煙青蟲初孵幼蟲的高效快速收集方法

王博琳，常耘，司升云

（1.河南平頂山市第一中學(xué)，467000；2.武漢市農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)研究院蔬菜科學(xué)研究所）

煙青蟲初孵幼蟲的高效快速收集方法

王博琳1，常耘1，司升云2

（1.河南平頂山市第一中學(xué)，467000；2.武漢市農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)研究院蔬菜科學(xué)研究所）

比較了常用的煙青蟲人工收集方法和新研發(fā)的煙青蟲初孵幼蟲快速收集方法的效果。試驗(yàn)結(jié)果表明，與人工收集方法相比，快速收集方法獲得初孵幼蟲所用時(shí)間少，收集的初孵幼蟲存活率搞，達(dá)96.33%，且收集的幼蟲發(fā)育更加整齊，雌、雄蛹單頭質(zhì)量（雌蛹295.33 mg，雄蛹284.66 mg）略大；還可節(jié)省大量人力，避免了人工挑蟲對初孵幼蟲的傷害，保障了煙青蟲實(shí)驗(yàn)種群的大量優(yōu)質(zhì)擴(kuò)繁。

煙青蟲；初孵幼蟲；快速收集法

煙青蟲（Helicoverpa assulta）又稱煙草夜蛾，屬鱗翅目（Lepidoptera）夜蛾科。煙青蟲在田間主要為害煙草和辣椒，為害辣椒時(shí)，以幼蟲蛀食辣椒的葉片和花果，常年蛀果率為20%～30%，嚴(yán)重為害時(shí)，蛀果率高達(dá)30%～50%［1，2］，經(jīng)濟(jì)損失嚴(yán)重；幼蟲可鉆入果內(nèi)，啃食果皮、胎座，并在果內(nèi)綴絲，排留大量糞便，致使果實(shí)不能食用，降低商品價(jià)值。

為了降低田間煙青蟲為害，為高效防控?zé)熐嘞x提供科學(xué)基礎(chǔ)和理論指導(dǎo)，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)需要開展針對煙青蟲生物學(xué)和生態(tài)學(xué)研究、對化學(xué)藥劑的敏感度及其變異測定及毒理學(xué)參數(shù)等試驗(yàn)，因此需要室內(nèi)繼代飼養(yǎng)和繁育煙青蟲試蟲種群，而抗藥性研究中還需要長期保存敏感和抗性或亞致死處理種群等［3］。目前采用人工飼料進(jìn)行煙青蟲室內(nèi)大規(guī)模繁育和繼代保種技術(shù)已經(jīng)成功實(shí)現(xiàn)，并進(jìn)一步改進(jìn)［4］，節(jié)約了大量的人力和物力。但是在煙青蟲的種群擴(kuò)繁過程中，其成蟲通常在紗布上產(chǎn)卵，當(dāng)卵孵化后，需要用細(xì)小毛筆將初孵幼蟲非常小心地從紗布上挑取到人工飼料上飼養(yǎng)，這個(gè)過程中存在較多的問題，一是人工挑蟲要特別小心，且耗時(shí)較長；二是即使非常小心，用毛筆挑取也很容易傷害或者致死初孵幼蟲，降低后代飼養(yǎng)數(shù)量；三是如果卵在夜晚孵化，則無法及時(shí)挑取初孵幼蟲到人工飼料上，而幼蟲孵化后6 h內(nèi)接觸不到飼料即餓死。因此，如何自動(dòng)無傷害地收集初孵幼蟲一直是煙青蟲乃至其他鱗翅目昆蟲種群擴(kuò)繁的制約因子之一。

