外源鈣離子對(duì)NaCl脅迫下菊花幼苗生理特性的影響

蘇江碩+陳素梅+管志勇+陳發(fā)棣

摘要：以耐鹽性中等水平的切花菊品種雪中花為材料，采用1/2Hoagland培養(yǎng)法研究添加不同濃度外源Ca2+（0、5、10、15、20 mmol/L）對(duì)150 mmol/L NaCl脅迫下菊花幼苗葉片丙二醛含量、脯氨酸含量、相對(duì)電導(dǎo)率、葉綠素含量、凈光合速率等光合指標(biāo)的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與菊花幼苗單純鹽脅迫相比，幼苗受到鹽脅迫后加入一定濃度的外源Ca2+，MDA含量降低23.99%～46.27%，Pro含量降低1.28%～46.90%，相對(duì)電導(dǎo)率降低22.81%～50.45%，葉綠素含量增加5.74%～42.16%，凈光合速率增加78.32%～161.74%，葉片Na+降低48.04%～61.04%，Ca2+、K+含量和Ca2+/Na+、K+/Na+增加幅度分別為5.65%～87.88%、9.36%～20.41%、98.37%～373.98%、121.30%～205.05%。以上結(jié)果表明，一定濃度的外源Ca2+可以提高鹽脅迫下菊花幼苗的抗性，緩解高濃度NaCl對(duì)植株造成的傷害，其中以15 mmol/L Ca2+處理效果最佳。

關(guān)鍵詞：菊花；外源鈣離子；鹽脅迫；生理特性

中圖分類號(hào)： S682.1+10.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2016）09-0199-05

土壤鹽堿化是全球性問(wèn)題，嚴(yán)重影響了生態(tài)環(huán)境和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)。菊花（Chrysanthemum morifolium）系菊科菊屬多年生宿根花卉，是我國(guó)的十大傳統(tǒng)名花和世界四大切花之一，具有極高的觀賞和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，在花卉生產(chǎn)中占有非常重要的地位[1]。目前我國(guó)菊花生產(chǎn)基本上為分散型區(qū)域性生產(chǎn)，沿海和北方地區(qū)的鹽漬土壤嚴(yán)重限制了菊花的栽培推廣。因此，研究菊花耐鹽機(jī)理并找到有效緩解鹽害的方法是菊花研究工作的重要任務(wù)之一。

鈣離子作為一種大量元素，不僅可以滿足植物正常生長(zhǎng)發(fā)育，還是植物代謝和發(fā)育的重要調(diào)控者。有研究表明，鹽分脅迫條件下施加適量的外源鈣，不僅可以緩解因鈣不足造成的礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)脅迫，而且能夠增加質(zhì)膜的穩(wěn)定性和保證鈣信號(hào)系統(tǒng)的正常發(fā)生和傳遞，從而維持細(xì)胞內(nèi)離子平衡[2]。植物在受到逆境脅迫時(shí)能提高游離鈣離子的濃度，并通過(guò)Ca2+與鈣調(diào)節(jié)蛋白（CaM）結(jié)合啟動(dòng)一系列生理生化過(guò)程，從而在植物對(duì)逆境的感受、傳遞、響應(yīng)和適應(yīng)過(guò)程中發(fā)揮重要作用[3]。目前外源鈣對(duì)植物鹽害的緩解效應(yīng)已在擬南芥[4]、玉米[5]、小麥[6]、黃瓜[7]等多種植物上有報(bào)道，但在菊花上，除米銀法等的研究[8]外，尚未見(jiàn)其他報(bào)道。為此，筆者研究了不同濃度的Ca2+對(duì)鹽脅迫下菊花幼苗的生長(zhǎng)、生理反應(yīng)、光合作用的影響，以期找到能夠緩解菊花鹽脅迫的最適Ca2+濃度，同時(shí)為闡明外源鈣緩解鹽害機(jī)制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料和處理

供試材料為耐鹽性中等水平的切花菊品種雪中花，由南京農(nóng)業(yè)大學(xué)“中國(guó)菊花種質(zhì)資源保存中心”提供。春季取生長(zhǎng)一致的腳芽在穴盤(pán)中扦插（扦插基質(zhì)蛭石與珍珠巖質(zhì)量比為1 ∶1），待菊花幼苗生根長(zhǎng)至10～12葉齡后，取出幼苗，洗凈根部基質(zhì)后轉(zhuǎn)入盛有清水的周轉(zhuǎn)箱內(nèi)（氣泵24 h/d通氣），放入溫室進(jìn)行培養(yǎng)。緩苗5 d后選取生長(zhǎng)一致的菊花幼苗，放入較小的周轉(zhuǎn)箱中，每箱10株，共6個(gè)處理。具體處理如下：

