中藥調(diào)節(jié)細(xì)胞色素P450酶活性的方法學(xué)研究概述

周盛會 湯浩

摘要：本文通過檢索PubMed（美國國家醫(yī)學(xué)圖書館信息檢索系統(tǒng)）、中國知識資源總庫（CNKI）、中國生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫（CBM）及中國學(xué)術(shù)期刊數(shù)據(jù)庫（萬方數(shù)據(jù)）等中外文數(shù)據(jù)庫十幾年來有關(guān)中藥調(diào)節(jié)藥物代謝細(xì)胞色素P450酶（CYP450）的期刊文獻(xiàn)，主要從CYP450體內(nèi)體外研究方法方面進(jìn)行歸納、整理和分析，為今后中藥調(diào)節(jié)CYP450酶研究提供參考。

關(guān)鍵詞：細(xì)胞色素P450；檢測方法；中藥；綜述

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.11.035

中圖分類號：R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1005-5304（2016）11-0131-06

Abstract： Through searching literature about cytochrome P450 from PubMed， CNKI， CBM and Wanfang database in the recent 10 years， this article concluded， summarized and analyzed vivo and vitro research methods of cytochrome P450 to provide references for the study on TCM cytochrome P450 enzyme.

Key words： cytochrome P450； methodology； TCM； review

隨著臨床應(yīng)用和研究的不斷深入，中藥有關(guān)的不良反應(yīng)逐漸受到重視。有臨床證據(jù)顯示，中藥與西藥合用后可能發(fā)生藥物之間的相互作用，包括不良反應(yīng)，如銀杏與華法令合用后有加重出血的傾向[1]、貫葉連翹與茚地那韋合用降低療效[2]等。中藥與臨床藥物聯(lián)合使用時，因藥物代謝而產(chǎn)生的相互作用發(fā)生率最高，與藥物體內(nèi)代謝關(guān)系最大的酶是細(xì)胞色素P450（CYP450）。該酶系可被多種藥物誘導(dǎo)或抑制，且有顯著個體差異。因此，鑒定更多由CYP450催化代謝的藥物，研究其基因表達(dá)與調(diào)控的分子機(jī)制，闡明酶個體差異和種族差異的機(jī)理，能夠為臨床合理用藥提供實驗依據(jù)，做到用藥劑量個體化，提高療效，減少不良反應(yīng)。茲從中藥成分的CYP450研究方法方面綜述近年來國內(nèi)外所報道的研究成果，為中藥有效成分對CYP450同工酶活性影響研究提供參考。

1 細(xì)胞色素P450概述

CYP450又稱肝藥酶，在哺乳動物中，主要分布于肝臟，在肺、皮膚、腸道也有少量表達(dá)。CYP450因其蛋白質(zhì)種類的多樣性及其底物的重疊性，使CYP450酶系可以催化多種類型的反應(yīng)，不僅對許多外來物質(zhì)如農(nóng)藥及其他環(huán)境有毒物質(zhì)具有代謝作用，還參與一些具有重要生理功能的內(nèi)源性物質(zhì)如激素、脂肪酸等的代謝，在生物體中起十分重要的作用。

與臨床藥物代謝密切相關(guān)，常檢測的CYP450酶亞型有CYP1A2、2A6、2C、2D6、2E1和3A4，分別約占總P450酶代謝藥物的比例為4%、2%、12%、20%、2%和55%，占肝臟總CYP450含量的比例分別為13%、4%、20%、4%、7%和30%。

2 細(xì)胞色素P450的研究方法

2.1 體內(nèi)研究

近年來，隨著現(xiàn)代色譜技術(shù)如高效液相色譜法（HPLC）、液相-質(zhì)譜聯(lián)用法（LC-MS/MS）及超高效液相色譜法（UPLC）的迅猛發(fā)展，“雞尾酒”（Cocktail）探針?biāo)幬锓ㄒ讶〈藗鹘y(tǒng)探針?biāo)幬锓ㄓ糜贑YP450酶活性的測定?！癈ocktail”探針?biāo)幬锓ㄍㄟ^同時使用2種及以上特定探針底物而描述藥代動力學(xué)特征性變化的實驗，以研究藥物對CYP450酶亞型活性的誘導(dǎo)或抑制作用，該法可同時檢測多種藥物代謝酶的活性，將個體差異的影響降至最低，還可在單個實驗過程獲得多個代謝途徑的信息，能真實客觀反映藥物在體內(nèi)的代謝特征，但不足之處在于CYP450同工酶具有底物交叉性?！癈ocktail”探針?biāo)幬锓ńY(jié)合了現(xiàn)代色譜技術(shù)，大大提高了多組分復(fù)雜樣本中物質(zhì)檢出的有效性、準(zhǔn)確性及檢測速率，已成為研究CYP450最主要、最常用的體內(nèi)方法。

2.1.1 動物體內(nèi)研究 目前主要采用Wistar和SD兩種品系大鼠進(jìn)行CYP450酶活性的研究。王氏等[3]建立SD大鼠血漿中非那西丁與其代謝物對乙酰氨基酚含量的HPLC測定而確證甘草水提液對CYP1A2有明顯誘導(dǎo)作用；Xiao等[4]分別用雙氯芬酸、咪達(dá)唑侖、右美沙芬、氯唑沙宗和奧美拉唑作為探針?biāo)幬?，結(jié)合LC-MS研究胡黃連苷對CYP2C9、3A4、2D6、2E1和2C19的影響；Hu等[5]用“Cocktail”探針?biāo)幬锓ńY(jié)合HPLC測定黃芩對4種主要CYP450酶活性的影響，顯示黃芩對CYP1A2存在抑制作用，降低其活性，可能會導(dǎo)致經(jīng)此酶代謝的其他藥物代謝減慢，血藥濃度升高，作用時間延長。由于種屬差異的廣泛存在，直接將動物體內(nèi)實驗數(shù)據(jù)外推至人體內(nèi)藥物相互作用有時并不準(zhǔn)確，因此，動物體內(nèi)實驗只可用于初步預(yù)測藥物間相互作用。

2.1.2 人體內(nèi)研究 由于CYP450酶的多態(tài)性，藥物作用廣泛存在種屬和個體差異，所以，在動物體內(nèi)研究基礎(chǔ)上，應(yīng)在人體內(nèi)進(jìn)行藥物對CYP450活性的研究。肖氏等[6]采用“Cocktail”探針?biāo)幬锓ńY(jié)合LC-MS/MS，以咪達(dá)唑侖作為探針底物，測定金雀異黃酮在人體內(nèi)對CYP3A活性的影響，結(jié)果金雀異黃酮對體內(nèi)CYP3A酶活性具有顯著誘導(dǎo)作用，并建議臨床使用時應(yīng)注意經(jīng)CYP3A代謝的藥物與金雀異黃酮合用時可能發(fā)生的潛在相互作用。Stewart等[7]采用UPLC-MS/MS與“Cocktail”法聯(lián)用測定人血漿和尿中6種CYP450的探針?biāo)幬锖痛x產(chǎn)物濃度，用于評估CYP450表型特征。但該法因受試者的限制而難以廣泛開展。

2.2 體外研究