在實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)煙青蟲時(shí)，常將裝有卵布的塑料袋放置在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，發(fā)現(xiàn)孵化后的幼蟲清晨全部集聚在朝向窗戶一側(cè)，由此推測煙青蟲初孵幼蟲的趨光性較強(qiáng)?；诖耍瑪M設(shè)置黑暗的卵孵化環(huán)境，正常環(huán)境的裝有人工飼料的塑料盒作為幼蟲收集盒，二者之間采用玻璃管相通，從收集時(shí)間、幼蟲存活率和煙青蟲蛹質(zhì)量3個(gè)指標(biāo)研究比較了該方法與常規(guī)人工收集方法的不同、優(yōu)勢以及是否適合用于煙青蟲初孵化幼蟲的收集。

表1　煙青蟲幼蟲人工飼料配方

1　材料與方法

1.1試蟲及人工飼料制作

試驗(yàn)用蟲為采集自煙草田的煙青蟲幼蟲，室內(nèi)在人工飼料上飼養(yǎng)超過3代。人工飼料的配方參照董鈞鋒等［4］的方法，具體成分及用量見表1。

其中，大豆粉在用前經(jīng)高壓滅菌鍋滅菌處理30 min，蒸熟后自然晾干，用粉碎機(jī)再次粉碎備用。麥胚粉制作方法：將小麥粒洗干凈，鋪于玻璃槽內(nèi)薄薄一層，每隔12 h灑水1次，保持小麥潮濕，當(dāng)小麥根長超過種子長度時(shí)，再次洗凈后放入電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中60℃干燥，最后加工成粉末備用。

人工飼料的具體制作方法如下：按表1所示份量，分別稱取各組分。先將瓊脂粉倒入不銹鋼鍋中，然后加入500 mL蒸餾水并在電磁爐上加熱，同時(shí)不斷攪拌，以確保瓊脂粉充分溶解。瓊脂粉煮沸3次后倒入九陽料理機(jī)中，加入稱量過的麥胚粉、辣椒粉、麥麩、酵母粉、熟大豆粉及亞油酸，攪拌1 min。攪拌均勻后放在超凈工作臺(tái)內(nèi)吹風(fēng)輔助降溫，待溫度降到50～60℃時(shí)，加入山梨酸、尼泊金、抗壞血酸等再次攪拌1 min，最后將攪勻的飼料倒入直徑18 cm的滅菌玻璃培養(yǎng)皿中，置于超凈工作臺(tái)中冷卻凝固，然后放入4℃冰箱中備用。

1.2煙青蟲飼養(yǎng)過程

試蟲在養(yǎng)蟲室內(nèi)不接觸藥劑的情況下一直飼養(yǎng)在人工飼料上。養(yǎng)蟲室室內(nèi)溫度（27±2）°C，濕度（60±10）%，光暗周期比為L/D=16 h/8 h。具體飼養(yǎng)過程如下。

①帶卵紗布消毒將帶卵紗布放入500 mL燒杯中，加入4%甲醛溶液浸泡10～12 min，清水漂洗2～3次，置于超凈工作臺(tái)內(nèi)微風(fēng)吹干表面水分后放入保鮮袋中，然后放入光照恒溫培養(yǎng)箱中等待孵化。

②幼蟲飼養(yǎng)初孵幼蟲群體飼養(yǎng)，卵孵化4 h內(nèi)，用軟毛筆將初孵幼蟲小心接入滅菌的裝有足夠人工飼料的指形管（平底）內(nèi)，每管接5頭。用滅菌的脫脂棉塞住指形管，幼蟲進(jìn)入3齡后分管飼養(yǎng)，直至幼蟲在試管中化蛹，飼料視情況更換。

③蛹老熟幼蟲化蛹后第3天，將健康蛹從指形管內(nèi)取出來，并將雌、雄蛹分別放入標(biāo)記過的塑料培養(yǎng)皿中（直徑90 mm）。隨后，放進(jìn)500 mL燒杯中，加入4%甲醛溶液浸泡10～12 min，用自來水沖洗并晾干后，按照雌雄分別放入羽化籠內(nèi)。