CK：即對(duì)照，1/2Hoagland；T1：1/2Hoagland+150 mmol/L NaCl；T2：1/2Hoagland+150 mmol/L NaCl+5 mmol/L CaCl2；T3：1/2Hoagland+150 mmol/L NaCl+10 mmol/L CaCl2；T4：1/2Hoagland+150 mmol/L NaCl+15 mmol/L CaCl2；T5：1/2Hoagland+150 mmol/L NaCl+20 mmol/L CaCl2。

處理5 d進(jìn)行各項(xiàng)生理指標(biāo)的測(cè)定，混合取樣，其中每個(gè)指標(biāo)測(cè)定時(shí)各處理中的不同植株均取同一葉位的葉片。每處理重復(fù)測(cè)定3次，取平均值。

1.2 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.2.1 形態(tài)指標(biāo)測(cè)定 處理后每天觀察記錄植株的形態(tài)特征變化，用數(shù)碼相機(jī)拍照記錄。

1.2.2 葉片丙二醛（MDA）含量的測(cè)定 MDA含量測(cè)定采用硫代巴比妥酸TBA法[9]，取0.2 g鮮樣，加3 mL 5% TCA，研磨后所得勻漿在3 000 r/min下離心20 min。取上清液2 mL，加2 mL 0.67% TBA，混合后沸水浴30 min，冷卻后再離心1次。分別測(cè)定上清液在450、532、600 nm處的吸光度，并按公式算出MDA濃度，再算出單位鮮量組織中的MDA含量。

1.2.3 葉片脯氨酸（Pro）含量的測(cè)定 Pro含量測(cè)定采用磺基水楊酸法，具體步驟參考張治安等的試驗(yàn)[10]。

1.2.4 相對(duì)電導(dǎo)率的測(cè)定 參照張治安等的方法[10]，用去離子水沖洗葉片3遍，用打孔器打5個(gè)葉圓片放入含有6 mL離心管中，隔夜后測(cè)定其電導(dǎo)值（EC1），放入沸水浴煮沸20 min，冷卻后再次測(cè)定電導(dǎo)值（EC2）。

相對(duì)電導(dǎo)率=EC1/EC2×100%。

1.2.5 葉綠素含量測(cè)定 按李合生等的方法[9]測(cè)定葉片葉綠素含量，取新鮮葉片用蒸餾水沖洗干凈，濾紙吸干多余水分，剪碎稱取0.02 g放入10 mL離心管中，加9 mL 95%乙醇提取液于黑暗條件下浸提48 h，測(cè)定D649 nm、D665 nm的值。

葉綠體色素含量（mg/g）=（色素濃度×提取液體積）/樣品鮮量。

1.2.6 光合指標(biāo)測(cè)定 用美國(guó)LI-COR公司產(chǎn)Ll-6400型光合儀于晴天上午09：00—11：00測(cè)定凈光合速率（Pn）、胞間二氧化碳濃度（Ci）、氣孔導(dǎo)度（Gs）、蒸騰速率（Tr）。測(cè)定時(shí)使用開(kāi)放氣路，光強(qiáng)為1 000 μmol/（m2·s），CO2氣體采自相對(duì)穩(wěn)定的3～4 m高的空氣層，葉室溫度為25 ℃。

1.2.7 離子測(cè)定 Ca2+、K+、Na+的提取參照王寶山等的方法[11]進(jìn)行，略加修改。稱取0.2 g鮮葉，剪碎后放進(jìn)試管，加入8 mL去離子水，沸水浴1.5 h，冷卻后過(guò)濾，用Perkin Elmer公司生產(chǎn)的Optimal 2100DV電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀測(cè)定過(guò)濾得到的浸提液中的Ca2+、K+、Na+離子含量。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 2007、SPSS 19.0軟件進(jìn)行分析處理，采用單因素方差分析（One-Way ANOVA），在α=0.05水平上進(jìn)行比較，用Duncans多重比較檢驗(yàn)不同材料處理之間植株的差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 外源Ca2+對(duì)NaCl脅迫下菊花幼苗生長(zhǎng)形態(tài)的影響

