亞甲藍(lán)光化學(xué)法滅活血漿病毒對(duì)血漿成分的影響

李雯瑛

（朝陽市中心血站成分科，遼寧 朝陽 122000）

亞甲藍(lán)光化學(xué)法滅活血漿病毒對(duì)血漿成分的影響

李雯瑛

（朝陽市中心血站成分科，遼寧 朝陽 122000）

目的 探討亞甲藍(lán)光化學(xué)法滅活血漿病毒對(duì)血漿成分的影響。方法 2013年4月到2014年3月的一年間，每月隨機(jī)抽取新鮮血漿5袋，共計(jì)60袋作為研究對(duì)象，分別對(duì)亞甲藍(lán)光化學(xué)法滅活血漿病毒前后血漿中的凝血因子、血漿纖維蛋白原（Fg）、總蛋白（TP）含量進(jìn)行測(cè)定，并檢測(cè)亞甲藍(lán)殘留量。結(jié)果 亞甲藍(lán)光化學(xué)法病毒滅活前后，TP、Fg以及凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ等各項(xiàng)指標(biāo)無顯著變化，P＞0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。病毒滅活血漿中亞甲藍(lán)的殘留量?jī)H為0.06±0.01μmol／L，其濾出率可以達(dá)到94.0%。結(jié)論 在單袋血漿病毒滅活的過程中，亞甲藍(lán)光化學(xué)法對(duì)血漿質(zhì)量影響相對(duì)較小，是一種有效方法，實(shí)用性強(qiáng)，安全性好，值得臨床推廣應(yīng)用。

亞甲藍(lán)光化學(xué)法； 滅活血漿病毒； 血漿成分； 影響

臨床血漿輸注是特殊危急情況救治患者的重要方式之一，而在輸全血或者血液成分的過程中，也有一定的病毒性疾病傳播風(fēng)險(xiǎn)［1］。雖然，在血液采集時(shí)，各采、供血機(jī)構(gòu)的工作者會(huì)對(duì)采供血流程中各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行積極的控制，但鑒于檢測(cè)方法、病毒檢測(cè)種類、檢測(cè)試劑以及病毒感染血液后“窗口期”的存在、新病毒出現(xiàn)等多種因素的影響［2］，血漿輸注時(shí)仍無法完全達(dá)到“零風(fēng)險(xiǎn)”的目標(biāo)，因而，選擇有效的病毒滅活方法，提高血漿使用的安全性，對(duì)于降低經(jīng)血傳播相關(guān)疾病的風(fēng)險(xiǎn)具有十分重要的意義。隨著近年來血液成分病毒滅活技術(shù)的發(fā)展，輸血安全性得到了顯著的提高。亞甲藍(lán)光化學(xué)法是用于單袋血漿病毒滅活的一種方法，因其具有安全、有效、實(shí)用的優(yōu)點(diǎn)，在臨床輸血過程中逐漸被推廣應(yīng)用，但其仍存在缺少滅活后血漿的各項(xiàng)質(zhì)控指標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)和非脂包膜病毒的滅活等技術(shù)問題。總的來說，亞甲藍(lán)光化學(xué)法滅活血漿技術(shù)在我國的前景是美好的，其病毒滅活的效果已得到肯定，而分析亞甲藍(lán)化學(xué)法滅活對(duì)血漿成分影響則是保證血漿質(zhì)量的基礎(chǔ)和前提。作者對(duì)2013年4月到 2014年3月間隨機(jī)抽取的新鮮血漿實(shí)施亞甲藍(lán)光化學(xué)法病毒滅活實(shí)驗(yàn)，并對(duì)其滅活前后血漿成分進(jìn)行了檢測(cè)。具體報(bào)告如下。

資料與方法

1 一般資料

2013年4月到2014年3月的一年間，每月隨機(jī)抽取新鮮血漿5袋，共計(jì) 60袋作為研究對(duì)象。每袋血漿的容量均為 200mL，分別在實(shí)施亞甲藍(lán)化學(xué)法病毒滅活前后在無菌條件下留取血漿標(biāo)本（樣本的量為1mL），保存并待測(cè)。所有參與本次研究的血漿均嚴(yán)格按照相關(guān)操作規(guī)程進(jìn)行采集制備，且從血漿的采集到血漿樣本的制備結(jié)束，總時(shí)長≤6h。60袋血漿中，A型、B型、O型、AB型分別有20袋、20袋、10袋和10袋，涉及的男性和女性人數(shù)均相等。

