免疫膠體金技術(shù)在豬旋毛蟲病診斷中的應(yīng)用研究

趙阿普

（云南省怒江傈僳族自治州動物衛(wèi)生監(jiān)督所，云南 怒江 673199）

免疫膠體金技術(shù)在豬旋毛蟲病診斷中的應(yīng)用研究

趙阿普

（云南省怒江傈僳族自治州動物衛(wèi)生監(jiān)督所，云南 怒江 673199）

免疫膠體金技術(shù)；豬旋毛蟲病；診斷效果

旋毛蟲病，是一種較為常見的人畜共患寄生蟲病。若是患有旋毛蟲病的人得不到及時治療，會造成死亡。隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷發(fā)展和進(jìn)步，對于豬旋毛蟲病提出了經(jīng)由免疫膠體金技術(shù)的診斷方式。所以，我院為了探究免疫膠體金技術(shù)在豬旋毛蟲病診斷中的應(yīng)用，對其進(jìn)行了相關(guān)實驗研究。現(xiàn)將報告如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

以我我院2015年01月01日至2015年09月01日收集的豬旋毛蟲標(biāo)本進(jìn)行討論和分析。

1.2 方法

在實驗過程中需要使用的器械有79-1加熱磁力攪拌器和SⅠGMA-3K30超速離心機(jī)，生產(chǎn)公司分別為江蘇中大儀器廠和上海天呈醫(yī)流科技股份有限公司。在實驗過程中需要使用的試劑有檸檬酸三鈉、牛血清白蛋白、氯金酸、碳酸鉀，其生產(chǎn)公司分別為北京鼎國生物技術(shù)有限公司、大連寶生物生物技術(shù)有限公司、洛陽市化學(xué)試劑廠。

1.2.1 制備試劑首先需要制備膠體金和處理旋毛蟲排泄抗原。在制備膠體金時，將濃度為0.01%的100mL氯金酸進(jìn)行加熱到沸騰。加入2mL的檸檬酸三鈉水溶液，濃度為1%，加熱30min后進(jìn)行冷卻。最后，加入0.5mL的碳酸鉀。處理旋毛蟲排泄抗原時，首先需要進(jìn)行樣本的標(biāo)記，并將其放置在氯化鈉中。其次，將其冰箱中進(jìn)行透析。最后，放置在離心機(jī)中進(jìn)行離心，并調(diào)整蛋白濃度。

1.2.2 膠體金于旋毛蟲排泄抗原比例確定實驗在10支試管中均裝入1mL pH為9的膠體溶液，并將旋毛蟲排泄抗原使用pH為9的硼酸鈉緩沖液，并將蛋白濃度分別稀釋為50μg/mL、45μg/mL、40μg/mL、35μg/mL、30μg/mL、25μg/mL、20μg/mL、15μg/mL、10μg/mL、5μg/mL，并將其分別置入于10支試管內(nèi)于膠體金溶液混合。同時在使用一支空試管將膠體金溶液于1mLPBS進(jìn)行混合。在靜置10min后，在11支試管中分別置入100μL的氯化鈉溶液，其濃度為10%。觀察11支試管在靜置2h后的化學(xué)反應(yīng)變化情況。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察膠體金與旋毛蟲排泄抗原比例確定實驗后的液體顏色變化以及聚沉的現(xiàn)象。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS l5.0軟件分析，計量數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±S）表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料采用百分比表示,數(shù)據(jù)對比采取X2校驗，P＞0.05，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 實驗結(jié)果分析

經(jīng)過數(shù)據(jù)對比分析后發(fā)現(xiàn)，對于膠體金與旋毛蟲排泄抗原的混合，其實驗結(jié)果顯示pH為9的結(jié)合效果最佳。在實驗中發(fā)現(xiàn)，1～6試管的旋毛蟲排泄抗原量不足，因此顏色由紅色轉(zhuǎn)變?yōu)樗{(lán)色。在第7支試管內(nèi)的旋毛蟲排泄抗原量為穩(wěn)定膠體金的最低含量。而7～10試管中的旋毛蟲排泄抗原量以達(dá)到了標(biāo)準(zhǔn)或是超出不，因此試管內(nèi)的顏色不變。

對于膠體金與蛋白用量比例情況。詳見表1。

表1 膠體金與蛋白用量比例情況

3 討論

隨著醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展和進(jìn)步，在免疫診斷中提出了經(jīng)由免疫膠體金技術(shù)的診斷方式。膠體金在弱堿中，其能夠有效的于蛋白分子進(jìn)行結(jié)合。現(xiàn)今，免疫膠體金技術(shù)的診斷方式已經(jīng)得到了廣泛的應(yīng)用。在實施膠體金于旋毛蟲排泄抗原比例確定實驗時，將膠體金于旋毛蟲排泄抗原的pH值調(diào)節(jié)到到穩(wěn)定值，兩者的正負(fù)電荷就能夠有效的結(jié)合到一起。從上述實驗研究結(jié)果中可知，加入少量的豬旋毛蟲排泄分泌抗原或是不加入豬旋毛蟲排泄分泌抗原，那么液體顏色就會由紅色逐漸變?yōu)樗{(lán)色。若是加入最低穩(wěn)定量的豬旋毛蟲排泄分泌抗原或是過量的豬旋毛蟲排泄分泌抗原，那么液體顏色則會保持不變，但是會出現(xiàn)聚沉的現(xiàn)象。在實驗中1mL的膠體金中最少需要35μg的豬旋毛蟲排泄分泌抗原蛋白才能夠保持穩(wěn)定。由此可見，在免疫膠體金技術(shù)在豬旋毛蟲病診斷中的應(yīng)用效果較為顯著，值得在臨床診斷中大力推廣和應(yīng)用。

［1］陳俊彥，等.免疫膠體金技術(shù)的應(yīng)用與展望［J］.化學(xué)分析計量，2014，23（1）∶101-103.

［2］王建科，等.膠體金免疫層析技術(shù)在動物病毒性傳染病診斷中的應(yīng)用［J］.動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2011，32（1）∶93-98.

［3］劉明遠(yuǎn)，等.我國的食源性寄生蟲病及其相關(guān)研究進(jìn)展［J］.中國獸醫(yī)學(xué)報，2014，34（7）∶1205-1206.

［4］林彤，等.膠體金標(biāo)記免疫層析技術(shù)的最新應(yīng)用進(jìn)展［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（16）∶8429-8431.

10．3969/J.ISSN．1671-6027．2016．04.020

趙阿普（1965～），納西族，云南省人，高級獸醫(yī)師，主要從事畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣應(yīng)用和獸醫(yī)公共衛(wèi)生研究工作