④成蟲成蟲羽化后轉(zhuǎn)移到交配籠中，并放入浸蘸10%蜂蜜水的脫脂棉供其補(bǔ)充營養(yǎng)。成蟲開始在紗布上產(chǎn)卵后，每天更換卵布。

1.3煙青蟲初孵幼蟲收集

①常規(guī)人工收集法帶卵紗布上出現(xiàn)初孵幼蟲后，在卵孵化4 h內(nèi)，用軟毛筆將初孵幼蟲人工接入養(yǎng)蟲盒內(nèi)，養(yǎng)蟲盒內(nèi)加入足夠的人工飼料，每盒接100頭進(jìn)行群體飼養(yǎng)。該部分由2位測試者（一位是在實(shí)驗(yàn)室工作超過2 a的熟練工人，另一位是在實(shí)驗(yàn)室工作不超過半年的非熟練工人）分別采用毛筆人工收集幼蟲，再轉(zhuǎn)移到人工飼料上。每個(gè)測試處理重復(fù)3次。

②快速收集法用1個(gè)四周包上黑布的黑色塑料盒子作孵化盒，將消毒后的帶卵紗布放入孵化盒中；設(shè)置第二個(gè)裝有人工飼料的幼蟲收集盒，孵化盒和幼蟲收集盒分別在接近底部的側(cè)面部位開1個(gè)圓孔，2個(gè)盒子之間用一根棕色玻璃管連接，初孵幼蟲白天基于趨光性從玻璃管中間自行爬到幼蟲收集盒的人工飼料上去取食；夜間在幼蟲收集盒旁邊放置一盞打開的LED臺(tái)燈，借助燈光誘導(dǎo)夜間孵化幼蟲爬行到幼蟲收集盒中，每個(gè)收集盒中初孵幼蟲數(shù)量達(dá)到100頭左右時(shí)及時(shí)更換另外一個(gè)新的幼蟲收集盒。該處理重復(fù)3次。

③幼蟲存活率和蛹重將2種方法收集的煙青蟲初孵幼蟲分別飼養(yǎng)在人工飼料上，飼養(yǎng)8 d后（3齡幼蟲階段），計(jì)算存活率，存活率（%）=（初孵幼蟲數(shù)量-生長至3齡幼蟲的數(shù)量）/初孵幼蟲數(shù)量× 100%。將存活幼蟲轉(zhuǎn)至指形管內(nèi)單頭飼養(yǎng)至化蛹，化蛹3 d后稱取蛹質(zhì)量；每個(gè)處理測定雌、雄蛹質(zhì)量各20頭，設(shè)3次重復(fù)。

1.4數(shù)據(jù)處理

用Sigmaplot 12.0作圖、SPSS 19.0軟件分析差異顯著性（p＜0.05），多重比較采用LSD法。

圖1　初孵幼蟲不同收集方法耗費(fèi)時(shí)間比較

2　結(jié)果與分析

2.1不同收集方法耗費(fèi)時(shí)間比較

3種處理耗時(shí)差異很大。非熟練工人采用毛筆挑取100頭初孵幼蟲到飼料上需52.67 min，熟練工人挑取100頭初孵幼蟲到飼料上需31.33 min，而采用快速收集法更換幼蟲收集盒（約計(jì)100頭/盒）1次，100頭幼蟲從孵化盒中爬行到幼蟲收集盒中耗時(shí)13.43 min（圖1）。結(jié)果表明，對于收集同樣數(shù)量的幼蟲而言，快速收集法將幼蟲轉(zhuǎn)移到人工飼料上所需時(shí)間顯著少于人工挑蟲法，可節(jié)約大量人力。

2.2不同收集方法的幼蟲存活率比較

由表2可以看出，熟練工人挑蟲的存活率平均為83.67%，個(gè)別超過85%，非熟練工人挑蟲成活率低于50%，平均為46.00%，二者之間差異顯著；而人工快速收集方法的初孵幼蟲存活率達(dá)96.33%，遠(yuǎn)高于非熟練人工挑蟲處理的，但與熟練工人挑蟲的存活率之間差異不顯著，說明該快速收集法能大大提高初孵幼蟲的存活率。

