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    郟縣紅牛同期發(fā)情與超數(shù)排卵研究

    2016-12-02 01:21:46何俊丹
    河南畜牧獸醫(yī) 2016年19期
    關(guān)鍵詞:郟縣紅牛供體

    何俊丹

    (鄭州市動物衛(wèi)生監(jiān)督所,河南 鄭州 450002)

    郟縣紅牛同期發(fā)情與超數(shù)排卵研究

    何俊丹

    (鄭州市動物衛(wèi)生監(jiān)督所,河南 鄭州 450002)

    為探索有效、穩(wěn)定的郟縣紅牛同期發(fā)情和超數(shù)排卵程序,分別采用肌肉注射PG法、CIDR+ PG法對郟縣紅牛進行同期發(fā)情處理,應(yīng)用FSH連續(xù)4d遞減法肌肉注射對郟縣紅牛進行超數(shù)排卵處理。PG法和CIDR+PG法分別處理供體牛10頭次,同期發(fā)情率分別為40%和100%,差異顯著(P<0.05);FSH法共有效超排供體牛10頭次,頭均黃體總數(shù)(7.90±4.72)個,頭均獲胚數(shù)(2.80±2.44)枚,其中3頭次采用加拿大進口FSH,7頭次采用國產(chǎn)FSH,頭均黃體總數(shù)分別為(14.00±1.00)個、(5.29±2.56)個,差異顯著(P<0.05),頭均獲胚數(shù)分別為(2.33±2.08)枚、(3.00±2.71)枚,差異不顯著(P>0.05)。結(jié)果:PG法處理郟縣紅牛供體牛的同情發(fā)情效果不如CIDR+PG法效果明顯;對郟縣紅牛進行超排處理中,使用進口FSH所得黃體總數(shù)明顯多于國產(chǎn)FSH,但二者的頭均獲胚數(shù)并沒有顯著差異。以上結(jié)果表明,CIDR+PG法處理比PG法處理郟縣紅牛供體牛的同期發(fā)情效果顯著;對郟縣紅牛應(yīng)用FSH連續(xù)4d遞減法肌肉注射進行超排是可行的。

    同期發(fā)情;超數(shù)排卵;黃體;胚胎;郟縣紅牛

    郟縣紅牛是中國八大地方優(yōu)良黃牛品種之一,隨著國外專門化的奶牛、肉牛品種的引進以及農(nóng)業(yè)機械化程度的不斷提高,郟縣紅牛的數(shù)量逐年減少。因為郟縣紅牛生長速度緩慢,后軀發(fā)育不完善,屠宰率相對較低,乳用和肉用價值無法與引進的國外專門化的品種相抗衡,然而它耐粗飼,抗病性、適應(yīng)性強,繁殖率高,以及郟縣紅牛肉質(zhì)細嫩、香味濃郁更是國外肉牛品種所不能比擬的。郟縣紅牛倍受國內(nèi)外稱贊的肉質(zhì)逐漸被重視,同時也是我國培育肉牛新品種的核心地方品種。

    建立牛胚胎基因庫是目前牛保種最經(jīng)濟、最有效的方法之一。同期發(fā)情、超數(shù)排卵技術(shù)是建立胚胎基因庫的關(guān)鍵技術(shù),該技術(shù)已經(jīng)在奶牛、水牛上得以廣泛的應(yīng)用與推廣,應(yīng)用于肉牛的報道也屢見不鮮,不少地方品種如南陽牛、秦川牛、晉南牛的同期發(fā)情與超數(shù)排卵也有報道。該研究擬探索有效、穩(wěn)定的郟縣紅牛同期發(fā)情與超排程序,以利于郟縣紅牛胚胎基因庫的建設(shè),同時也為其他地方品種黃牛的同期發(fā)情與超數(shù)排卵工作提供借鑒和依據(jù)[1-2]。

