苦蕎麥蛋白質(zhì)的酶提工藝研究

譚萍，方玉梅，王盼，萬(wàn)俊熙

（六盤(pán)水師范學(xué)院，貴州六盤(pán)水553004）

苦蕎麥蛋白質(zhì)的酶提工藝研究

譚萍，方玉梅，王盼，萬(wàn)俊熙

（六盤(pán)水師范學(xué)院，貴州六盤(pán)水553004）

用酶法對(duì)苦蕎麥蛋白質(zhì)的提取進(jìn)行研究，比較酸性、中性及堿性3種蛋白酶的提取試驗(yàn)，結(jié)果顯示堿性酶的提取效果最好。采用單因素試驗(yàn)，測(cè)定了酶法提取的加酶量、提取時(shí)間、溫度、料液比和pH值對(duì)苦蕎麥蛋白質(zhì)提取效果的影響，通過(guò)正交試驗(yàn)，確定堿性酶提取苦蕎麥蛋白質(zhì)的優(yōu)化工藝為：加酶量0.3%，溫度55℃，料液比1∶11（g/mL），pH= 10，提取4h，蛋白質(zhì)提取率為82.57%。

苦蕎麥蛋白質(zhì)；酶法；提取工藝

苦蕎麥，又稱(chēng)三角麥［1］，蓼科蕎麥屬，為一年生或多年生宿根性植物［2］，原產(chǎn)于中國(guó)西南部海拔2 500 m～3 500 m的高寒地區(qū)，烏蒙山區(qū)（云南，貴州，四川）有大量種植，具有耐寒、耐貧瘠、喜陰等生長(zhǎng)習(xí)性?？嗍w具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和保健功能［3］，人體必需氨基酸齊全且配比適當(dāng)［4］。苦蕎麥的蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度高達(dá)110 g/L～150 g/L［5］，是使苦蕎麥具有較高的藥用價(jià)值和食用價(jià)值的重要成分［6］。近年來(lái)，蕎麥蛋白質(zhì)的生理功能逐漸引起了國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者的注意，研究表明苦蕎麥蛋白對(duì)抗衰老、降低血液中的膽固醇、抑制膽結(jié)石的形成、預(yù)防7，12-二甲苯蒽誘發(fā)的乳腺腫瘤均有明顯效果［7-9］，因此國(guó)際谷物理事會(huì)將苦蕎麥稱(chēng)為一種新的頗具潛在開(kāi)發(fā)前景的功能性食品配料。目前，國(guó)外尤其是日本已經(jīng)有多種苦蕎麥蛋白質(zhì)食品面世，而我國(guó)在這方面的研究屬于起步階段，本試驗(yàn)旨在探究苦蕎麥蛋白質(zhì)的提取工藝。

據(jù)了解，近來(lái)研究的重點(diǎn)主要集中在蕎麥蛋白的生理活性，對(duì)加工特性的研究相對(duì)較少。以往常使用堿法提取苦蕎麥蛋白質(zhì)，其工藝缺點(diǎn)有很多，如：反應(yīng)溫度高、提取時(shí)間長(zhǎng)、能源消耗大等。酶法提取是一種新的探索，目前在生產(chǎn)實(shí)踐中較少使用，酶法提取的提取效率高、提取時(shí)間短，另外，酶的價(jià)格便宜，因此酶法提取苦蕎麥蛋白適用于大規(guī)模生產(chǎn)。以往酶法提取工藝的研究主要集中在對(duì)茶葉、大米、大豆、啤酒糟的蛋白提取上［10-18］，郭榮榮等［19］利用大豆對(duì)堿法與酶法提取蛋白質(zhì)的優(yōu)劣進(jìn)行了試驗(yàn)探討，其工藝及方法均可為苦蕎麥蛋白質(zhì)的酶法提取提供一定的借鑒。對(duì)苦蕎麥蛋白的酶法提取工藝研究論著并不多見(jiàn)［20-21］。田斌等［22］用中性蛋白酶，張國(guó)權(quán)等［23］用木瓜蛋白酶對(duì)苦蕎麥的提取工藝進(jìn)行過(guò)研究，但二者都缺乏酸性、堿性、中性蛋白酶對(duì)苦蕎麥蛋白提取工藝的探討。因此，本文對(duì)苦蕎麥蛋白質(zhì)的酶提取工藝優(yōu)化進(jìn)行進(jìn)一步探討，以期為苦蕎麥的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用提供一些有用的參考。