鹽脅迫處理4 d后，對(duì)照組植株葉片全部正常，處理組植株葉片從下到上均出現(xiàn)不同程度的失綠、焦枯、萎蔫等鹽害現(xiàn)象。鹽害程度最大的植株出現(xiàn)在沒(méi)有添加Ca2+的T1組，該組菊花幼苗基部有4～5張葉子形態(tài)異常且新葉發(fā)黃。加入一定濃度的Ca2+后鹽害現(xiàn)象有所緩解，其中T4組菊花受害程度最小，該組菊花幼苗基部只有1～2張葉子異常；T2、T3、T5組菊花幼苗受害程度相似，基部均有2～3張葉子異常（圖1）。結(jié)果表明，加入一定濃度的外源Ca2+可緩解菊花幼苗的鹽害現(xiàn)象，其中Ca2+濃度為15 mmol/L的緩解效果相對(duì)較好。

2.2 外源Ca2+對(duì)NaCl脅迫下菊花幼苗MDA含量的影響

與CK相比，菊花在150 mmol/L NaCl脅迫處理后MDA含量均有所升高，其中MDA含量最高出現(xiàn)在未添加Ca2+的T1組，為CK的2.31倍（圖2），說(shuō)明高濃度的NaCl可能導(dǎo)致了氧化脅迫，增強(qiáng)了膜脂過(guò)氧化程度。加入不同濃度的外源Ca2+后，與T1相比各處理植株葉片的MDA含量顯著下降，分別下降了T1的33.40%、38.88%、46.27%、23.99%，各處理之間差異不顯著，其中以加入15 mmol/L Ca2+的T4處理效果最好（圖2）。以上結(jié)果表明加入一定濃度的Ca2+可能抑制了NaCl脅迫下菊花幼苗的膜脂過(guò)氧化作用，從而減輕膜脂過(guò)氧化對(duì)細(xì)胞的傷害，但Ca2+濃度過(guò)高又可能會(huì)降低這種抑制作用。

2.3 外源Ca2+對(duì)NaCl 脅迫下菊花幼苗Pro含量的影響

菊花幼苗在150 mmol/L NaCl脅迫處理后，各處理Pro含量均有所上升，其中Pro含量最高出現(xiàn)在未加Ca2+的T1組，為CK的2.65倍；與T1相比，加入不同濃度的外源Ca2+后各處理Pro含量出現(xiàn)不同程度的下降，分別下降了T1的1.28%、8.48%、46.90%、16.04%，其中T2、T3、T1處理間差異不顯著， 而T4處理植株的Pro含量下降得最多， 與對(duì)照無(wú)顯著差異（圖3）。結(jié)果表明，鹽脅迫下增施一定濃度的外源鈣離子可能增強(qiáng)了植株的滲透調(diào)節(jié)能力，從而緩解鹽脅迫對(duì)植株的滲透脅迫傷害。

2.4 外源Ca2+對(duì)NaCl 脅迫下菊花幼苗相對(duì)電導(dǎo)率的影響

與CK相比，菊花在150 mmol/L NaCl脅迫處理后T1處理植株的相對(duì)電導(dǎo)率顯著上升了324.24%（圖4），說(shuō)明高濃度的NaCl使菊花細(xì)胞質(zhì)膜受到損傷，增強(qiáng)膜的透性，從而加劇了細(xì)胞內(nèi)的電解質(zhì)外滲；加入不同濃度的外源Ca2+后，與T1相比，處理組T2、T3、T4、T5的相對(duì)電導(dǎo)率均顯著下降，分別下降了T1的26.42%、33.35%、50.45%、22.81%，其中加入15 mmol/L Ca2+的T4處理的相對(duì)電導(dǎo)率最低，而加入20 mmol/L Ca2+的T5處理相對(duì)電導(dǎo)率最高（圖4）。以上結(jié)果表明鹽脅迫下增施一定濃度的外源鈣離子可有效提高膜的穩(wěn)定性，緩解電解質(zhì)的外滲，但Ca2+濃度過(guò)高，可能與Na+、Cl-一樣會(huì)對(duì)植株產(chǎn)生離子脅迫。