    1 材料與方法

    1.1試驗材料

    1.1.1試驗動物

    純種郟縣紅牛供體母牛10頭,均為19~27月齡青年牛,健康,性周期正常,無生殖器官疾病。試驗期間,所有參試牛均舍飼,以青粗飼料配合精料飼喂,膘情適中。

    郟縣紅牛特級公牛細管凍精(7頭),采自平頂山市郟縣紅牛繁育中心。

    1.1.2主要儀器、設(shè)備

    牛非手術(shù)采胚器械、胚胎冷凍儀、實體顯微鏡。

    1.1.3主要試劑、藥品

    氯前列烯醇(PG)0.2mg/支,垂體促卵泡素(FSH)400mg/支,垂體促卵泡素(FSH)10mg/支,促排3號20μg/支,孕激素陰道栓(CIDR),牛血清白蛋白(BSA),胎牛血清(FCS),沖胚液(含1%胎牛血清FCS的PBS液,國產(chǎn)藥品自配配方見表1),撿胚液(含10%胎牛血清FCS的PBS液)。

    表1 PBS(磷酸鹽緩沖溶液)成分表[3]

    1.2試驗方法

    1.2.1試驗牛同期發(fā)情處理

    1.2.1.1肌肉注射PG法在發(fā)情周期的任一天肌注PG 0.4mg/頭,記為1d,之后觀察發(fā)情,準確記錄發(fā)情時間并統(tǒng)計發(fā)情率。

    1.2.1.2CIDR+PG法在發(fā)情周期的任一天放置CIDR栓,記為第1天,第12天下午撤栓,撤栓的同時肌肉注射PG0.4mg/頭,之后觀察發(fā)情,準確記錄發(fā)情時間并統(tǒng)計發(fā)情率。

    1.2.2試驗牛的超排處理

    1.2.2.1在發(fā)情周期的任一天放置CIDR栓,記為第1天,第10天開始遞減劑量肌注FSH,每日2次,間隔時間12h,連續(xù)4d。第5次注射FSH的同時,再肌注氯前列烯醇(PG)0.4mg/頭(見表2),第12天下午撤栓。發(fā)情后輸精3次,第1次與第2次之間間隔8h,第2次與第3次之間間隔16h,每次輸2支細管凍精[4]。

    表2 超排處理程序

    1.2.2.2對郟縣紅牛10頭供體母牛中的7頭從第10天開始連續(xù)4d遞減劑量肌肉注射國產(chǎn)FSH(中科院動物所產(chǎn),規(guī)格10mg/支),其余3頭郟縣紅牛供體母牛則注射進口FSH(加拿大產(chǎn),規(guī)格400mg/支)。

    1.2.3沖胚及撿胚

    輸精后6~7d進行沖胚。沖胚前直腸檢查供體牛的超排反應(yīng)情況,同時記錄左、右側(cè)黃體數(shù)和黃體總數(shù)。使用三通式采胚管進行非手術(shù)法沖卵,每側(cè)子宮角各用500ml沖卵液沖洗7~8次,子宮回流液靜置后實體顯微鏡下?lián)炻?。統(tǒng)計左右側(cè)黃體數(shù)、黃體總數(shù)和獲胚數(shù),應(yīng)用SAS8.0軟件分析處理試驗數(shù)據(jù)。

    2 結(jié)果

    2.1同期發(fā)情處理方法對同期發(fā)情效果的影響(表3)

    表3 不同同期發(fā)情處理方法對郟縣紅牛同期發(fā)情效果的影響

    2.2郟縣紅??傮w超排效果比較(表4)

    表4 郟縣紅??傮w超排效果比較

    2.3國產(chǎn)(中科院動物所)與進口(加拿大)FSH對超排效果的影響(表5)

    表5 國產(chǎn)與進口FSH對供體超排效果的比較

    3 討論與結(jié)論

    3.1不同同期發(fā)情處理方法對郟縣紅牛供體母牛同期發(fā)情效果的影響

    氯前列烯醇是前列腺素(PG)類似物的一種,具有溶解黃體的作用,但它只對母牛發(fā)情周期5~18d的黃體有溶解作用,而對發(fā)情前后3~5d則無溶解功能。因此,PG法處理后總有部分母牛無反應(yīng)。何光中等[5]以關(guān)嶺黃牛為研究對象采用PG法處理同期發(fā)情率為60.0%。趙維[6]等用PG誘導(dǎo)紅安格斯肉牛的同情發(fā)情試驗中,同期發(fā)情率為75.0%。和占星[7]等在對水牛同期發(fā)情的研究中PG法處理供體牛的同期發(fā)情率為43.33%。有關(guān)專家等對青海大通牦牛同期發(fā)情應(yīng)用PG法處理的發(fā)情率為41.2%。該研究結(jié)果顯示,PG法處理郟縣紅牛同期發(fā)情率為40.0%,這與所選牛群的狀態(tài)及牛群規(guī)模有一定的關(guān)系。