2.3不同收集方法的蛹質(zhì)量比較

由表3可以看出，快速收集法的雌雄蛹質(zhì)量均略高于人工挑蟲處理，但不同收集方法的雌性蛹質(zhì)量之間、雄性蛹質(zhì)量之間均無顯著差異。從標(biāo)準(zhǔn)差數(shù)據(jù)來看，快速收集法不同蛹質(zhì)量之間的差異較小，而人工挑蟲法蛹質(zhì)量之間差異較大，說明快速收集法得到的煙青蟲蛹更加整齊。

表2　不同方法收集幼蟲的存活率比較

3　小結(jié)與討論

煙青蟲成蟲趨光性強(qiáng)，很早就有報(bào)道［5］，田間也常利用該特點(diǎn)采用頻振式殺蟲燈有效誘殺煙青蟲成蟲，降低成蟲落卵率，抑制煙青蟲的繁殖［6，7］；而關(guān)于幼蟲趨光性的報(bào)道較少，張漢鵠［8］報(bào)道，大袋蛾（Clania variegata Snellen）幼蟲具有喜光性，常在灌木、矮樹等上聚集為害，但未明確不同齡期幼蟲間喜光性是否存在差異；另有研究發(fā)現(xiàn)，文山松毛蟲（Dendrolimus punctatus wenshanensis）幼蟲的趨光性強(qiáng)，但不同齡期幼蟲對光的敏感度差異及光源強(qiáng)度的高低尚需要進(jìn)一步研究［9］。

基于前期實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的多次觀察，確定煙青蟲初孵幼蟲具有朝向光源的特性，由此設(shè)計(jì)光源通道，讓初孵幼蟲自行爬向具有人工飼料的幼蟲飼養(yǎng)盒內(nèi)，大大降低了人工挑蟲耗費(fèi)的大量時(shí)間和精力，同時(shí)減少了人工操作帶來的不可避免的傷害。同時(shí)，由該方法得到的初孵幼蟲存活率高，后期發(fā)育的蛹整齊度高；另外，該法可實(shí)現(xiàn)初孵幼蟲的優(yōu)勝劣汰，淘汰不能成功爬行至收集盒內(nèi)的弱小幼蟲；而夜間開啟的LED燈還可誘導(dǎo)夜間孵化的幼蟲及時(shí)爬行到人工飼料上取食，保障了實(shí)驗(yàn)種群的大量優(yōu)質(zhì)擴(kuò)繁。該方法可以擴(kuò)展到其他具有相同特性的鱗翅目昆蟲的室內(nèi)種群飼養(yǎng)及擴(kuò)繁工作中。

本研究表明，煙青蟲低齡幼蟲的趨光性強(qiáng)，且證實(shí)了初孵幼蟲高效快速收集方法的可行性。田間觀察也發(fā)現(xiàn)，1～2齡煙青蟲幼蟲通常在葉片和花果向陽的一側(cè)取食，3齡后為害辣椒時(shí)則多蛀食果實(shí)。生產(chǎn)上可利用此特點(diǎn)，抓住3齡幼蟲前這一關(guān)鍵時(shí)期，噴施無內(nèi)吸性的病毒制劑、白僵菌和微孢子蟲等生防制劑，或者釋放棉鈴蟲齒唇姬蜂（Campoletis chlorideae Uchida）［10］、中紅側(cè)溝繭蜂（Microplitis mediatorHalidag）等防治煙青蟲，效果良好。

表3　不同方法收集的幼蟲化蛹后蛹質(zhì)量比較

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10.3865/j.issn.1001-3547.2016.20.032

S436.412.2+1

A

1001-3547（2016）20-0083-04

王博琳（1999-），男，E-mail：442428624@qq.com

司升云（1970-），男，通信作者，高級農(nóng)藝師，主要從事蔬菜害蟲綜合治理研究，E-mail：sishengyun@126.com

2016-05-24