2.5 外源Ca2+對(duì)NaCl 脅迫下菊花幼苗葉綠素含量的影響

與CK相比，菊花在150 mmol/L NaCl脅迫處理后各處理植株的葉綠素含量均顯著下降，其中下降最多的是T1處理，為CK的51.50%；與T1相比，加入不同濃度的外源Ca2+后各處理葉綠素含量均有不同程度上升，總體趨勢(shì)是先上升后下降，其中T2上升的最少，T4上升的最多，分別是T1處理的1.06、1.42倍（圖5）。這表明一定濃度的外源鈣離子可能減緩了NaCl脅迫下菊花幼苗葉片葉綠素的降解速度，一定程度上穩(wěn)定了葉綠素含量，從而對(duì)菊花葉片的光合作用起到了一定的保護(hù)作用。

2.6 外源Ca2+對(duì)NaCl 脅迫下菊花幼苗光合作用的影響

與CK相比，菊花幼苗在150 mmol/L NaCl脅迫下，T1處理植株P(guān)n、Gs、Ci、Tr均顯著下降，分別下降了71.15%、70.27%、40.47%、63.64%；各處理與T1相比，加入不同濃度的外源Ca2+后Pn、Gs、Ci、Tr均出現(xiàn)不同程度升高，且隨著Ca2+濃度的升高，各光合指標(biāo)均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，并都在T4處理達(dá)到最大值，該處理植株葉片的Pn、Gs、Ci、Tr比T1分別顯著上升了161.74%、136.67%、279.92%、175.00%。但與CK相比，T4處理植株的Pn、Ci顯著低于CK，Gs與CK無(wú)顯著差異，而Tr顯著高于CK，這可能是由于鹽脅迫下植物自身適應(yīng)調(diào)節(jié)的一種方式；氣孔導(dǎo)度和胞間二氧化碳濃度變化趨勢(shì)一致，從而推斷，鹽脅迫下凈光合速率的降低主要是由于氣孔因子造成的（表1）。以上結(jié)果表明，鹽脅迫導(dǎo)致了菊花葉片Pn、Gs、Ci、Tr的下降，但Ca2+卻減輕了其下降的程度，即一定濃度的Ca2+能維持鹽脅迫下菊花較高的同化能力。

2.7 外源Ca2+對(duì)NaCl脅迫下菊花幼苗K+、Ca2+、Na+含量的影響

與CK相比，菊花幼苗在150 mmol/L NaCl脅迫后各處理植株的葉片中Ca2+、K+含量均降低而Na+含量均升高，其中T1處理植株的離子含量變化最大，分別是CK的0.4、0.66、3.35倍；與T1相比，加入不同濃度的外源Ca2+后各處理植株葉片的的Ca2+分別上升了10.71%、16.11%、87.68%、5.65%，K+分別上升9.36%、12.90%、20.41%、17.46%，而Na+分別下降了54.81%、57.43%、61.04%、48.04%（圖6-A）。這表明一定濃度的外源鈣處理可減少菊花幼苗葉片Na+的積累而增加K+、Ca2+的濃度，最佳鈣離子濃度為15 mmol/L。

進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，與CK相比，單純鹽脅迫下菊花幼苗葉片Ca2+/Na+、K+/Na+顯著降低，分別比CK下降了86.23%、79.84%； 加入不同濃度的外源Ca2+后， 各處理植株的Ca2+/Na+、K+/Na+呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，與T1相比各處理的Ca2+/Na+、K+/Na+除T5處理的Ca2+/Na+與T1差異不顯著外，其他處理均顯著高于T1。T4處理效果最好，Ca2+/Na+、K+/Na+分別是T1的4.80、3.05倍，但與CK相比，加鈣后各處理的Ca2+/Na+、K+/Na+仍顯著小于CK（圖6-B）。這表明外源鈣離子可能通過(guò)降低Na+離子在葉片中積累，提高葉片對(duì)Ca2+、K+的選擇性吸收從而維持較高的Ca2+/Na+、K+/Na+ 來(lái)減輕葉片的離子毒害或保持鹽脅迫下細(xì)胞內(nèi)的離子平衡，進(jìn)而緩解植株的鹽脅迫危害。