1　材料與儀器

1.1材料及處理

苦蕎麥種子（六苦四號(hào)）：由六盤(pán)水職業(yè)技術(shù)學(xué)院農(nóng)業(yè)工程系苦蕎麥育種基地提供。取烘干的苦蕎麥種子于粉碎機(jī)中磨粉，過(guò)60目篩。在獲得的苦蕎麥粉中加入石油醚，于室溫環(huán)境脫脂12 h，期間攪拌并多次更換石油醚。將脫脂后的苦蕎麥分置于通風(fēng)櫥，風(fēng)干48 h備用。

1.2試驗(yàn)用酶

酸性蛋白酶（活力30萬(wàn)U/g）、中性蛋白酶（活力20萬(wàn)U/g）、堿性蛋白酶（活力20萬(wàn)U/g）：廣西龐博生物工程公司。

1.3試劑

pH 6.864和pH 9.182的成套緩沖劑：天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；石油醚、甲基紅與溴甲酚綠的混合指示劑、濃硫酸、0.058 41 mol/L的鹽酸、福林-酚試劑甲液、福林-酚試劑乙液、牛血清白蛋白（BSA）：市售國(guó)產(chǎn)分析純。

1.4儀器

TU-1901雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)：北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；TDL-60B低速臺(tái)式離心：上海安亭科學(xué)儀器廠；80-2型離心沉淀機(jī)：江蘇金壇市中大儀器廠；標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)篩（60目，孔徑0.3 mm）：浙江上虞市道墟張興紗篩廠；PHS-3C實(shí)驗(yàn)室pH計(jì)：上海虹益儀器儀表有限公司；101-2型電熱鼓風(fēng)干燥箱、DK-98-1型電熱恒溫水浴鍋：天津市泰斯特儀器有限公司；AL204型電子天平：梅特勒-托利多（上海）有限公司；DFT-200型高速萬(wàn)能粉碎機(jī)：溫嶺市林大機(jī)械有限公司；華燁牌KDN定氮儀：上海纖檢儀器有限公司。

2　方法

2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

參考楊玉芳［24］的文獻(xiàn)，采用福林-酚試劑法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線及測(cè)蛋白質(zhì)含量。準(zhǔn)確稱(chēng)取0.025g牛血清白蛋白（BSA），加蒸餾水溶解，定容至100 mL，得到250 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別取標(biāo)準(zhǔn)蛋白含量為0、25、50、100、150、200、250 μg/mL的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液1 mL，注入1號(hào)～7號(hào)試管中，然后均加入5 mL試劑甲，與樣品混合均勻，室溫下放置10 min，然后在每支試管內(nèi)加入0.5 mL福林-酚試劑乙立即混勻，于室溫下避光放置30 min，以1號(hào)試管為空白對(duì)照，在分光光度計(jì)680 nm波長(zhǎng)處［25］測(cè)定樣品的吸光度值，并以蛋白質(zhì)的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.2苦蕎麥蛋白總氮含量測(cè)定——?jiǎng)P氏定氮法

參考張超［20］、楊玉芳［24］等的文獻(xiàn)，采用凱氏定氮法測(cè)定蛋白質(zhì)含量。重復(fù)3次，取平均值，代入公式計(jì)算苦蕎麥蛋白質(zhì)的總氮含量。

粗蛋白質(zhì)提取率/%=［（V2-V1）×C×0.014 0×k］/（W× V'/V）×100

式中：V2為滴定試樣時(shí)消耗酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL；V1為滴定空白時(shí)消耗酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL；C為酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/L；0.014 0為氮的毫克當(dāng)量數(shù)；k為氮換算到粗蛋白質(zhì)的系數(shù)；W為試樣重量，g；V'為試樣分解液蒸餾用體積，mL；V為試樣分解液總體積，mL。

2.3蛋白酶的篩選

對(duì)酸性蛋白酶（pH=3），中性蛋白酶（pH=7），堿性蛋白酶（pH=10），按料液比1∶10（g/mL），提取溫度50℃，加酶量0.3%，提取時(shí)間3 h。于4 000 r/min離心機(jī)內(nèi)離心10 min，取上清液顯色后，于680 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度），計(jì)算蛋白質(zhì)的提取率，找出提取效果最好的蛋白酶。

