彌漫性大B細胞淋巴瘤中MYC、Bcl-2陽性表達患者的臨床特征差異

糜公仆　王勁　周旭　余昌云

第三軍醫(yī)大學附屬大坪醫(yī)院血液科,重慶400042

彌漫性大B細胞淋巴瘤中MYC、Bcl-2陽性表達患者的臨床特征差異

糜公仆王勁周旭余昌云

第三軍醫(yī)大學附屬大坪醫(yī)院血液科,重慶400042

目的探討彌漫性大B細胞淋巴瘤中MYC、Bcl-2陽性表達患者的臨床特征差異。方法選擇2012年1月～2016年1月我院收治的61例彌漫性大B細胞淋巴瘤患者為研究對象,采用免疫組化法檢測所有患者的MYC、Bcl-2的陽性表達；觀察患者的性別、年齡、原發(fā)部位、細胞來源、結外受侵情況、淋巴瘤國際預后指數（IPI)、臨床分期、治療效果及生存情況分布等臨床特征；觀察比較MYC/Bcl-2陽性表達與陰性表達患者的臨床特征差異；觀察MYC陽性表達與Bcl-2陽性表達患者的臨床特征差異。結果MYC/Bcl-2陽性表達患者性別、年齡、原發(fā)部位及細胞來源與MYC/Bcl-2陰性表達患者比較,差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05)；而MYC/Bcl-2陽性表達患者結外受侵、IPI評分、臨床分期、治療效果及生存情況與MYC/Bcl-2陰性表達患者比較,差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05)。Bcl-2陽性表達患者性別、年齡、原發(fā)部位、細胞來源、結外受侵情況、IPI評分、臨床分期、治療效果及生存情況與MYC陽性表達患者比較,差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05)。結論Bcl-2或MYC陽性表達與彌漫性大B細胞淋巴瘤患者的病情嚴重程度及療效相關,MYC陽性表達與Bcl-2陽性表達患者的臨床特征無明顯差異。

彌漫性大B細胞淋巴瘤;MYC;Bcl-2;臨床特征

彌漫性大B細胞淋巴瘤（diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)是彌漫性增生的大B細胞惡性腫瘤,瘤細胞核大于或等于正常巨噬細胞核,或超過2倍正常淋巴細胞,包括縱隔（胸腺)大B細胞淋巴瘤、血管內大B細胞淋巴瘤等。非霍奇金淋巴瘤（nonhodgkin lymphoma,NHL)中最為常見的一種類型,其在組織學、免疫表型、病因學、遺傳學、臨床病理特征和預后等方面都表現出高度的異質性[1],不同亞類的彌漫性大B細胞淋巴瘤臨床過程和預后不盡相同彌漫大B細胞淋巴瘤細胞不同的免疫表型可能與腫瘤的生物學行為和預后有密切關系?！半p打擊”B細胞淋巴瘤（double-hit lymphoma,DHL)是一種近年來被確認的B細胞淋巴瘤分子分型,主要涉及MYC和Bcl-2基因的重排[2]。近年來,MYC和Bcl-2蛋白的異常表達與彌漫性大B細胞淋巴瘤發(fā)生、發(fā)展的關系逐漸受到關注,本研究也通過檢測MYC和Bcl-2蛋白的表達水平來了解彌漫大B細胞淋巴瘤患者的臨床特征,從而判斷患者的療效及預后,可能具有重大的臨床意義。同時本研究還通過分析MYC和Bcl-2蛋白陽性表達患者的臨床特征差異,以期評估不同MYC或Bcl-2蛋白表達水平患者的療效及預后。