    孕酮陰道栓(CIDR)在體內(nèi)持續(xù)分泌孕酮,維持血液中孕酮的高水平,抑制卵泡的生長。當(dāng)同時撤栓后,卵泡生長的抑制因素被解除,為卵泡的生長提供了一個共同的起點,從而達到同期發(fā)情的目的,但是,有些個體在撤栓時黃體還未退化,這樣在撤栓后黃體繼續(xù)分泌孕酮,達不到發(fā)情同期化的效果。針對這種情況,在撤栓后肌注PG,從而達到溶解黃體的目的,在一定程度上提高了同期發(fā)情的效果。據(jù)趙永聚[8]等在山羊上做的同期發(fā)情試驗結(jié)果顯示,用CIDR法處理,撤栓后直接觀察發(fā)情,同期發(fā)情率為37.5%,而CIDR撤栓后再肌注PG,同期發(fā)情率為93.75%,顯著高于第一種方法。很多試驗證明,CIDR結(jié)合PG,可獲得理想的同期發(fā)情效果。有關(guān)專家用CIDR+PG法處理荷斯坦牛,撤栓后同期發(fā)情率達95%以上。韋英明[9]等用該方法處理水牛也獲得了相似的結(jié)果。該研究撤栓后再肌注PG,同期發(fā)情率為100%。

    應(yīng)用PG法和CIDR+PG法對郟縣紅牛進行同期發(fā)情處理,同期發(fā)情率分別為40%和100%,兩者差異顯著(P<0.05)。該研究CIDR+PG處理法的同期發(fā)情率顯著高于PG法,同期發(fā)情效果明顯且理想。

    3.2郟縣紅牛超數(shù)排卵研究

    該研究共有效超排郟縣紅牛供體牛10頭次,獲得頭均黃體總數(shù)7.90個,頭均獲胚數(shù)2.80枚。說明該研究所采用的超排方法處理郟縣紅牛是可行的。前人研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),晉南牛頭均可用胚數(shù)3.94枚[10-11]、溫嶺高峰黃牛3.04枚、青海黃牛4.00枚、秦川牛4.20枚[12]、南陽牛4.28枚[13]。該研究2.80枚的頭均獲胚數(shù)與研究結(jié)果相比有一定的差距,原因可能是多方面的。其一,可能與該研究所用牛的地方品種有關(guān),郟縣紅牛的超排效果可能不如奶牛、水牛及其他地方黃牛品種;其二,該次超排的供體牛全部為青年牛,個體較小,沖卵困難,有部分供體操作受阻或回收液無法撿胚,這些情況可能直接影響沖卵效果,因此筆者質(zhì)疑郟縣紅牛是繼續(xù)像其他地方品種黃牛那樣選用青年牛進行超排,還是選用體格相對較大的經(jīng)產(chǎn)郟縣紅牛進行超排;其三,該研究在平頂山市郟縣紅牛繁育中心進行,該中心成立于2007年,由于建成時間短,供體牛多是從散養(yǎng)戶購進,背景復(fù)雜,而且繁育中心的飼養(yǎng)管理制度尚未規(guī)范化,導(dǎo)致供體牛的營養(yǎng)狀況不好,可能直接影響超排效果;最后,郟縣紅牛的超數(shù)排卵在此之前無人做過,該研究沒有現(xiàn)成的方案可供參考,所有程序都是在參考奶牛、水牛及其他地方品種黃牛超排程序的基礎(chǔ)上所做的探索性試驗研究,因此,很多地方都有待商榷和進一步提高。另外,操作人員對沖卵技術(shù)的熟練程度也直接影響超排結(jié)果。