2.4酶法提取單因素試驗(yàn)

2.4.1加酶量試驗(yàn)

稱(chēng)取1 g脫脂苦蕎麥粉，置于10 mL離心管內(nèi)。加酶量分別為0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%，用pH=10的水溶液溶解并定容至10 mL容量瓶?jī)?nèi)。準(zhǔn)確吸取1 mL酶液至對(duì)應(yīng)編號(hào)的離心管內(nèi)，按料液比1∶10（g/mL），pH=10，50℃的恒溫水浴鍋中提取3 h，于4 000 r/min離心機(jī)內(nèi)離心10 min，取上清液顯色后，在680 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算蛋白質(zhì)的提取率，找出最適加酶量。

2.4.2提取時(shí)間試驗(yàn)

稱(chēng)取1 g脫脂苦蕎麥粉，加酶量0.3%，料液比1∶10（g/mL），pH=10，50℃的恒溫水浴鍋中，分別提取3、4、5、6、7 h。于4 000 r/min離心機(jī)內(nèi)離心10 min，取上清液顯色后，在680 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算蛋白質(zhì)的提取率，找出最佳提取時(shí)間。

2.4.3溫度試驗(yàn)

稱(chēng)取1 g脫脂苦蕎麥粉，加酶量0.3%，料液比1∶10（g/mL），pH=10，分別置于40、45、50、55、60℃的恒溫水浴鍋中提取4 h。于4 000 r/min離心機(jī)內(nèi)離心10 min，取上清液顯色后，在680 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算蛋白質(zhì)的提取率，找出最適提取溫度。

2.4.4料液比試驗(yàn)

稱(chēng)取1 g脫脂苦蕎麥粉，加酶量0.3%，pH=10，按料液比1∶6、1∶8、1∶10、1∶12、1∶14（g/mL），置于50℃的恒溫水浴鍋中提取4 h，于4 000 r/min離心機(jī)內(nèi)離心10 min，取上清液顯色后，在680 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算蛋白質(zhì)的提取率，找出最佳料液比。

2.4.5pH值試驗(yàn)

稱(chēng)取1 g脫脂苦蕎麥粉，加酶量0.3%，分別加入pH 8.5、9、9.5、10、10.5的水溶液，料液比1∶10（g/mL），50℃的恒溫水浴鍋中提取4 h。于4 000 r/min離心機(jī)內(nèi)離心10 min，取上清液顯色后在680 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算蛋白質(zhì)的提取率，找出最適pH值。

2.5酶法提取正交試驗(yàn)

根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，選擇加酶量（A）、溫度（B）、料液比（C）、pH值（D）作為檢測(cè)因素，每因素選擇3個(gè)較佳水平，按L9（34）設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)方案，見(jiàn)表1。

表1　正交試驗(yàn)因素水平表Table 1　The factors and levels of orthogonal experiment

3　結(jié)果與分析

3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線

用最小二乘法經(jīng)線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)牛血清白蛋白濃度y與吸光度x的回歸方程：y=0.001 6x+0.108 3，R2=0.999 2，表明在一定范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.2苦蕎麥蛋白總氮含量測(cè)定——?jiǎng)P氏定氮法

重復(fù)3次試驗(yàn)，取平均值得樣品滴定消耗的鹽酸的體積為27.26 mL，空白（不加樣品作空白對(duì)照組）滴定消耗的鹽酸為0.16 mL，試樣分解液總體積與試樣分解液蒸餾用體積均為15 mL，計(jì)算得到粗蛋白質(zhì)含量為12.7%。

3.3蛋白酶的篩選

酸性蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶對(duì)苦蕎麥蛋白質(zhì)提取率的影響結(jié)果見(jiàn)表2、表3、表4。

由表2、表3、表4結(jié)果顯示，在這3種酶的最適反應(yīng)條件下，酸性蛋白酶提取率為27.93%，中性蛋白酶提取率為46.06%，堿性蛋白酶提取率為74.40%，表明堿性蛋白酶的提取效果最好。

表2　酸性蛋白酶對(duì)苦蕎麥蛋白質(zhì)提取率的影響Table 2　The influence extract rate on tartary buckwheat protein in acid enzyme

表3　中性蛋白酶對(duì)苦蕎麥蛋白質(zhì)提取率的影響Table 3　The influence extract rate on tartary buckwheat protein in acid enzyme in neutral enzyme