2 方法

2.1 儀器與試劑 費(fèi)森尤斯傳統(tǒng)血袋，日立CR7型大容量離心機(jī)，費(fèi)森尤斯無菌接駁機(jī)，威圖半自動(dòng)生化分析儀，HDME-1A型醫(yī)用病毒滅活箱，MBPF-B200ML型一次性使用病毒滅活輸血過濾器，ACL-7000型血凝儀?？偟鞍祝═P）含量測(cè)定試劑盒、Fg含量測(cè)定試劑盒、凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ活性測(cè)定試劑盒。上述所有醫(yī)療耗材、儀器的質(zhì)量均達(dá)標(biāo)。

2.2 血漿病毒滅活 在經(jīng)三聯(lián)采血袋采血、離心（3800r／min）后，將新鮮血漿分離出來，并通過無菌接駁機(jī)將新鮮血漿與病毒滅活裝置接通。使用亞甲藍(lán)壺將新鮮血漿沖入到血漿病毒滅活裝置之后，混合均勻，使其充分反應(yīng)，并保持血漿中亞甲藍(lán)的濃度在1μmol／L，熱合斷離原血漿袋，將含血漿的光照袋置于病毒滅活柜中進(jìn)行照射，照射的條件設(shè)定為：光照度 30000～40000光照單位，溫度控制 4～6℃，擺動(dòng)頻率為 60次／min，照射時(shí)間 35min。照射和病毒滅活結(jié)束之后，采用濾器將亞甲藍(lán)濾去，導(dǎo)出并做好排氣等后續(xù)處理，速凍，獲得病毒滅活血漿。

2.3 檢測(cè) 采用全自動(dòng)血凝儀經(jīng)凝固法對(duì)病毒滅活血漿的多個(gè)凝血因子以及血漿纖維蛋白原（Fg）的含量進(jìn)行測(cè)定。采用半自動(dòng)生化儀經(jīng)雙縮脲法對(duì)血漿蛋白的濃度進(jìn)行測(cè)定。同時(shí)，采用分光光度法對(duì)血漿中的亞甲藍(lán)殘留量進(jìn)行測(cè)定。具體測(cè)定方法：用含有1%乙酸的甲醇溶液作試劑空白，并在652～656nm波長處對(duì)其吸光度進(jìn)行測(cè)定，按公式：供試血漿吸光度／對(duì)照血漿吸光度 ×對(duì)照血漿亞甲藍(lán)濃度進(jìn)行計(jì)算。所有試劑盒均購自上海金標(biāo)生物科技有限公司，要求在所有操作過程中嚴(yán)格按照試劑盒及儀器上的相關(guān)說明書進(jìn)行操作。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，對(duì)比采用配對(duì) t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 亞甲藍(lán)光化學(xué)法病毒滅活前后血漿各成分的變化比較

觀察亞甲藍(lán)光化學(xué)法病毒滅活項(xiàng)前后的總蛋白（TP）、血漿纖維蛋白原（Fg）以及凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ的變化情況可見，各項(xiàng)指標(biāo)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 亞甲藍(lán)光化學(xué)法病毒滅活前后血漿各成分的變化比較

2 亞甲藍(lán)光化學(xué)法病毒滅活后血漿中亞甲藍(lán)的殘留量

病毒滅活血漿中亞甲藍(lán)的殘留量?jī)H為0.06± 0.01μmol／L，其濾出率可以達(dá)到94.0%。

討 論

亞甲藍(lán)屬于堿性生物染料的一種，它能夠與病毒的核酸、脂質(zhì)包膜等相結(jié)合，并能在光照作用下發(fā)生反應(yīng)［3］，生成單態(tài)氧，使得病毒的蛋白、核酸結(jié)構(gòu)受到破壞，功能受到影響。研究證實(shí)，大部分脂質(zhì)包膜病毒、部分非脂質(zhì)包膜病毒都能夠被亞甲藍(lán)破壞［4］。因此，通過亞甲藍(lán)光化學(xué)法來對(duì)血漿進(jìn)行病毒滅活的方法早在上世紀(jì)九十年代就已經(jīng)出現(xiàn)，并在臨床應(yīng)用中取得了良好的效果。

