0.5）g/L、總蛋白為（55.1± 5.6）g/L相符。因此在臨床治療中如需補(bǔ)充FⅧ、FⅨ、纖維蛋白原及總蛋白時使用去冷沉淀血漿則無法達(dá)到治療效果，應(yīng)用將去冷沉淀血漿與普通冰凍血漿區(qū)別標(biāo)識，在臨床應(yīng)用時區(qū)別使用。

綜上所述，在冷沉淀制備過程中可導(dǎo)致制備結(jié)果差異的環(huán)節(jié)很多，應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程及質(zhì)量控制要求。有鑒于去冷沉淀血漿中各項指標(biāo)與新血冷凍血漿的差異較大，應(yīng)將不同血漿區(qū)別標(biāo)識，臨床應(yīng)用時應(yīng)根據(jù)血漿內(nèi)各項指標(biāo)的含量特點(diǎn)區(qū)別應(yīng)用，以提高臨床療效。

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[3]袁小玲,吳杰敏,林桂芳,等.冷沉淀制備技術(shù)改進(jìn)與臨床應(yīng)用情況的研究[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué),2014,32（3）:350-352.

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Quality Control of Preparation Process of Cold Precipitation and its Clinical Application Effect

JIANG Yong-hong
The Center and the Department of Blood Donors in Jilin City of Hunchun，Jilin Province，Hunchun，Jilin Province，133300 China

Objective To investigate the effect of cryoprecipitate preparation and clinical application of the quality control method of the whole.Methods A retrospective analysis of 2 062 cold precipitation for the year 2014 production success rate,and summed up a set of cryoprecipitate quality control scheme.Will be implemented after 2015,the year of 2 271 cold precipitation comparing with 2014 data prior to the preparation and implementation success rate,analysis quality control plan.Take the same blood sample was divided into three parts,respectively,for the preparation of fresh frozen plasma.The common cold and frozen plasma to precipitate plasma;three samples of coagulation factor FV,were measured by the FⅤ,FⅦ,FⅧ,FIX,fibrinogen and total protein values were compared and analyzed.Results The control group of cryoprecipitate preparation qualified rate is 99.91%,the control group cold precipitation preparation qualified rate is 75.02%,the control group,cryoprecipitate preparation qualified rate was significantly higher than the control group,P<0.01;In fresh frozen plasma FⅧ(64.3±11.2)%,FⅨ (83.9±9.6),fibrinogen(2.8±0.9)%g/L,and total protein (59.8±5.7)g/L were significantly higher than last year precipitation cold plasma,P<0.05,normal frozen plasma FⅧ(59.6±15.2)%,FⅨ（80.3±11.5）%fibrinogen（2.6±0.7）g/L and total protein（58.6±4.8）g/L content Were significantly higher than those in plasma cryoprecipitate.The conclusion of the P<0.05.Conclusion of cryoprecipitate preparation process of strict quality control can effectively improve the qualified rate,cryoprecipitate plasma and fresh

Cold sediment；Total quality control；Cold plasma；Plasma

R47

A

2096-1782（2016）11－0022-03

蔣永紅（1971.9-），朝鮮族，女，吉林琿春人，中專，主管護(hù)師，主要從事采血成分制備工作。

2016-08-15）

10.19368/j.cnki.2096-1782.2016.11.022

frozen plasma,ordinary frozen plasma coagulation factor FV,FVII,FⅧ,FIX,protein fiber and total protein numerical differences larger,and therefore to plasma cryoprecipitate in clinical application to fresh frozen plasma.The clinical effect of ordinary frozen plasma,clinical should be chosen according to the specific circumstances.