葛根功能飲料的急性毒性及解酒護(hù)肝功效評(píng)價(jià)

朱振元，羅游，薛婧，郭明珠，王曉婷

（食品營(yíng)養(yǎng)與安全教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津科技大學(xué)食品工程與生物技術(shù)學(xué)院，天津300457）

葛根功能飲料的急性毒性及解酒護(hù)肝功效評(píng)價(jià)

朱振元，羅游，薛婧，郭明珠，王曉婷

（食品營(yíng)養(yǎng)與安全教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津科技大學(xué)食品工程與生物技術(shù)學(xué)院，天津300457）

對(duì)所配制的葛根飲料進(jìn)行了急性毒性試驗(yàn)及解酒護(hù)肝的功效評(píng)價(jià)。葛根飲料中葛根總異黃酮含量是2%。急性毒性試驗(yàn)，小鼠未出現(xiàn)中毒癥狀，臟器均未發(fā)現(xiàn)病變，葛根功能飲料對(duì)雌雄小鼠的急性經(jīng)口LD50>600 mL/（kg·mb·md），表明該樣品無(wú)毒。功效評(píng)價(jià)試驗(yàn)，測(cè)試組的平均醉酒時(shí)間顯著長(zhǎng)于空白組（P＜0.01），測(cè)試組的平均醒酒時(shí)間短于空白組（P＜0.05）。在1、4、5h時(shí)，測(cè)試組血液中乙醇含量低于空白組（P＜0.05），在2、6h時(shí)，測(cè)試組血液中乙醇含量顯著低于空白組（P＜0.01）。表明飲酒之前適量飲用葛根飲料能起到增加酒量、防醉、解酒的作用，有效避免或減輕酒精造成的急性肝臟損傷。

葛根；葛根總異黃酮；功能飲料；解酒；護(hù)肝

葛根為豆科植物野葛、甘葛或粉葛的干燥根，是生活中較常見的藥食兩用資源?！吨袊?guó)藥典2010》中記載，葛根味甘、辛，性涼，歸胃、肺經(jīng)，有解肌退熱，透疹，生津止渴，升陽(yáng)止瀉等功效［1］。在中國(guó)、日本和韓國(guó)用葛根來(lái)治療發(fā)燒、腹瀉、糖尿病和心血管疾病。葛根含有豐富的異黃酮，主要以葛根素、大豆苷和大豆苷元為主，其他化學(xué)成分包括淀粉、三萜皂苷、多糖和生物堿，葛根素是葛根中主要的活性成分。藥理研究和臨床證據(jù)表明葛根有多種生物活性，包括舒張血管，保護(hù)神經(jīng)，抗炎，抗高血壓，抗缺血性等［2］。

全球疾病負(fù)擔(dān)中有3.5%的殘疾以及健康生存年損失由飲酒引起，與不安全性行為疾病負(fù)擔(dān)相一致，每年由飲酒引起的死亡人數(shù)約占全球死亡人數(shù)的6%（WHO，2014）。過度飲酒不僅損害健康，而且給社會(huì)帶來(lái)了不良后果和嚴(yán)重的負(fù)擔(dān)［3］。創(chuàng)傷住院病人中61%血乙醇陽(yáng)性（均數(shù)100 mL血中乙醇≥0.12 g），暴力受傷中的74%血乙醇陽(yáng)性，交通事故受傷者中的54%、其他事故受傷者中的30%血液乙醇陽(yáng)性。每年因過度飲酒造成經(jīng)濟(jì)損失大約達(dá)22 350億美元［4］。飲酒對(duì)慢性病有劑量-反應(yīng)關(guān)系。每天飲10 g純酒，乳腺癌危險(xiǎn)性增加9%，每天飲30 g～60 g時(shí)危險(xiǎn)性增加41%［4-5］。

