人血管生成素樣蛋白4在宮頸鱗癌組織中的表達及其臨床意義

王 康, 白 靜

(1.包頭醫(yī)學院,內(nèi)蒙古包頭 014060； 2.包頭市腫瘤醫(yī)院放療科)

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人血管生成素樣蛋白4在宮頸鱗癌組織中的表達及其臨床意義

王 康1, 白 靜2

(1.包頭醫(yī)學院,內(nèi)蒙古包頭 014060； 2.包頭市腫瘤醫(yī)院放療科)

目的:探討人血管生成素樣蛋白(angiopoietin-like 4，ANGPTL4)在宮頸鱗癌中的表達及其臨床意義。方法:利用免疫組化檢測ANGPTL4在50例宮頸鱗癌和10例正常宮頸鱗狀上皮組織中的表達，分析ANGPTL4在宮頸鱗癌中的表達狀況及與宮頸鱗癌臨床病理參數(shù)的關系。結果:ANGPTL4在50例宮頸鱗癌中僅2例陰性，陽性率96.0 %(48/50)，而在宮頸正常組織中均無表達，兩組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；然而ANGPTL4的過表達與患者的年齡、腫瘤分化程度以及臨床分期均無相關性(P>0.05)。結論:ANGPTL4在宮頸鱗癌中高表達，提示其可能參與了腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，但其相關性還有待進一步研究證實。

人血管生成素樣蛋白4；宮頸鱗癌；免疫組化

人血管生成素樣蛋白4(angiopoietin-like 4，ANGPTL4)是一種新的糖基化脂肪細胞因子，屬ANGPTL家族的一員，以往的研究一直認為ANGPTL家族的所有成員主要功能是參與調(diào)控物質(zhì)能量代謝和血管生成[1]，但隨后的研究發(fā)現(xiàn)ANGPTL4在很多人體腫瘤(如食管癌、胃癌、大腸癌、肝癌、腎癌、肺癌、乳腺癌、惡性黑色素瘤以及軟組織肉瘤等)都存在過表達現(xiàn)象，新近的研究也證實ANGPTL4參與了腫瘤細胞生長、腫瘤血管生成以及腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移，在多方面調(diào)控著人體腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程[2]，本文擬通過檢測正常宮頸組織和宮頸鱗癌組織中ANGPTL4的過表達量，觀察ANGPTL4在宮頸鱗癌組織中的表達情況，探討在宮頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移過程中ANGPTL4的作用及臨床意義。

1 對象與方法

1.1 對象 收集包頭市腫瘤醫(yī)院2008年1月至2010年1月手術切除及活檢標本60例，其中正常宮頸組織10例；宮頸鱗癌50例，中、高分化32例，低分化18例；按2000年F1G0臨床分期，Ⅱ期32例，Ⅲ期18例。所有患者術前及活檢前均未接受化療或放療。年齡28～77歲，平均年齡59.0歲。所有標本均經(jīng)病理證實，并附有完整的臨床病理資料。

1.2 試劑與方法 應用免疫組化SP方法檢測ANGPTL。ANGPTL4抗體及SP試劑盒均購自上海生工生物工程股份有限公司。具體操作步驟嚴格按照說明進行。用預實驗陽性片作陽性對照，用磷酸鹽緩沖液代替一抗作陰性對照，用一張組織蠟塊連續(xù)切片做常規(guī)蘇木精-伊紅染色，用于腫瘤組織免疫組化陽性部位的對照判定和分析。

1.3 結果判讀 ANGPTL4陽性著色定位于細胞漿和或胞核，呈棕黃色。免疫組化結果判定標準：在光學顯微鏡下每張切片隨機選取5個高倍視野記數(shù)細胞(宮頸鱗癌組織為癌細胞；正常宮頸組織為鱗狀上皮細胞)。首先針對染色強度打分:無色、淡黃色、棕黃色、棕褐色分別為0、1、2、3分。再對陽性細胞所占百分比打分:無陽性細胞為0分；≤10 %記1分；11 %～50 %記2分；51 %～75 %記3分；>75 %記4分。將染色強度與陽性細胞百分比相乘所得數(shù)值:>3分視為陽性；≤3分視為陰性。對免疫組化結果陽性的再進行陽性強度分級:4～5分(+)；6～7分(++)；8～12分(+++)。結果采用雙盲法閱片判定，兩人閱片，閱片醫(yī)師不了解病史、臨床資料及抗體類型。

1.4 統(tǒng)計學處理 實驗結果采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。兩組間率的比較采用χ2檢驗及Fisher確切概率法。

2 結果

2.1 ANGPTL4表達情況 ANGPTL4在正常宮頸鱗狀上皮組織中均無表達，在宮頸鱗癌組織中明顯過表達，陽性率為96.0 %(48/50)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。見表1。

表1 ANGPTL4在正常宮頸組織與宮頸鱗癌中表達情況分析

2.2 ANGPTL4表達與宮頸鱗癌臨床特征的關系 宮頸鱗癌ANGPTL4的過表達與患者的年齡、腫瘤分化程度以及臨床分期均無明顯相關性(P>0.05)。見表2。

表2 ANGPTL4表達與宮頸鱗癌臨床特征的關系

3 討論

宮頸癌是嚴重威脅女性健康的惡性上皮性腫瘤，近年來我國宮頸癌處于逐年上升的趨勢，研究認為宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展與多種癌基因和抑癌基因的表達、調(diào)控及細胞凋亡及一些侵襲和轉(zhuǎn)錄因子密切相關，其機制目前仍不明確。絕大多數(shù)觀點認為宮頸癌是可以預防和治愈的，因此尋找并發(fā)現(xiàn)宮頸癌發(fā)生和發(fā)展過程中的敏感及相對特異的指標，阻斷其發(fā)病，遏制其侵襲和轉(zhuǎn)移，最終減少宮頸癌的發(fā)生，幫助臨床早期診斷、早期治療和判斷轉(zhuǎn)歸，都具有非常重要的意義。