1　資料與方法

1.1一般資料

回顧性分析2012年1月～2016年1月第三軍醫(yī)大學附屬大坪醫(yī)院收治的61例彌漫性大B細胞淋巴瘤患者的臨床資料,所有患者均為首發(fā)病例,且臨床資料完整,均符合年世界衛(wèi)生組織制訂彌漫性大B細胞淋巴的診斷標準[1]。其中男33例,女28例；年齡45～70歲,平均（62.97±12.42)歲；原發(fā)部位:腹股溝淋巴結23例,胃腸道18例,頸部14例,其他6例；細胞來源:生發(fā)中心內亞型24例,生發(fā)中心外亞型37例；IPI評分0～1分13例,2分17例,3分19例,4～5分12例；臨床分期:Ⅰ～Ⅱ期27例,Ⅲ～Ⅳ期34例；緩解40例,未緩解21例；1年總生存51例,3年總生存41例。所有患者均經知情同意并簽署知情同意書,本研究經我院醫(yī)學倫理會審核批準。

1.2檢測方法

將患者淋巴結組織蠟塊標本經10%中性甲醛溶液固定,常規(guī)脫水,石蠟包埋,4 μm厚切片,常規(guī)脫蠟水化。0.3%過氧化氫（H2O2)阻斷內源性過氧化物酶, 10%小牛血清封閉切片,滴加一抗,4℃過夜。PBS洗后滴加廣譜生物素化二抗（1:200,北京中杉金橋生物科技有限公司),SP復合物（1:200),DBA顯色（DBA試劑盒購于北京中杉金橋生物科技有限公司),蘇木精復染細胞核,脫水,透明,封片。分別設相應陽性、陰性、空白對照。所有病理標本切片用PBS液代替一抗作陰性對照。MYC蛋白主要表達在細胞核和細胞漿, Bcl-2蛋白表達在細胞質,主要表現為棕黃色或棕褐色細小顆粒。400倍高倍鏡下對隨機選取10個視野,每個視野計數100個細胞,計數陽性率,陽性率＞10%為陽性表達。

1.3觀察指標及評價標準

觀察患者MYC、Bcl-2的陽性表達率；觀察患者的性別、年齡、原發(fā)部位、細胞來源、結外受侵情況、淋巴瘤國際預后指數（IPI)評分、臨床分期、治療效果及生存情況分布等臨床特征；觀察比較Bcl-2/MYC陽性及陰性表達患者的臨床特征差異；觀察MYC或Bcl-2陽性表達的臨床特征差異。國際預后指數（IPI)評價標準:年齡≤60歲=0分,＞60歲=1分；行為狀態(tài)0、1為0分,2、3、4為1分；Ann Arbor分期Ⅰ或Ⅱ期為0分,Ⅲ、Ⅳ期為1分；LDH正常為0分,高于正常為1分；結外病變受侵部位數＜2個為0分,≥2個為1分。每一個預后不良因素計數為1分,上述5項指標評分的總和即為IPI。療效緩解評價標準:臨床和影像學腫瘤證據治療前腫瘤相關癥狀完全消失,非霍奇金淋巴瘤引起的異常生化指標恢復正常。

1.4統(tǒng)計學方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計學軟件進行數據分析,計量資料數據用均數±標準差（±s)表示,兩組間比較采用t檢驗；計數資料用率表示,組間比較采用χ2檢驗,以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

表1　Bcl-2/MYC陽性及陰性表達患者的臨床特征差異（例)

2.1Bcl-2/MYC陽性與陰性表達患者的臨床特征差異

Bcl-2/MYC陽性表達患者性別、年齡、原發(fā)部位及細胞來源與Bcl-2/MYC陰性表達患者比較,差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05)；而Bcl-2/MYC陽性表達患者結外受侵情況、IPI評分、臨床分期、治療效果及生存情況比較,差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05)。見表1。

2.2Bcl-2陽性與MYC陽性表達患者的臨床特征差異

Bcl-2陽性表達患者性別、年齡、原發(fā)部位、細胞來源、結外受侵情況、IPI評分、臨床分期、治療效果及生存情況分布相似,差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05)。見表2。