2002年，劉志華的研究表明葛根素注射液對(duì)急性酒精中毒有一定的療效，并兼有降低血壓、減慢心率的作用，適用于各種急性酒精中毒病人的治療，特別是對(duì)有高血壓、冠心病的急性酒精中毒病人，具有解毒醒腦、降低血壓、改善心臟功能等多種作用［6］。Jeong-Sook Lee的研究表明葛根水提物通過增強(qiáng)脂類代謝和肝臟的抗氧化防御系統(tǒng)來(lái)緩解酒精對(duì)機(jī)體的不利影響［7］。葛花性味甘涼，用于解酒、醒酒、厭食和嘔吐等，葛花醒酒湯為漢方中醒酒的代表方劑，用于酒精中毒和食欲不振等癥［8］。鑒于目前市場(chǎng)對(duì)預(yù)防醉酒和解酒產(chǎn)品的巨大需求，本文主要對(duì)以葛根為原料配制的飲料進(jìn)行了小鼠急性毒性試驗(yàn)，并對(duì)其解酒護(hù)肝功效進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

葛根：毫州市永剛飲片有限公司；維生素C、維生素B1、維生素B6：食品級(jí)，天津市江天化工技術(shù)有限公司；檸檬酸：食品級(jí)，北方霞光食品添加劑有限公司；白酒（56°紅星二鍋頭）：北京紅星股份有限公司；實(shí)驗(yàn)用ICR小鼠：（合格證號(hào)SYXK（津）2012-0001），體重20± 5 g，天津市西青區(qū)博為生物制品經(jīng)營(yíng)部提供。

1.2主要儀器與設(shè)備

SP2012 UV型紫外可見分光光度計(jì)：上海光譜儀器有限公司；ESJ205-4電子天平：沈陽(yáng)龍騰電子標(biāo)量?jī)x器有限公司；G10型醫(yī)用高速離心機(jī)：安新縣白洋離心機(jī)廠。

1.3方法

1.3.1飲料配方成分

葛根解酒護(hù)肝功能飲料的內(nèi)容物以葛根總異黃酮為主要功能原料，以維生素B1、維生素B6和維生素C為輔助成分，用冰糖和檸檬酸進(jìn)行調(diào)味。乙醇進(jìn)入人體后使維生素B1的含量降低，缺乏維生素B1會(huì)導(dǎo)致諸多不良反應(yīng)，尤其會(huì)導(dǎo)致人體轉(zhuǎn)酮酪的制造能力不足，使細(xì)胞受損，此時(shí)適量補(bǔ)充維生素B1可彌補(bǔ)不足。維生素B6在機(jī)體對(duì)抗酒精的過程中也起到一定作用，作為多種酶的輔基能夠參于脂肪和氨基酸的代謝［9］。維生素C是重要的抗氧化劑，是自由基的有效清除劑，能夠有效降低酒精代謝過程對(duì)機(jī)體產(chǎn)生的損傷，以及協(xié)同維生素E抑制脂質(zhì)過氧化作。在解酒護(hù)肝方面，維生素C可與葛根總異黃酮協(xié)同作用，達(dá)到急性解酒防醉、慢性保肝護(hù)肝的作用。

本課題組之前的研究確定了飲料的最佳配方為葛根總異黃酮添加量為2%，冰糖添加量為7%，檸檬酸添加量為0.1%。

1.3.2生產(chǎn)工藝流程

生產(chǎn)工藝流程見圖1。

1.3.3葛根解酒護(hù)肝功能飲料急性毒性試驗(yàn)

以衛(wèi)生部頒布《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003年版）的安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)方法為指導(dǎo)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。選用雌雄各半，體重約為25 g的健康ICR小鼠20只。灌胃劑量為600 mL/（kg·mb·md）（相當(dāng)于成人每天劑量的120倍），濃縮一定比例之后灌胃。24 h分2次經(jīng)口灌胃產(chǎn)品濃縮液，每次灌胃量為0.2 mL。連續(xù)密切觀察兩周，記錄中毒表現(xiàn)及死亡情況，然后把小鼠處死，觀察其主要器官（心、肝、脾、肺、腎）的狀況。

圖1　葛根解酒護(hù)肝功能飲料的生產(chǎn)工藝流程圖Fig.1　Manufacturing process of pueraria functional beverage

1.3.4葛根解酒護(hù)肝功能飲料功效評(píng)價(jià)試驗(yàn)

