銀屑平丸對(duì)尋常型銀屑病患者皮損中STAT3和P-STAT3表達(dá)的影響

溫柔，席建元*，謝汶芳，李小鵬，祁林，陳偶英

（1.湖南省瀏陽(yáng)市人民醫(yī)院，湖南瀏陽(yáng)410300；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南長(zhǎng)沙410007；3.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南長(zhǎng)沙410128）

銀屑平丸對(duì)尋常型銀屑病患者皮損中STAT3和P-STAT3表達(dá)的影響

溫柔1，席建元2*，謝汶芳2，李小鵬2，祁林2，陳偶英3

（1.湖南省瀏陽(yáng)市人民醫(yī)院，湖南瀏陽(yáng)410300；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南長(zhǎng)沙410007；3.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南長(zhǎng)沙410128）

目的通過(guò)觀察銀屑平丸對(duì)尋常型銀屑病患者皮損中STAT3（信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子3）和P-STAT3（磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子3）表達(dá)的影響，探討銀屑病的發(fā)病機(jī)制及銀屑平丸治療尋常型銀屑病的作用靶點(diǎn)。方法21例尋常型銀屑病患者予口服銀屑平丸治療，療程8周。用免疫組化法檢測(cè)其治療前后皮損STAT3、P-STAT3的表達(dá)，并與20例整形切除術(shù)后的正常皮膚相比較。結(jié)果銀屑平丸治療組治療前皮損STAT3、P-STAT3的平均灰度值與正常組相比，其表達(dá)明顯升高（P＜0.01）；治療后皮損STAT3、P-STAT3的平均灰度值較治療前表達(dá)明顯下降（P＜0.05）。治療組治療前后STAT3、P-STAT3的表達(dá)呈正相關(guān)（P＜0.05）。結(jié)論在尋常型銀屑病中存在STAT3、P-STAT3的高表達(dá)，證實(shí)尋常型銀屑病的發(fā)生、發(fā)展與兩者相關(guān)。銀屑平丸通過(guò)降低皮損中STAT3、P-STAT3的表達(dá)水平，調(diào)節(jié)銀屑病中角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖和細(xì)胞凋亡，改善銀屑病對(duì)機(jī)體的損傷。

尋常型銀屑??；銀屑平丸；STAT3；P-STAT3；生地黃；丹皮；白花蛇舌草

銀屑病是一種以紅斑和鱗屑為主要臨床表現(xiàn)的慢性皮膚病，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)其病因、病機(jī)進(jìn)行了大量研究，STAT3（信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子3）、PSTAT3（磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子3）具有調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化、凋亡等生物學(xué)活性，本研究通過(guò)免疫組化檢測(cè)尋常型銀屑病患者皮損中STAT3、PSTAT3的表達(dá)，以探討銀屑病的發(fā)病機(jī)制和銀屑平丸治療尋常型銀屑病的作用靶點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以2014年1月至2014年8月在湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院皮膚科門診收集的尋常型銀屑病患者21例為治療組，整形美容科皮膚正常者20例為正常組。治療組男性11例，女性10例，年齡19～60歲，平均（37.38±14.17）歲，病程6～18個(gè)月；正常組男性10例，女性10例，年齡20～59歲，平均（36.81± 13.02）歲。兩組年齡、性別差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 病例選擇

1.2.1 西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《中國(guó)臨床皮膚病學(xué)》[1]中尋常型銀屑病進(jìn)行期診斷標(biāo)準(zhǔn)：（1）皮損以紅色大小不一的斑丘疹、斑片為主，上覆蓋銀白色鱗屑，刮除后可見發(fā)亮的半透明薄膜，剝?nèi)ケ∧こ霈F(xiàn)多個(gè)篩狀出血點(diǎn)。（2）不斷出現(xiàn)新發(fā)皮疹，色鮮紅，鱗屑增多，自覺(jué)不同程度的瘙癢，可見“同形反應(yīng)”。

1.2.2 中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》[2]診斷：皮損以紅色丘疹、斑片為主，表面覆蓋大量鱗屑，瘙癢程度不一，篩狀出血點(diǎn)明顯，可伴有心煩口渴，小便色黃，舌質(zhì)紅，苔薄黃或黃，脈滑數(shù)等。

1.2.3 納入標(biāo)準(zhǔn)（1）符合中西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）患者年齡在18～60歲；（3）在3個(gè)月內(nèi)未服用糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑及其他系統(tǒng)治療銀屑病的藥物，同時(shí)1個(gè)月內(nèi)未予銀屑病外用藥物及儀器治療；（4）不伴有其他類型皮膚病及腫瘤或系統(tǒng)性內(nèi)臟疾??；（5）自愿參加，簽署知情同意書。