3　討論

彌漫大B細胞淋巴瘤作為常見的侵襲性淋巴瘤,是一種起源于淋巴組織的增殖性疾病,其臨床療效及預后的差異性較大。由于其惡性程度較高,發(fā)病原因及發(fā)病機制不甚明了,且該病常常呈進展性,大多數患者確診時已為晚期。未予治療的患者,1年生存率極低,若給予聯(lián)合利妥昔單抗（美羅華)的方案化療,可獲得較為滿意的臨床緩解率和較長的無病生存率。但彌漫大B細胞淋巴瘤多發(fā)于老年人,本次研究中納入患者的平均年齡為（58.97±12.42)歲,患者療效及耐受性均較差,因此治療前有效評估患者的臨床療效及預后對于臨床治療方案的制訂尤為重要。由于IPI綜合了年齡、侵犯部位、疾病進展程度和腫瘤負荷等多項參數,長期以來被廣泛應用于彌漫大B細胞淋巴瘤患者預后的評估,并一直被用作彌漫大B細胞淋巴瘤判斷預后的指標之一[3]。

研究顯示,IPI每增加1分,死亡風險增加1.055倍[4]。大量研究發(fā)現,遺傳學異常多可累及多條染色體,而彌漫大B細胞淋巴瘤常見的發(fā)生遺傳學改變的基因為MYC、Bcl-2、Bcl-6[5-7]。MYC基因是位于染色體8q24的原癌基因,是一種轉錄因子,具有重要的細胞功能,對細胞生長、增殖、分化、代謝及促進新生血管形成等發(fā)揮重要作用[8]。大量研究表明,c-MYC基因異常與非霍奇金淋巴瘤不良預后相關,c-MYC重排是獨立于IPI的不良預后因子[9-12]。Akkaya等[13]研究發(fā)現,MYC基因異常與彌漫大B細胞淋巴瘤預后密切相關,可作為預測彌漫大B細胞淋巴瘤的預后因素并指導治療。c-MYC基因易位引起的重排較少見,淋巴結和結外彌漫大B細胞淋巴瘤中出現c-MYC重排的發(fā)生率分別為2%和10%,但胃腸道彌漫大B細胞淋巴瘤可高達28%,且治療后完全緩解率較高[14-15]。Bcl-2基因易位是濾泡性淋巴瘤的遺傳學特征,存在于20%～30%的彌漫大B細胞淋巴瘤患者中,提示腫瘤起自濾泡性淋巴瘤高度惡性轉化[16],大量的研究表明Bcl-2蛋白可以作為獨立于臨床分期和免疫類型的彌漫大B細胞淋巴瘤預后因子[17-20]。彌漫大B細胞淋巴瘤可包括中心母細胞型、免疫母細胞型、富于T細胞/組織細胞型、間變細胞型、漿母細胞型及表達ALK全長型,而常見型有以下3種亞型:①中心母細胞型:最為常見的一種,瘤細胞主要為中心母細胞；②免疫母細胞型:是DLBCL中與免疫母細胞相似的、數量占腫瘤細胞的絕大多數的類型；③間變細胞型:腫瘤細胞胞體大、異形多核。DLBCL變異型較少見,其病變部位可出現黏液間質和原纖維樣基質。本次研究中,Bcl-2/MYC陽性表達患者其IPI評分情況總體高于Bcl-2/MYC陰性患者,而緩解率、1年生存率及3生存率均明顯低于Bcl-2/MYC陰性患者,差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05)。

表2　Bcl-2陽性與MYC陽性表達患者的臨床特征差異（例)

