抗生素類藥物殘留檢測前處理及分析方法研究進(jìn)展

王 艷，李艷萍，剡根嬌

（銀川能源學(xué)院 石油化工學(xué)院， 銀川 750105 ）

抗生素類藥物殘留檢測前處理及分析方法研究進(jìn)展

王 艷，李艷萍，剡根嬌

（銀川能源學(xué)院 石油化工學(xué)院， 銀川 750105 ）

抗生素類藥物在臨床及獸藥領(lǐng)域等均得到廣泛應(yīng)用，但抗生素殘留危害人體健康。本文闡述了目前抗生素樣品的前處理和檢測方法。

抗生素；前處理；檢測方法

0 引言

抗生素可治療大多數(shù)由于各種細(xì)菌感染導(dǎo)致的疾病，因此在人類、牲畜、作物等病害的預(yù)防和治療中廣泛應(yīng)用。然而濫用或過度使用抗生素會導(dǎo)致人類和動植物對其產(chǎn)生耐藥性［1］，這些動物體內(nèi)殘存的抗生素會以原藥的形式隨動物排泄物排出體外，進(jìn)入地表水以及人們的生活用水中進(jìn)一步污染環(huán)境，嚴(yán)重危害生態(tài)環(huán)境和人類健康。歐盟食品藥品監(jiān)督管理局已制定關(guān)于獸藥抗生素的銷售標(biāo)準(zhǔn)［2］。我國從1989年開始對抗生素的使用進(jìn)行管制，以此來限制抗生素的濫用。目前，抗生素類藥物殘留的前處理和分析方法取得了較大進(jìn)展，本文擬對近幾年內(nèi)抗生素殘留的前處理技術(shù)及檢測方法進(jìn)行綜述，旨在為抗生素殘留監(jiān)控及環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。

1 樣品中抗生素前處理技術(shù)

環(huán)境樣品中的抗生素具有濃度低，成分復(fù)雜等特點(diǎn)，通常采用有效的預(yù)處理如提取、凈化、濃縮等步驟才能進(jìn)行準(zhǔn)確的分析測定。目前，常規(guī)的純化技術(shù)主要有固相萃取、基質(zhì)固相分散萃取技術(shù)、微波輔助萃取技術(shù)等。

1.1 固相萃?。⊿PE）

固相萃取主要通過固體吸附劑將樣品中的目標(biāo)物吸附，實(shí)現(xiàn)對樣品的分離，純化和富集。常見的固相萃取填料有硅膠、氧化鋁和 C18等。石奧等［3］利用固相萃取方法對畜禽飲用水中23種抗生素和3種β-受體激動劑進(jìn)行檢測，結(jié)果表明選用HLB柱時(shí)大部分待測物回收率較好。錢卓真等［4］測定了水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境沉積物中多肽類抗生素的殘留，比較Oasis HLB固相萃取柱和 SAX 強(qiáng)陽離子交換柱對目標(biāo)物凈化效果和回收率的影響。結(jié)果表明，Oasis HLB固相萃取柱凈化效果好。該法操作簡便，快速，減少不必要的工序，凈化效果比液液萃取提高很多，且便于自動化，但是使用進(jìn)口固相萃取小柱的成本較高，而且需要專業(yè)人員協(xié)助方法開發(fā)。

1.2 基質(zhì)固相分散萃?。∕SPD）

MSPD萃取是將樣品與填料一起研磨之后，使樣品均勻分散于固定吸附劑表面，制成半固態(tài)的混合物后裝柱，然后選擇合適的淋洗劑，將待測物系脫下來。羅輝泰等［5］采用基質(zhì)固相分散-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測定飼料中87種獸藥殘留，樣品經(jīng)甲醇-乙腈提取，提取液用Bondesil-PSA吸附劑以分散固相萃取方式快速凈化，得出87種藥物的平均回收率為63.7%～108.8%， RSD為3.5%～15.2%。Li等［6］用基質(zhì)固相分散-毛細(xì)管電泳法提取并分離了血液樣品中的4種氟喹諾酮類抗生素，在優(yōu)化條件下，目標(biāo)物均能較好地分離，回收率大于80%。MSPD萃取法不需要進(jìn)行勻漿、沉淀、離心和樣品轉(zhuǎn)移等步驟，避免了樣品的損失。其缺點(diǎn)是富集能力差，檢測靈敏度較低；有些雜質(zhì)不能很好的去除，具有局限性。

1.3 微波輔助萃取（MAE）

微波輔助萃取是利用微波進(jìn)行萃取的方法，其工作原理是根據(jù)不同物質(zhì)吸收微波能力的不同，因而使目標(biāo)物和基體分離開來，以達(dá)到萃取效率和產(chǎn)品純度。司曉喜等［7］利用微波萃取結(jié)合氣相色譜－飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)在負(fù)化學(xué)電離源和電子轟擊電離（源兩種模式下測定煙草中24種農(nóng)藥殘留，加標(biāo)回收率分別為75. 2%～94. 8%和 75. 0%～95. 1%，可以減少有機(jī)試劑的使用量并節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間。Fernadez-Torres等［8］用酶促M(fèi)AE和 HPLC-MS 法檢測魚和貽貝樣品中的獸藥抗生素，試驗(yàn)結(jié)果表明該方法線性好，準(zhǔn)確度高，檢測限等都令人滿意。微波輔助萃取技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)在于選擇型好，試劑用量少和用時(shí)短，與傳統(tǒng)的溶劑提取法相比，可節(jié)省50%～90%的時(shí)間。此外，MAE萃取的結(jié)果不受物質(zhì)含水量的影響，回收率較高。