ANGPTL4是一種新的糖基化脂肪細胞因子，屬ANGPTL家族的一員。該家族的所有成員主要功能是參與調(diào)控物質(zhì)能量代謝和血管生成，但已證實ANGPTL4還具有調(diào)控腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要作用。全長ANGPTL4以二聚體或四聚體形式存在，其N端和COOH端結構域被連接物連接，全長ANGPTL4經(jīng)前蛋白體轉(zhuǎn)換酶作用釋放N端coiled-coil片段(nANGPTL4，相對分子質(zhì)量26 kD)和COOH端纖維蛋白原樣片段(cANGPTL4，相對分子質(zhì)量47 kD)[3]。ANGPTL4及cANGPTL4有促進血管損傷和加速腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移的作用。ANGPTL4在食管癌、胃癌、大腸癌、肝癌、腎癌、肺癌、乳腺癌、惡性黑色素瘤以及軟組織肉瘤等多種人體惡性腫瘤中都存在多過表達現(xiàn)象，研究證實ANGPTL4與腫瘤細胞生長、腫瘤血管生成以及腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關，在多方面多層次調(diào)控著人體腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。

本研究發(fā)現(xiàn)ANGPTL4在宮頸鱗癌組織中高表達96.0 %(48/50)，顯著高于正常宮頸鱗狀上皮，提示ANGPTL4可能在調(diào)控宮頸鱗癌發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用。但是進一步分析發(fā)現(xiàn)，宮頸鱗癌ANGPTL4的過表達與患者年齡，尤其是病理組織學分級以及臨床分期無相關性，這與我們預實驗以及得出最終結論前的假設有一定差距，我們推測ANGPTL4與宮頸鱗癌組織學分級和臨床分期應強相關，且隨著組織分級和臨床分期的增高會出現(xiàn)同步高表達趨勢，有望作為宮頸鱗癌早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早預防以及判斷其預后的新生物指標。但僅憑這些數(shù)據(jù)還很難得出ANGPTL4與宮頸鱗癌相關性低，且在宮頸鱗癌發(fā)生發(fā)展中僅起微弱作用甚至不參與該過程的結論。因為這與實驗對象選擇的局限性、病理分級和臨床分期的標準把握及實驗條件的限制等多種因素有關，必須通過更精準和合理的實驗設計來進一步證實。

此外，有研究還發(fā)現(xiàn)，與對照組相比放化療抗拒的瘤細胞高表達STAT1[4]。而Kim等[5]發(fā)現(xiàn)，腫瘤細胞中ANGPTL4和cANGPTL4可以上調(diào)STAT1的表達，是STAT1的上游序列。ANGPTL4經(jīng)該通路可以促進人體腫瘤的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，同時還促進腫瘤細胞產(chǎn)生乏氧放化療抗拒，因此，可通過抑制瘤細胞ANGPTL4和cANGPTL4的表達進而下調(diào)STAT1，達到提高腫瘤細胞放化療敏感性的目的。由此，我們進一步推測ANGPTL4也有可能成為解決宮頸鱗癌放化療抗拒的一個新的重要線索和啟示。

[1] Hato T,Tabata M,Oike Y.The role of angiopoietin-like proteins in angiogenesis and metabolism[J].Trends Cardiovasc Med,2008,18(1):6-14.

[2] 王康,白靜.ANGPTL4在人腫瘤中的表達及其臨床價值的研究進展[J].醫(yī)學綜述,2015,21(15):2738-2741.

[3] Ge H,Yang G,Huang L,et al.Oligomerization and regulated proteolytic processing of angiopoietin-like protein 4[J].J Biol Chem,2004,279(3):2038-2045.

[4] Khodarev NN,Beckett M,Labay E,et al.STAT1 is overexpressed in tumors selected for radioresistance and confers protection from radiation in transduced sensitive cells[J].Proc Natl Acad Sci U S A,2004,101(6):1714-1719.

[5] Kim SH,Park YY,Kim SW,et al.ANGPTL4 induction by prostaglandin E2 under hypoxic conditions promotes colorectal cancer progression[J].Cancer Res,2011, 71(22):7010-7020.

Expression of ANGPTL4 in the tissues of cervical squamous cancer and its clinical significance

WANG Kang1, BAI Jing2

(1.BaotouMedicalCollege,InnerMongoliaUniversityofScienceandTechnology,Baotou014040,China;2.DepartmentofRadiotherapy,BaotouTumorHospital,Baotou014030,China)

Objective:To explore the expression of angiopoietinlike 4(ANGPTL4)in the tissues of cervical squamous cancer and its clinical significance. Methods：Immunohistochemistry was adopted to test the expression of ANGPTL4 in 50 cases of cervical squamous cancer tissues and 10 cases of healthy cervical squamous epithelium in order to analyze the expression of ANGPTL4 in the tissues of cervical squamous cancer as well as its correlations with the clinical parameters of cervical squamous cancer. Results：The positive rates of ANGPTL4 in the tissues of cervical squamous cancer and healthy squamous epithelium were 96% (48/50) and 0% (0/10) respectively, and there was statistical significance between the two groups (P<0.01); The overexpression of ANGPTL4 showed no correlation with the patients' age, histological differentiation degree and clinical stages of cervical squamous cancer (P>0.05). Conclusion：The overexpression of ANGPTL4 in cervical squamous cancer indicates that it may be involved in the genesis and development of tumor, but its correlation with cervical squamous cancer needs further investigation.

ANGPTL4; Cervical squamous cancer; Immunohistochemistry

2015-11-17)