表4　堿性蛋白酶對(duì)苦蕎麥蛋白質(zhì)提取率的影響Table 4　The influence extract rate on tartary buckwheat protein in acid enzyme in alkaline enzyme

3.4酶法提取單因素試驗(yàn)的結(jié)果與分析

3.4.1加酶量對(duì)苦蕎麥蛋白質(zhì)提取率的影響

反應(yīng)條件：溫度50℃；時(shí)間3 h；料液比1∶10（g/ mL）；pH=10。加酶量設(shè)定0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%5個(gè)梯度，結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1　加酶量對(duì)苦蕎麥蛋白質(zhì)提取率的影響Fig.1　The influence extract rate on tartary buckwheat protein in the dosage of enzyme

由圖1可看出，在加酶量為苦蕎麥粉質(zhì)量的0.3%時(shí)，蛋白質(zhì)的提取率最高。當(dāng)酶量繼續(xù)增加，蛋白質(zhì)提取率開(kāi)始下降，在加酶量為0.5%時(shí)，提取率雖有所提高，但考慮到蛋白酶在提取蛋白質(zhì)的同時(shí)會(huì)破壞蛋白質(zhì)的三、四級(jí)結(jié)構(gòu)，使蛋白質(zhì)發(fā)生水解，使其喪失生理活性，因此選擇加酶量為0.3%為宜。

3.4.2提取時(shí)間對(duì)苦蕎麥蛋白質(zhì)提取率的影響

Festo 2018 IPC次日，全球媒體來(lái)到荷蘭乳制品農(nóng)場(chǎng)Lely公司。Lely和Festo近20年的合作是從單一的客戶與供應(yīng)商的關(guān)系升華為戰(zhàn)略伙伴關(guān)系的完美注腳。這家荷蘭乳制品農(nóng)場(chǎng)自動(dòng)化全球市場(chǎng)領(lǐng)先的公司太空人擠奶機(jī)器人項(xiàng)目中讓Festo參與程度越來(lái)越高，建立的合作項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)最終帶來(lái)了混合技術(shù)機(jī)器人。

反應(yīng)條件：溫度50℃；料液比1∶10（g/mL）；加酶量0.3%；pH=10。提取時(shí)間設(shè)定3、4、5、6、7 h 5個(gè)梯度，結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖2　提取時(shí)間對(duì)苦蕎麥蛋白質(zhì)提取率的影響Fig.2　The influence extract rate on tartary buckwheat protein in extracted time

由圖2可看出，在提取時(shí)間3 h～4 h期間，蛋白質(zhì)提取率迅速提高。隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，由于蛋白質(zhì)水解為氨基酸和肽，蛋白質(zhì)的提取率逐漸降低，所以提取的時(shí)間應(yīng)該控制在4 h左右。

3.4.3溫度對(duì)苦蕎麥蛋白質(zhì)提取率的影響

反應(yīng)條件：時(shí)間4 h；料液比1∶10（g/mL）；加酶量0.3%；pH=10。溫度設(shè)定40、45、50、55、60℃5個(gè)梯度，結(jié)果見(jiàn)圖3。

圖3　溫度對(duì)苦蕎麥蛋白質(zhì)提取率的影響Fig.3　The influence extract rate on tartary buckwheat protein in temperature

由圖3可看出，隨著溫度的升高，蛋白質(zhì)的提取率逐漸提高，在50℃時(shí)達(dá)到最高，當(dāng)溫度再升高時(shí)，酶活性受到抑制，從而使提取率下降。因此，應(yīng)選取50℃為最佳提取溫度。

3.4.4料液比對(duì)苦蕎麥蛋白質(zhì)提取率的影響

反應(yīng)條件：溫度50℃；時(shí)間4 h；加酶量0.3%；pH= 10。料液比設(shè)定1∶6、1∶8、1∶10、1∶12、1∶14（g/mL）5個(gè)梯度，結(jié)果見(jiàn)圖4。

圖4　料液比對(duì)苦蕎麥蛋白質(zhì)提取率的影響Fig.4　The influence extract rate on tartary buckwheat protein in the ratio between material and solvent

由圖4可知，隨著料液比逐步增加，體系的粘度逐漸降低，分子擴(kuò)散速率提高，蛋白質(zhì)提取率逐漸增大；蛋白質(zhì)提取率在料液比為1∶10（g/mL）處達(dá)到最大值；當(dāng)料液比超過(guò)1∶10（g/mL），提取率下降，說(shuō)明選擇料液比為1∶10（g/mL）較合適。