本文主要研究的是亞甲藍(lán)光化學(xué)法滅活血漿病毒對(duì)血漿成分的影響，它直接關(guān)系到病毒滅活后血漿的質(zhì)量。新鮮血漿所含的成分較多，其中，不穩(wěn)定的凝血因子對(duì)光照及理化作用的敏感性相對(duì)較為敏感［5-6］，因而本研究就以亞甲藍(lán)光化學(xué)法病毒滅活前后血漿中的總蛋白（TP）、血漿纖維蛋白原（Fg）以及凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ的變化情況為依據(jù)進(jìn)行含量對(duì)比與分析。研究發(fā)現(xiàn)，病毒滅活血漿中各項(xiàng)指標(biāo)與滅活前相比，均出現(xiàn)一定程度的降低，但滅活前后比較，差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，回收率均在80%以上，含量既符合國家質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，也符合國際要求，不會(huì)對(duì)臨床輸注效果造成影響。同時(shí)，對(duì)濾除后的亞甲藍(lán)殘留量進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)僅為0.06±0.01μmol／L，遠(yuǎn)低于安全用量范圍。因此可以確定，在單袋血漿病毒滅活的過程中，亞甲藍(lán)光化學(xué)法對(duì)血漿質(zhì)量影響相對(duì)較小，是一種有效方法，實(shí)用性強(qiáng)，安全性好，值得臨床推廣應(yīng)用。

［1］何銳洪.研究亞甲藍(lán)光化學(xué)法病毒滅活對(duì)血漿有效成分的影響.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜，2013，34（13）：1721-1722.

［2］趙淑艷.不同亞甲藍(lán)／光化學(xué)法滅活病毒對(duì)血漿成分的影響.中外健康文摘，2014，5（20）：120-121.

［3］徐國勝.亞甲藍(lán)光化學(xué)法病毒滅活對(duì)血漿質(zhì)量的影響分析.中國醫(yī)藥指南，2013，11（20）：92-93.

［4］王超英.亞甲藍(lán)光化學(xué)法病毒滅活對(duì)血漿成分及白細(xì)胞殘留量的影響.臨床輸血與檢驗(yàn)，2014，16（3）：290-292.

［5］馬靜瑤，徐元宏.亞甲藍(lán)光化學(xué)法病毒滅活血漿技術(shù)及應(yīng)用.臨床輸血與檢驗(yàn)，2012，14（3）：282-284.

［6］張艷華，李廣慶，楊丹，等.病毒滅活新鮮冰凍血漿前后各種成分含量比較.河北醫(yī)藥，2012，34（7）：1079-1080.

（張?jiān)鑫渚庉嫞?/p>

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摘自《中國醫(yī)學(xué)論壇報(bào)》第42卷1期

2016年1月7日

Effect of Methylene Blue Photochemical Virus Inactivation on Plasma Components

LI Wen-ying
（Blood Components Preparation Department，Chaoyang Central Blood Station，Chaoyang 122000，China）

Objective To investigate the effect of methylene blue photochemical plasma virus inactivation method on plasma composition.Methods Total 60 bags of fresh plasma samples were selected randomly from April 2013 to March 2014，and 5 bags per month were used as the research object.The contents of coagulation factors，total protein（TP）and plasma fibrinogen（Fg）in plasma were determined respectively before and after methylene blue photochemical inactivation of plasma virus，and the residence of methylene blue was also detected.Results The TP，F(xiàn)G and coagulation factors II，V，VII，VIII，IX，X in plasma had not significantly difference before and after methylene blue photochemical virus inactivation（P＞0.05）.The residual amount of methylene blue in the virus-inactivated plasma was only 0.06±0.01 μmol／L，and its filtering rate could reach 94%.Conclusion The methylene blue photochemical method has a relatively small effect on plasma quality in the process of virus inactivation of single bag plasma sample，and it is practical，safe method and worthy of clinical application.

Methylene blue photochemical method； Plasma virus inactivation； Plasma components；Influence

10.11748／bjmy.issn.1006－1703.2016.01.030

2015-09-17；

2015-10-16