國外大量研究顯示,MYC和Bcl-2高表達,提示彌漫大B細胞淋巴瘤患者預后較差[21-22]。而國內張曉娟等[23]研究也發(fā)現,MYC和Bcl-2低表達均可使彌漫大B細胞淋巴瘤患者總生存時間及無進展生存期延長,MYC和Bcl-2的檢測對彌漫性大B細胞淋巴瘤患者的預后具有判斷價值,可作為判斷預后的分子標志物。由此可見,MYC和Bcl-2在彌漫大B細胞淋巴瘤臨床治療效果及預后評估中具有重要的臨床價值。Bcl-2和Bcl-6陽性表達提示近期療效與預后不佳,其水平可被視為獨立的彌漫大B細胞淋巴瘤分析因素,對患者治療過程中病情發(fā)展的預測、個體化治療策略的制訂有重要意義[24]。Green等[25]研究發(fā)現,免疫組化法檢測MYC和Bcl-2共陽性表達患者治療后完全緩解率低,3年生存期及無進展生存期均短于非共陽性表達患者。但MYC與Bcl-2共存于彌漫大B細胞淋巴瘤的概率并不是很高,多數情況下是MYC或Bcl-2異常表達,有研究者回顧性分析了30例彌漫大B細胞淋巴瘤患者的臨床資料,結果顯示MYC、Bcl-2共陽性表達率為30%[26]。目前,關于MYC和Bcl-2的臨床價值差異的相關研究極為少見,因此本研究觀察比較了MYC陽性表達患者與Bcl-2陽性表達患者的臨床特征差異,結果發(fā)現Bcl-2陽性表達患者性別、年齡、原發(fā)部位、細胞來源、結外受侵情況、IPI評分、臨床分期、治療效果及生存情況分布相似（P＞0.05),尚未發(fā)現MYC與Bcl-2異常表達對彌漫大B細胞淋巴瘤在療效及預后評估方面的價值差異,但本次研究納入的樣本量較少,希望在以后的研究中擴大樣本量,以進一步證實。

綜上所述,Bcl-2或MYC陽性表達與彌漫性大B細胞淋巴瘤患者的病情嚴重程度及療效相關,且MYC陽性表達與Bcl-2陽性表達患者的臨床特征無明顯差異,提示MYC與Bcl-2在彌漫性大B細胞淋巴瘤中存在相似的臨床評估價值。

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Difference of clinical features of diffuse large B cell lymphoma patients with positive expression of MYC and Bcl-2

MI GongpuWANG JinZHOU XuYU Changyun
Department of Hematology,Affiliated Ohtsubo Hospital of the Third Military Medical University,Chongqing400042, China

Objective To explore the diffuse large B cell lymphoma MYC,Bcl-2 positive expression in patients with clinical features.Methods From January 2012 to January 2016,61 patients with diffuse large B cell lymphoma in Affiliated Ohtsubo Hospital of the Third Military Medical University were selected as the research objects,the positive expression of Bcl-2 and MYC was detected by immunohistochemical method;clinical features of patients,such as gender,age,primary site,cell source,outside infringement of lymph nodes,international prognostic index（IPI),clinical staging,therapeutic effect and survival condition distribution were observed;clinical features of patients such as gender, age,primary site,cell source,outside the junction invaded,IPI,clinical stages,therapeutic effect and survival condition distribution were observed;differences of clinical features of patients between positive expression and negative expression of MYC/Bcl-2 was observed and compared;differences of clinical features between patients with positive expression of MYC and Bcl-2 were observed.Results Gender,age,primary site and cells sources in patients with positive expression and negative expression of MYC/Bcl-2 had no statistically significant differences（P＞0.05);and the outside infringement of lymph nodes,IPI score,clinical stags,therapeutic effect and survival situation of patients with positive expression of MYC/Bcl-2 had statistically significant differences（P＜0.05).Gender,age,primary site,outside infringement of lymph nodes,IPI score,clinical stags,therapeutic effect and survival condition of patients with positive expression of MYC and Bcl-2 had no statistically significant differences（P＞0.05).Conclusion The positive expression of MYC and Bcl-2 is associated with the severity and curative effect of patients with diffuse large B cell lymphoma,there is no difference in the clinical features of patients with positive expression of MYC and Bcl-2.

Diffuse large B cell lymphoma;MYC;Bcl-2;Clinical features

R733.4

A

1673-7210(2016)06(b)-0025-04

（2016-03-08本文編輯:任念)