將體重約為25 g的健康ICR小鼠按隨機(jī)原則分為兩組，每組10只。禁食（不禁水）12 h后，稱重，空白組灌胃0.2 mL生理鹽水，測(cè)試組灌胃約0.2 mL的飲料濃縮液，劑量相當(dāng)于600 mL/（kg·mb）葛根解酒護(hù)肝功能飲料。間隔30 min后，兩組均灌胃12.5 mL/（kg·mb）酒。密切觀察記錄并統(tǒng)計(jì)每組小鼠的平劇平均醉酒時(shí)間與醒酒時(shí)間，并從灌胃酒的時(shí)刻開始計(jì)時(shí)，每隔1小時(shí)對(duì)小鼠進(jìn)行眼眶取血，對(duì)血液的乙醇濃度進(jìn)行測(cè)定。依據(jù)本組實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，對(duì)葛根解酒護(hù)肝功能飲料的功能性做出客觀評(píng)價(jià)。

1.4數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以x±s表示，不同試驗(yàn)組之間的差異分析采用Student-t檢驗(yàn)。

2　結(jié)果與分析

2.1葛根解酒護(hù)肝功能飲料急性毒性試驗(yàn)

葛根解酒護(hù)肝功能飲料急性毒性試驗(yàn)見表1。

表1　小鼠急性毒性試驗(yàn)（n=10）Table 1　The acute oral toxicity experiment（n=10）

由表1可以看出，以600 mL/（kg·mb·md）劑量的葛根解酒護(hù)肝功能飲料劑量，經(jīng)濃縮給小鼠分別灌胃之后，連續(xù)觀察14 d，并未發(fā)現(xiàn)有明顯的中毒癥狀，也并未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，各項(xiàng)日常觀測(cè)指標(biāo)均無(wú)異常。小鼠脫頸處死之后，解剖觀察其心、肝、脾、肺、腎等器官，均未發(fā)現(xiàn)存在病變的異常情況，說(shuō)明葛根解酒護(hù)肝功能飲料對(duì)雌雄小鼠的急性經(jīng)口LD50>600 mL/（kg·mb· md），根據(jù)GB l5193.3-2014《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)》中規(guī)定的急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，該樣品無(wú)毒。

2.2飲料功效評(píng)價(jià)試驗(yàn)

將健康的約25 g的ICR小鼠按照隨機(jī)原則進(jìn)行分組，每組10只。稱重之后禁食（不禁水）12 h，按照規(guī)定灌胃操作之后，觀察記錄醉酒時(shí)間與醒酒時(shí)間并將所得數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)于表2中。

表2　飲料功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)醉酒、醒酒時(shí)間表（x±s，n=10）Table 2　Mice ebriety tolerance，sober time by functional verification test（x±s，n=10）

從給小鼠灌胃酒的時(shí)刻起開始計(jì)時(shí)，每隔一小時(shí)眼眶采血，對(duì)小鼠血液的乙醇濃度進(jìn)行測(cè)定。小鼠血液乙醇含量變化情況統(tǒng)計(jì)于表3。

表3　飲料功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)血液乙醇含量表（x±s，n=10）Table 3　Ethanol content by functional verification test（x±s，n=10）

從表2中可以看到，測(cè)試組的平均醉酒時(shí)間在（13.25±2.15）min范圍內(nèi)，顯著長(zhǎng)于空白組（6.52±2.66）min，達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的極顯著性差異（P＜0.01）。測(cè)試組的平均醒酒時(shí)間在（272.67±52.67）min范圍內(nèi)，顯著短于空白組（356.92±42.82）min，達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的顯著差異（P＜0.05）。表3顯示，測(cè)試組小鼠的血液情況明顯好于空白組，在1、4、5 h時(shí)，測(cè)試組的血液乙醇含量分別是（285.39±41.85）、（359.82±57.93）、（321.96± 67.27）mg/dL顯著低于空白組血液中的乙醇含量（P＜0.05），在2、6 h時(shí)，測(cè)試組的血液乙醇含量極顯著低于空白組（P＜0.01）。本組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，在飲酒之前飲用適量的葛根解酒護(hù)肝功能飲料能夠有效地延長(zhǎng)醉酒時(shí)間、縮短醒酒時(shí)間，從而起到增加酒量、防醉、解酒的作用，有效避免或減輕酒精造成的急性肝臟損傷。