3 討論

在鹽脅迫等逆境條件下，植物體內(nèi)活性氧代謝系統(tǒng)的平衡受到影響，導(dǎo)致體內(nèi)積累較多的活性氧（如O-2· 、H2O2、·OH 等）[12]以啟動(dòng)膜脂過(guò)氧化作用，損傷或破壞膜結(jié)構(gòu)，從而在植物體內(nèi)積累較多的MDA，進(jìn)而引起電解質(zhì)外滲。鈣除了是植物體內(nèi)一種大量礦質(zhì)元素外，還作為一種重要的細(xì)胞膜的保護(hù)物質(zhì)，通過(guò)把膜表面的磷酸鹽和磷酸脂以及蛋白質(zhì)的羥基橋連起來(lái)從而維持鹽脅迫下細(xì)胞質(zhì)膜、液泡膜、葉綠體膜的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性以及ATPase的活性[3]。本研究結(jié)果表明，單純鹽脅迫下菊花幼苗葉片的MDA含量、相對(duì)電導(dǎo)率顯著高于對(duì)照，與T1相比，加入不同濃度的Ca2+后各處理MDA含量和相對(duì)電導(dǎo)率又顯著降低，且這種緩解效果隨著Ca2+濃度的升高呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，其中以15 mmol/L的T4處理效果最好（MDA含量為T(mén)1的53.73%，相對(duì)電導(dǎo)率為T(mén)1的49.65%），這表明Ca2+只有在一定濃度范圍內(nèi)起到保護(hù)質(zhì)膜的作用，超過(guò)最適濃度，Ca2+可能會(huì)與磷酸反應(yīng)生成沉淀而擾亂以磷酸為基礎(chǔ)的能量代謝，過(guò)高濃度的Ca2+也可能對(duì)植物產(chǎn)生新的鹽害。這與劉新星等在豌豆[13]、陳全戰(zhàn)等在油用向日葵[14]、尹增芳等在海濱錦葵[15]上的研究結(jié)果一致。

鹽脅迫下，外界環(huán)境的滲透勢(shì)降低，鹽分對(duì)植物細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生滲透脅迫。滲透調(diào)節(jié)能力是植物耐鹽的最基本特征之一[16]。大量研究試驗(yàn)表明，植物在鹽脅迫下會(huì)合成一些小分子有機(jī)物質(zhì)（如多元醇、甜菜堿、可溶性糖等）以增強(qiáng)植物的滲透調(diào)節(jié)能力，改善水分狀態(tài)，從而緩解鹽脅迫危害。在眾多滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)中，脯氨酸以游離狀態(tài)存在于植物細(xì)胞中，具有水溶性高、分子量低、在生理pH值范圍內(nèi)無(wú)靜電荷等特點(diǎn)[17]，是分布最廣的一種相容滲透劑，在植物對(duì)鹽的抗脅迫適應(yīng)中具有非常重要的意義。本研究結(jié)果表明，在單純鹽脅迫下菊花幼苗的脯氨酸含量比對(duì)照顯著升高了265.25%。加入不同濃度的Ca2+后，各處理的脯氨酸有不同程度的下降，其中T4處理下降得最多，與CK無(wú)顯著差異。研究結(jié)果與前人得出的部分結(jié)果相似，如程玉靜等研究外源硝酸鈣對(duì)黃瓜幼苗鹽脅迫傷害的緩解作用時(shí)發(fā)現(xiàn)，鹽脅迫下黃瓜幼苗葉片脯氨酸含量高出對(duì)照的28.1%，葉面噴施2 mmol/L硝酸鈣后，脯氨酸含量顯著低于對(duì)照[18]。但也有研究得到了不太一致的結(jié)果，如朱曉軍等研究發(fā)現(xiàn)加入5、10 mmol/L Ca2+后促進(jìn)了鹽脅迫下水稻幼苗脯氨酸的積累[19]；劉新星等研究發(fā)現(xiàn)豌豆幼苗葉片脯氨酸含量隨處理時(shí)間的延長(zhǎng)，對(duì)照及各處理豌豆幼苗葉片脯氨酸含量呈總體上升趨勢(shì)，且加鈣處理明顯高于單純鹽脅迫[13]。目前對(duì)于脯氨酸的積累與抗鹽性的關(guān)系仍存在不同的看法：有學(xué)者認(rèn)為脯氨酸在鹽害條件下的積累起到了細(xì)胞滲透壓調(diào)節(jié)劑的作用，保護(hù)膜與酶的結(jié)構(gòu)，從而緩解鹽脅迫[20]；也有學(xué)者認(rèn)為鈣離子濃度與鹽脅迫下脯氨酸的積累呈負(fù)相關(guān)[21]。從本研究的結(jié)果來(lái)看，脯氨酸可能僅是鹽脅迫下的一種產(chǎn)物，外加一定濃度的Ca2+可能通過(guò)保護(hù)膜的穩(wěn)定性、保持離子平衡等途徑減少植物鹽脅迫所受的傷害，從而減少脯氨酸的積累。總之，關(guān)于植物在鹽脅迫下脯氨酸的積累與抗鹽性還有待進(jìn)一步研究。