3.4.5pH對(duì)苦蕎麥蛋白質(zhì)提取率的影響

反應(yīng)條件：溫度50℃；時(shí)間4 h；料液比1∶10（g/ mL）；加酶量0.3%。設(shè)定pH=8.5，pH=9，pH=9.5，pH= 10，pH=10.5 5個(gè)梯度，結(jié)果見(jiàn)圖5。

圖5　pH值對(duì)苦蕎麥蛋白質(zhì)提取率的影響Fig.5　The influence extract rate on tartary buckwheat protein in pH

由圖5可知，在其他反應(yīng)條件不變的情況下，隨著pH值的增大，蛋白質(zhì)提取率呈明顯上升趨勢(shì)，在pH= 10時(shí)達(dá)到最高；當(dāng)pH再增大時(shí)，蛋白酶失去活性，蛋白質(zhì)提取率下降，說(shuō)明選取提取pH=10較為合適。

3.5酶法提取正交試驗(yàn)的結(jié)果與分析

結(jié)合單因素試驗(yàn)所得結(jié)果，采用正交試驗(yàn)對(duì)提取條件進(jìn)行優(yōu)化，以便使蛋白質(zhì)提取率得到進(jìn)一步提高。試驗(yàn)結(jié)果及極差分析見(jiàn)表5。

正交試驗(yàn)分析結(jié)果表明，影響酶法提取苦蕎麥蛋白質(zhì)的四個(gè)因素中，影響程度從高到低依次為D＞B＞C＞A，最優(yōu)組合為A2B3C3D2，即加酶量為0.3%，溫度55℃，pH=10，料液比為1∶11（g/mL）的條件下水浴提取4 h。

表5　正交試驗(yàn)結(jié)果及極差分析Table 5　Results of orthogonal test and range analysis

3.6酶法提取驗(yàn)證試驗(yàn)

由于表5沒(méi)有最優(yōu)組合方案，故有必要對(duì)其做驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，以進(jìn)一步確認(rèn)正交試驗(yàn)的可行性。稱(chēng)取烘干的脫脂苦蕎麥粉3份，每份1 g，置于10 mL離心管內(nèi)，按優(yōu)選出的最佳生產(chǎn)工藝條件進(jìn)行提取，于紫外分光光度計(jì)680 nm處測(cè)定吸光值，并計(jì)算出提取率，結(jié)果見(jiàn)表6。

表6　最佳工藝驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表Table 6　Optimal process validation test results

由表6的試驗(yàn)結(jié)果可知，在最佳的提取工藝條件下，蛋白質(zhì)提取率為82.57%，高于正交試驗(yàn)的最高水平77.01%故最佳工藝驗(yàn)證試驗(yàn)成功，說(shuō)明該提取工藝可靠且穩(wěn)定。

4　結(jié)論與討論

通過(guò)對(duì)3種蛋白酶的提取效果進(jìn)行比較，確定堿性蛋白酶對(duì)苦蕎麥蛋白質(zhì)的提取效果最好。并通過(guò)單因素和正交試驗(yàn)確定了用堿性蛋白酶提取苦蕎麥蛋白質(zhì)的最優(yōu)條件為：加酶量0.3%，溫度55℃，料液比1∶11，pH=10，提取4 h，提取率可達(dá)82.57%，僅有17.48%的蛋白質(zhì)沒(méi)有提取出來(lái)，這部分蛋白質(zhì)可能是前人報(bào)道的極難溶于水的殘?jiān)鞍祝?］，也可能包括一些與苦蕎麥中其它成分緊密結(jié)合的蛋白質(zhì)。