1.2.4 排除標(biāo)準(zhǔn)（1）對(duì)研究的中藥制劑成分或皮膚活檢時(shí)麻醉藥物過(guò)敏；（2）病情不斷加重或合并發(fā)展到膿皰型、紅皮病型、關(guān)節(jié)型的患者，以及需要使用全身性系統(tǒng)藥物治療的患者；（3）妊娠或哺乳期婦女。

1.3 治療方法

治療組：口服銀屑平丸（湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院制劑室提供，藥物組成：生地黃、丹皮、丹參、紫草、半枝蓮、大青葉、白花蛇舌草、女貞子、旱蓮草、麥冬、白鮮皮、山藥、甘草等），15 g/次，3次/d。療程為8周。治療期間不使用相關(guān)外用藥物，囑患者在服藥期間盡量保持清淡飲食、勿食辛辣，禁魚腥發(fā)物，有充足的休息時(shí)間，保持情緒穩(wěn)定，預(yù)防感冒，忌水溫過(guò)高刺激皮膚等。

1.4 STAT3、P-STAT3表達(dá)檢測(cè)

1.4.1 標(biāo)本采集治療組治療前后取軀干四肢部皮損約1.2 cm×0.6 cm大小，正常組取軀干、四肢部疤痕植皮修復(fù)術(shù)后多余正常皮膚，標(biāo)本均保存在10%中性甲醛溶液中，將所有標(biāo)本收集完整后做石蠟包埋、病理切片，常規(guī)HE染色。

1.4.2 檢測(cè)方法兩組標(biāo)本通過(guò)免疫組化法檢測(cè)STAT3、P-STAT3的表達(dá)。具體操作參照PV-9 000免疫組化法，實(shí)驗(yàn)用試劑盒：STAT3、P-STAT3兔多克隆抗體（由北京中杉金橋公司提供），通用型二步法檢測(cè)試劑盒（由北京中杉金橋公司提供）。STAT3陽(yáng)性染色主要位于細(xì)胞核及胞漿，呈褐色或棕黃色顆粒，P-STAT3陽(yáng)性定位于細(xì)胞核，呈棕黃色或褐色顆粒，標(biāo)本免疫反應(yīng)的量化評(píng)估采用灰度分析法。通過(guò)CMIASWIN醫(yī)學(xué)彩色圖像分析系統(tǒng)，每張切片在400倍光鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，計(jì)算測(cè)試區(qū)域的平均灰度值，作為標(biāo)本的陽(yáng)性系數(shù)，灰度級(jí)別為0-255，平均灰度值越小表示免疫組化目標(biāo)因子表達(dá)水平越高。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料用“±s”表示，符合正態(tài)分布和方差齊性采用t檢驗(yàn)。雙變量相關(guān)分析：符合正態(tài)性采用直線相關(guān)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組皮膚組織STAT3、P-STAT3的表達(dá)光鏡圖

STAT3陽(yáng)性定位于銀屑病皮損表皮全層或中下層的角質(zhì)形成細(xì)胞胞核及胞漿中，正常對(duì)照組中僅少量基底層細(xì)胞呈陽(yáng)性表達(dá)；P-STAT3陽(yáng)性定位于銀屑病皮損表皮的基底層、棘層、顆粒層的細(xì)胞核中，正常對(duì)照組中幾乎陰性表達(dá)。見圖1。

2.2 兩組STAT3、P-STAT3表達(dá)比較

治療組治療前皮損STAT3、P-STAT3平均灰度值與正常組比較，差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；治療后與正常組比較，差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；治療組治療后皮損STAT3、P-STAT3的平均灰度值與治療前比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。提示銀屑病患者皮損中STAT3、P-STAT3的表達(dá)水平較正常皮膚有異常增高，銀屑平丸可下調(diào)患者皮損STAT3、P-STAT3的表達(dá)。見表1。

圖1 兩組皮膚組織STAT3、P-STAT3的表達(dá)光鏡圖（HE染色，×400）

表1 兩組STAT3、P-STAT3的平均灰度值比較（±s）

表1 兩組STAT3、P-STAT3的平均灰度值比較（±s）

注：與正常組比較*P＜0.05，**P＜0.01；與治療前比較#P＜0.05。

組別例數(shù)STAT3P-STAT3治療組治療前治療后正常組21 21 20 100.43±6.79** 190.06±12.54*#207.88±8.05 107.73±10.24** 193.34±12.28*#201.30±13.37