2 抗生素殘留的檢測方法

2.1 紫外分光光度法（UV）

紫外分光光度法是根據(jù)被測物質(zhì)在特定波長范圍內(nèi)電磁波的吸收特性，利用物質(zhì)的吸光度與濃度成正比，進(jìn)行定性定量的分析方法。馮學(xué)忠等［9］建立了紫外分光光度法測定注射液中泰樂菌素的含量，結(jié)果在290 nm處具有最大吸收波長，平均回收率達(dá)到99.7%。此種方法技術(shù)簡單，且準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性都比較好，它被廣泛應(yīng)用于企業(yè)產(chǎn)品的質(zhì)量控制仲裁方法中。但是他有自己的缺陷，靈敏度低，容易受其他雜質(zhì)影響，從而有一定的限制性。

2.2 薄層色譜法（TLC）

薄層色譜法是一種經(jīng)典的檢測方法，具有操作簡單、分析迅速、檢驗(yàn)成本低等特點(diǎn)，對于沒有紫外吸收的物質(zhì)檢測尤其適用。利用不同的顯色劑和檢測方式既適用于微量樣品的分析，也可用于大量樣品的制備。唐克慧等［10］建立了TCL法檢測注射液中的克拉霉素，采用乙酸乙酯為萃取劑對克拉霉素注射液多次萃取，試驗(yàn)不僅證明了該萃取方法的可行，同時(shí)較好的解決了輔料對注射液中克拉霉素干擾情況下檢測的難題。但TCL也有明顯的缺點(diǎn)：分離能力較差，檢測靈敏度較低，相對于復(fù)雜的樣品，薄層色譜法對化合物指認(rèn)能力不足，不易進(jìn)行定量分析。

2.3 高效液相色譜法（HPLC）

高效液相色譜法（HPLC）由于具有高效分離、高靈敏度和分離速度快等特點(diǎn)，因此被廣泛用于大多數(shù)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的分離檢測。多數(shù)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素在紫外下都有較強(qiáng)的吸收，因此常用紫外檢測器。García-Mayor等［11］建立了一種快速、簡單和靈敏的液相色譜-二極管陣列檢測法，對羊奶中7種大環(huán)內(nèi)酯類藥物同時(shí)檢測，樣品預(yù)處理為脫蛋白、用濃氫氧化鈉溶液皂化脫脂，最后使用乙酸乙酯作為提取劑，在優(yōu)化的檢測條件下，7種待測物能夠得到很好的分離。但由于某些大環(huán)內(nèi)酯類抗生素分子中缺乏特征紫外吸收，使紫外檢測器的應(yīng)用具有局限性。

2.4 液質(zhì)聯(lián)用法（LC-MS）

色譜質(zhì)譜的聯(lián)用技術(shù)將液相色譜儀有效分離的能力和質(zhì)譜的定性功能結(jié)合起來。尹燕敏等［12］建立了同時(shí)測定水和沉積物中磺胺類、喹諾酮類和氯霉素類抗生素殘留的液質(zhì)聯(lián)用確證方法。邱盼子等［13］采用Agilent C18色譜柱，以正離子檢測方式進(jìn)行質(zhì)譜分析，6種氨基糖苷類抗生素的保留時(shí)間基本相同，但由于質(zhì)譜檢測器的質(zhì)量鑒別能力非常強(qiáng)大，因此對于非同分異構(gòu)的化合物，即使沒有達(dá)到很好的色譜分離，仍然可以通過不同的質(zhì)荷比進(jìn)行質(zhì)譜分離，從而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)化合物的專屬測定。質(zhì)譜可作為HPLC的通用型檢測器具有高靈敏度，分離能力強(qiáng)和特異性好的特點(diǎn)，是目前比較理想的檢測手段，但LC-MS檢測成本昂貴且對操作要求極高，因此還處于發(fā)展階段，達(dá)不到廣泛應(yīng)用。

3 研究展望

抗生素的檢測難題在于環(huán)境基質(zhì)的復(fù)雜性和檢測方法的靈敏性。近幾年研究熱點(diǎn)主要集中在樣品提取和凈化步驟的改進(jìn)。其中固相萃取材料的多樣化為樣品的準(zhǔn)確前處理提供了可能性，尤其是磁性固相萃取材料的研發(fā)和應(yīng)用將是未來的發(fā)展趨勢。質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展解決了痕量物質(zhì)的檢測。因此如何有效地降低干擾物質(zhì)對目標(biāo)物檢測影響是今后必須關(guān)注和解決的問題。

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10.16640/j.cnki.37-1222/t.2016.20.256

“十三五”寧夏回族自治區(qū)優(yōu)勢特色學(xué)科（化學(xué)工藝）建設(shè)；銀川能源學(xué)院科研項(xiàng)目（2014-KY-Y-07）

王艷（1987-），女，研究生，助教，主要從事：廢物處理與資源化。