從現(xiàn)有研究蕎麥蛋白質(zhì)不同提取方法的文獻(xiàn)來(lái)看，蕎麥蛋白質(zhì)的提取方法有水溶液提取法、堿提取法、酶提取法等。此前對(duì)苦蕎麥蛋白質(zhì)的提取常使用堿法，具有雜質(zhì)較多、提取時(shí)間長(zhǎng)、反應(yīng)溫度較高、蛋白質(zhì)純度不高、提取量較低、能源消耗大等缺點(diǎn)［20］。酶法反應(yīng)的提取率較高、提取時(shí)間短等，且酶較為廉價(jià)，適用于大規(guī)模的生產(chǎn)［21］，但目前較少應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐。張超，郭貫新等［21］曾有類(lèi)似探討，其試驗(yàn)采用酶法提取苦蕎麥蛋白質(zhì)，結(jié)果為堿性蛋白酶效果最好，在最佳的工藝條件下，其蛋白質(zhì)的提取率為76%，略低于本試驗(yàn)高達(dá)82.57%的提取率。本試驗(yàn)可為六盤(pán)水苦蕎麥的綜合利用提供參考，可以充分說(shuō)明六盤(pán)水苦蕎麥具有良好的開(kāi)發(fā)價(jià)值和資源價(jià)值，應(yīng)綜合利用并加強(qiáng)資源開(kāi)發(fā)。

對(duì)苦蕎麥蛋白質(zhì)的水解工藝和生理功能已經(jīng)有越來(lái)越多的人進(jìn)行探討，而對(duì)苦蕎麥蛋白水解物——活性肽的分離、純化、生物活性及微觀結(jié)構(gòu)的探索還很少，生物活性肽具有調(diào)節(jié)激素、調(diào)節(jié)免疫能力、促進(jìn)礦物質(zhì)的吸收利用、抗氧化作用、抗高血壓、抗疲勞等生理功能，因此有必要對(duì)其進(jìn)行全面深入的探討。在后續(xù)試驗(yàn)中，我們可以將得到的苦蕎麥蛋白質(zhì)用不同的酶進(jìn)行水解試驗(yàn)，篩選出制備苦蕎麥活性肽合適的蛋白酶，用選出的蛋白酶對(duì)苦蕎麥蛋白質(zhì)進(jìn)行酶解得到相應(yīng)的活性肽。然后摸清苦蕎麥活性肽的氨基酸組成，探究苦蕎麥活性肽的抗氧化活性，并將其制成肽類(lèi)新型功能食品，為苦蕎麥高附加值產(chǎn)品的研發(fā)，為貴州苦蕎麥資源的綜合利用及苦蕎麥蛋白質(zhì)制品的研發(fā)提供相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論支撐。此外，還應(yīng)加強(qiáng)宣傳，普及蕎麥的營(yíng)養(yǎng)、藥用及保健價(jià)值，提高人們對(duì)蕎麥廣闊發(fā)展前景的認(rèn)識(shí)，從而將當(dāng)?shù)氐氖w麥資源優(yōu)勢(shì)轉(zhuǎn)變?yōu)榻?jīng)濟(jì)優(yōu)勢(shì)，帶動(dòng)當(dāng)?shù)氐慕?jīng)濟(jì)發(fā)展，增加農(nóng)民的經(jīng)濟(jì)收入。

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Study of the Extracted Process on the Protein of Tartary Buckwheat by Using Enzyme

TAN Ping，F(xiàn)ANG Yu-mei，WANG Pan，WAN Jun-xi
（Liupanshui Normal College，Liupanshui 553004，Guizhou，China）

Using enzyme，the protein of tartary buckwheat was extracted in this study.Three proteases such as acidic enzyme，neutral enzyme and alkaline enzyme were selected and the effects were compared.The results showed that the extracted effect of alkaline enzyme was best.The tests of single-factor were adopted to study the effects of influence factors on extraction of tartary buckwheat protein，such as the dosage of enzyme，extracted time，temperature，the ratio between material and solvent and pH.Using orthogonal experiment，the extracting conditions were optimized.And the optimum extracting conditions were as follows：the dosage of enzyme was 0.3%，temperature was 55℃，the ratio between material and solvent was 1∶11（g/mL），pH=10，extracted time was 4 h and the rate of extracted protein was up to 82.57%.

the protein in tartary buckwheat；enzymatic；extracted process

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.21.018

貴州省“125計(jì)劃”重大科技專(zhuān)項(xiàng)（黔教合重大專(zhuān)項(xiàng)字［2014］038號(hào)）；貴州省科技廳技術(shù)基金項(xiàng)目（黔科合J字LKLS［2013］05號(hào)）；貴州省教育廳基金項(xiàng)目（黔教合KY字［2014］257號(hào)）

譚萍（1963—），女（漢），教授，本科，從事植物生理學(xué)與分子生物學(xué)的教學(xué)與研究。

2015-10-29