2.3 治療前后皮損STAT3、P-STAT3表達(dá)的相關(guān)性

治療前后皮損STAT3與P-STAT3的平均灰度值均呈正相關(guān)（r分別為0.834、0.689，P＜0.05）。

3 討論

銀屑病是一種常見的慢性、復(fù)發(fā)性炎癥性皮膚病，其病理生理的一個(gè)重要特點(diǎn)是表皮基層角質(zhì)形成細(xì)胞（KC）增殖加速，絲狀分裂周期縮短。STAT3是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子家族成員之一，具有多種重要的生物學(xué)活性，與炎癥反應(yīng)、細(xì)胞轉(zhuǎn)化、增殖、細(xì)胞凋亡、血管生成、腫瘤轉(zhuǎn)移等有關(guān)。許多學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)銀屑病患者皮損中可檢測(cè)到激活的STAT3，參與細(xì)胞的增殖、凋亡等；P-STAT3是STAT3的活化形式，活化的STAT3進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)與特定的靶基因DNA應(yīng)答元件結(jié)合，調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄，誘導(dǎo)Bcl-2、survivin、Bcl-xl、Mcl-1等抗凋亡基因和c-Myc、cyclin D1及VEGF等調(diào)控細(xì)胞周期基因的表達(dá)[3]。已有研究表明[4-5]，銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞（KC）的異常增生與STAT3的活化有關(guān)，Blumberg等[6]研究發(fā)現(xiàn)在銀屑病患者皮膚中存在STAT3信號(hào)途徑的過(guò)度表達(dá)，并且在IL-10相關(guān)細(xì)胞因子IL-20作用下被激活，活化的STAT3蛋白可能通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞凋亡參與銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞的異常增生，從而促進(jìn)了銀屑病的發(fā)病。

銀屑平丸是本院長(zhǎng)期治療銀屑病的經(jīng)驗(yàn)用方，以清熱解毒為主，兼以涼血養(yǎng)陰、活血化瘀。在前期的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中，銀屑平丸的作用機(jī)制可能與抗炎、改善微循環(huán)、調(diào)節(jié)免疫等機(jī)制相關(guān)[7]。本研究從細(xì)胞增殖、凋亡范疇進(jìn)一步探討銀屑平丸的作用機(jī)制，結(jié)果顯示，在尋常型銀屑病中STAT3、P-STAT3的表達(dá)異常增高，銀屑平丸干預(yù)后，STAT3、PSTAT3的表達(dá)均有所下降，治療前后皮損中STAT3與P-STAT3的表達(dá)呈正相關(guān)，提示銀屑平丸可能通過(guò)降低皮損中STAT3、P-STAT3的表達(dá)水平參與尋常型銀屑病的治療過(guò)程。

臨床上應(yīng)用中藥治療銀屑病具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，探討中藥治療尋常型銀屑病及其可能的作用機(jī)制研究顯得尤為重要。隨著研究的深入，不斷探索銀屑平丸治療尋常型銀屑病的治療靶點(diǎn)，將為患者提供一種安全可靠、療效確切、經(jīng)濟(jì)便利的內(nèi)服藥物。

[1]趙辨.中國(guó)臨床皮膚病學(xué)[M].第4版.南京：江蘇科學(xué)技術(shù)出版社，2009：1 166.

[2]鄭筱萸.中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2002：299-302.

[3]Niu G，Wright KL，Huang M，et al.Constitutive STAT3 activity upregulates VEGF expression and tumor angiogenesis[J].Oncogene，2002，21：2000-2008.

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（本文編輯馬薇）

Effects of Yinxieping Pills on STAT3 and P-STAT3 Expression in Patients with Psoriasis Vulgaris Lesions

WEN Rou1,XI Jianyuan2*,XIE Wenfang2,LI Xiaopeng2,QI Lin2,CHEN Ouying3
(1.Liuyang People's Hospital,Liuyang,Hunan 410300,China；2.The First Affiliated Hospital of Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410007,China)

Objective To investigate the psoriasis pathogenesis and action target in the treatment of vulgaris psoriasis by observing Yinxieping pills on the expression of STAT3 and P-STAT3 in patients with psoriasis vulgaris lesions.Methods 21 patients with psoriasis vulgaris were given Yinxieping pills for oral administration，the course for 8 weeks.The expression of STAT3 and P-STAT3 before and after treatment were detected by immunohistochemical method，which was also comapared with the normal skin of 20 cases with plastic surgery and resection.Results Compared with normal group，the expression of STAT3 and P-STAT3 in patients with psoriasis vulgaris was significantly higher than that in normal group（P＜0.001），and the expression of STAT3 and P-STAT3 after treatment was significantly decreased（P＜0.05）.The expression of P-STAT3 and STAT3 was positively correlated（P＜0.05）.Conclusion The abnormal expression of P-STAT3 and STAT3 in psoriasis vulgaris is higher，which is related to the occurrence and development of psoriasis vulgaris.Yinxieping pills can improve psoriasis on the body damage by reducing the expression of STAT3 and P-STAT3 in the lesions and regulating keratinocytes in psoriasis formation of cell proliferation and apoptosis.

psoriasis vulgaris；Yinxieping pills；STAT3；P-STAT3；fresh rehmannia；cortex moutan；oldenlandia

R275.1；R758.63

B

doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2016.03.019

2015-09-25

湖南省科技廳科研項(xiàng)目（2013FJ6077）。

溫柔，女，碩士，醫(yī)師，研究方向：皮膚性病學(xué)。

*席建元，男，主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師，E-mail：xijianyuan2010@126.com。