    3.3國產(chǎn)(中科院動物所)與進口(加拿大)FSH對超排效果的影響

    現(xiàn)階段國內(nèi)牛超排常用的FSH有進口和國產(chǎn)兩大類。進口FSH價格高,但效果和穩(wěn)定性高于國產(chǎn)產(chǎn)品。國產(chǎn)FSH價格低,從成本方面考慮有一定的優(yōu)勢。本試驗研究同時選用加拿大進口和國內(nèi)中科院動物所生產(chǎn)的FSH進行超排,結(jié)果表明在對郟縣紅牛超排處理后,進口FSH獲得的頭均黃體總數(shù)14.00個與國產(chǎn)FSH5.29個差異顯著(P<0.05),而進口FSH的頭均獲胚總數(shù)2.33枚與國產(chǎn)FSH的3.00枚差異不顯著(P>0.05)。提示進口FSH的超排效果明顯高于國產(chǎn),但在供體牛狀態(tài)不理想,沖卵技術(shù)不熟練等條件下,考慮到成本因素,可以選用國產(chǎn)藥進行超數(shù)排卵。

    3.4結(jié)論

    該研究以郟縣紅牛為研究對象,對其進行同期發(fā)情和超數(shù)排卵研究,所得同期發(fā)情率為70%;超數(shù)排卵頭均黃體數(shù)(7.90±4.72)個,頭均獲胚數(shù)(2.80±2.44)枚。本研究試圖應(yīng)用同期發(fā)情和超數(shù)排卵技術(shù)建立胚胎基因庫保存郟縣紅牛優(yōu)秀遺傳基因,研究發(fā)現(xiàn),CIDR+PG法處理比PG法處理供體牛的同期發(fā)情效果顯著;對郟縣紅牛應(yīng)用FSH連續(xù)4d遞減法肌肉注射進行超排是可行的。同時,地方品種的同期發(fā)情與超數(shù)排卵技術(shù)是一項復(fù)雜的工作,其有效、穩(wěn)定的同期發(fā)情與超數(shù)排卵的方法和程序還有待于進一步探索。

    [1]張花菊,毛朝陽,馬桂變.郟縣紅牛品種資源保護進展[J].黃牛雜志,2005,31(3):71-73.

    [2]李洪昭,崔保安,楊金泉,等.肉牛產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)配套技術(shù)[M].河南科學(xué)技術(shù)出版社,1999.

    [3]王新莊,王居強,張德芳,等.家畜胚胎移植技術(shù)[M].河南科學(xué)技術(shù)出版社,2004.

    [4]王新莊,竇忠英.牛超排技術(shù)的研究[J].黃牛雜志,1996,(4):20-22.

    [5]何光中.提高飼養(yǎng)水平對黃牛同期發(fā)情效果的影響研究[J].貴州畜牧獸醫(yī),2002,(6).

    [6]趙維.氯前列烯醇誘導(dǎo)紅安格斯肉牛同期發(fā)情效果實驗[J].黑龍江動物繁殖,2005,(3):31-32.

    [7]和占星,羅在仁,和協(xié)超,等.水牛同期發(fā)情、超數(shù)排卵和胚胎移植初探[C].中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2004年學(xué)術(shù)年會暨第五屆全國畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會論文集(上冊),2004:534-539.

    [8]趙永聚.不同陰道栓處理山羊同期發(fā)情效果的研究[J].甘肅畜牧獸醫(yī),2002,(6):4-7.

    [9]韋英明,蔣如明.不同同期發(fā)情方法對水牛發(fā)情和受胎率的影響[J].中國畜牧雜志,2009,(1):35-36.

    [10]楊煒峰.胚胎移植技術(shù)的現(xiàn)狀與展望[J].乳業(yè)科學(xué)與技術(shù),2002,(1):29-33.

    [11]明世清.建立晉南牛性別化胚胎庫的嘗試[J].黃牛雜志,2003,(5):17-19.

    [12]李金輝,王新莊,梁家奎,等.秦川牛超數(shù)排卵效果的研究[J].中國畜牧獸醫(yī),2007,34(2):132-138.

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    S823

    B

    1004-5090(2016)10-0005-03

    (2016-09-16)

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