3　結(jié)論與討論

葛根飲料對(duì)雌雄小鼠的急性經(jīng)口LD50>600 mL/（kg·mb·md），表明該產(chǎn)品沒有毒性。功效評(píng)價(jià)試驗(yàn)顯示灌胃葛根飲料的小鼠平均醉酒時(shí)間較對(duì)照組延長(zhǎng)了6.73 min，其醒酒時(shí)間縮短了84.25 min。小鼠血液乙醇含量變化結(jié)果顯示測(cè)試組小鼠的血液情況明顯好于空白組，在1、4、5 h時(shí)，測(cè)試組的血液乙醇含量顯著低于空白組（P＜0.05），在2、6 h時(shí)，測(cè)試組在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上極顯著低于空白組（P＜0.01）。表明葛根飲料有增加酒量、防醉、解酒的作用，有效減輕酒精造成的急性肝臟損傷。

酒精在體內(nèi)的代謝途徑是：1）消化道粘膜上的乙醇脫氫酶把少部分酒精轉(zhuǎn)化為乙醛；2）大部分酒精進(jìn)入肝臟，通過肝臟的乙醇脫氫酶轉(zhuǎn)化為乙醛；3）依靠乙醇脫氫酶和肝內(nèi)的P450把乙醛氧化為水和CO2排出體內(nèi)［10］。由功效評(píng)價(jià)試驗(yàn)的結(jié)果可知灌服功能飲料的小鼠比空白組醒酒時(shí)間短，血液中的乙醇含量也明顯低于空白組，表明葛根異黃酮在防醉解酒方面有良好的功效。Jeong-Sook Lee［7］認(rèn)為葛根水提物能通過促進(jìn)脂質(zhì)物質(zhì)代謝和提高肝臟中抗氧化酶的活性，從而降低乙醇及其代謝物的危害。中島嘉次郎［11］通過實(shí)驗(yàn)證明了葛根異黃酮能保護(hù)胃黏膜并促進(jìn)小鼠消化道的輸送功能。歐陽(yáng)玉祝［12］、周吉銀［13］等認(rèn)為葛根總黃酮是提取物中主要的活性成分，具有防醉酒，醒酒和對(duì)抗酒精肝損傷等作用。今后的研究，可以從代謝組學(xué)角度深入研究葛根有效成分在防醉解酒方面的機(jī)理。

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Acute Toxicity Test and Sober and Hepatoproctive Efficacy Evaluation of Radix Puerariae Functional Beverage

ZHU Zhen-yuan，LUO You，XUE Jing，GUO Ming-zhu，WANG Xiao-ting
（Key Laboratory of Food Nutrition and Safety，Ministry of Education，College of Food Engineering and Biotechnology，Tianjin University of Science&Technology，Tianjin 300457，China）

The acute toxicity and sober and hepatoproctive function of puerariae beverage were investigated. The total isoflavone content of puerariae beverage was 2%.Acute toxicity test indicated that puerariae beverage was non-toxic［LD50>600 mL/（kg·mb·md）］.Efficacy evaluation tests showed that the average drunk time of test group was significantly longer than that the control group（P＜0.01），and the average sober time of test group was short compared with the control（P＜0.05）.The concentration of ethanol in blood was determined by every 1 h.At 1，4，5 h，the content of ethanol in the test group was lower than that in the control group（P＜0.05），and at 2，6 h，the content of ethanol in the test group was significantly lower than that in the control group（P＜0.01）.Results confirmed that before drinking wine，drinking a moderate amount of puerariae functional beverage could effectively prolong ebriety time，shorten time to sober up，increase capacity for liquor and antidrunk，and also could effectively avoid or alleviate the acute liver injury caused by alcohol.

radixpuerariae；puerarin；functionalbeverage；soberup；hepatoprotective

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.21.037

國(guó)家星火計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目（2015GA610001）；國(guó)家農(nóng)業(yè)科技成果轉(zhuǎn)化資金項(xiàng)目（2011GB2A100009）

朱振元（1969—），男（漢），教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：生物資源與功能食品。

2016-01-05