細(xì)胞內(nèi)一價(jià)離子Na+、K+和二價(jià)離子Ca2+之間的平衡是維持質(zhì)膜通透性和細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)完整性的重要因素之一。Cramer等認(rèn)為鹽脅迫下植株體內(nèi)K+、Ca2+等元素含量下降，一方面是由于外界高濃度Na+顯著降低了K+、Ca2+等離子活度；另一方面是由于具有高度活性的單價(jià)離子如Na+、Cl-等競(jìng)爭(zhēng)一些必需營(yíng)養(yǎng)元素在膜上的運(yùn)轉(zhuǎn)位點(diǎn)[21]。本研究結(jié)果表明，鹽脅迫下加入不同濃度外源鈣可顯著降低菊花幼苗葉片的Na+含量，提高K+、Ca2+含量及Ca2+/Na+、K+/Na+ 來(lái)緩解菊花鹽害。隨著Ca2+濃度的升高，這種緩解效果呈先上升后下降的趨勢(shì)，其中以加入15 mmol/L Ca2+的T4處理效果最好。一方面可能是適宜濃度的Ca2+緩解了Ca2+不足引起的礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)脅迫；另一方面可能是適宜濃度的Ca2+激活了與離子運(yùn)輸有關(guān)的酶的活性，使植物體K+、Ca2+ 含量提高而Na+、Cl-含量下降，從而維持細(xì)胞內(nèi)離子平衡以減少離子脅迫帶給植物的傷害，與馬淑英等的研究結(jié)果[4，18，22]一致。

光合作用是植物生長(zhǎng)發(fā)育的基礎(chǔ)[23-24]，葉綠素是光合作用的主要色素，其含量的高低在一定程度上反映了植物的同化能力的強(qiáng)弱。鹽脅迫下植物葉片中葉綠素含量下降，其主要原因是鹽脅迫提高了葉綠素酶的活性，促進(jìn)了葉綠素的降解，從而導(dǎo)致葉綠素含量減小[25]。本研究結(jié)果表明，單純鹽脅迫顯著降低了菊花幼苗葉綠素含量，而加入一定濃度的Ca2+后，能夠顯著抑制葉綠素含量的下降，在一定程度上促進(jìn)菊花在鹽脅迫下維持較高的光合速率。植物葉片凈光合速率的降低主要有由于氣孔的部分關(guān)閉導(dǎo)致的氣孔限制和葉肉細(xì)胞光合活性的下降導(dǎo)致的非氣孔限制2類，判斷依據(jù)是細(xì)胞間隙CO2濃度和氣孔導(dǎo)度的變化方向[26]。本研究發(fā)現(xiàn)鹽脅迫下加入不同濃度的Ca2+后，各處理的細(xì)胞間隙CO2濃度和氣孔導(dǎo)度均同步呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，因此認(rèn)為此時(shí)期菊花凈光合速率下降的原因主要是由氣孔因子限制。本研究通過(guò)對(duì)凈光合速率等光合指標(biāo)測(cè)定，結(jié)果表明一定濃度的Ca2+可以減輕鹽脅迫下菊花凈光合速率、氣孔導(dǎo)度、細(xì)胞間隙CO2濃度、蒸騰速率的下降程度，使其在一定程度上維持較高的光合速率。

綜上所述，菊花幼苗在鹽脅迫下加入一定濃度的Ca2+后能夠有效緩解鹽脅迫對(duì)菊花的傷害，且這種緩解效果隨著Ca2+濃度的升高表現(xiàn)為先上升后下降的趨勢(shì)，其中以加入15 mmol/L Ca2+的緩解效果最好。在鹽脅迫下，適宜濃度的Ca2+通過(guò)穩(wěn)定菊花的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)、抑制膜脂的過(guò)氧化、激活或抑制細(xì)胞膜上的各種離子通道，提高Ca2+/Na+、K+/Na+達(dá)到細(xì)胞內(nèi)外離子濃度平衡、減少鹽脅迫下形成滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)所消耗的能量等途徑緩解鹽害效應(yīng)，從而維持菊花幼苗較高的光合效率，提高菊花幼苗的耐鹽性。但當(dāng)外源Ca2+濃度較高時(shí)，其緩解作用明顯減弱，高濃度Ca2+對(duì)植物生長(zhǎng)的影響還有待于進(jìn)一步研究。

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