S100A9和EZRIN蛋白在宮頸癌組織中的表達及其臨床意義

張 朦， 王冉冉， 田建虎， 巴彩霞

(1.包頭醫(yī)學院2013級研究生，內(nèi)蒙古包頭 014060；2.包頭市腫瘤醫(yī)院)

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S100A9和EZRIN蛋白在宮頸癌組織中的表達及其臨床意義

張 朦1， 王冉冉2， 田建虎1， 巴彩霞2

(1.包頭醫(yī)學院2013級研究生，內(nèi)蒙古包頭 014060；2.包頭市腫瘤醫(yī)院)

目的：探討鈣結(jié)合蛋白S100A9(calcium binding protein A9，S100A9)和EZRIN蛋白在宮頸癌組織中的表達及其臨床意義。方法：采用免疫組化法檢測70例宮頸癌組織及70例正常宮頸組織中S100A9和EZRIN蛋白的表達并分析其相關(guān)性。結(jié)果：S100A9和EZRIN蛋白在宮頸癌組織中的表達均高于正常宮頸組織(P<0.05)，S100A9與EZRIN蛋白在宮頸癌組織中的表達與年齡無關(guān)(P>0.05)，與浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)；S100A9蛋白在宮頸癌組織中的表達與分化程度無關(guān)(P>0.05)，EZRIN蛋白在宮頸癌組織中的表達與分化程度有關(guān)(P<0.05)；S100A9與EZRIN蛋白的表達成正相關(guān)(rs=0.136，P<0.05)。結(jié)論：S100A9和EZRIN蛋白與宮頸癌的侵襲性有關(guān)，可能成為臨床判斷宮頸癌預后的標志物。

宮頸癌；S100A9蛋白；EZRIN蛋白；免疫組化

宮頸癌的發(fā)病率居于女性惡性腫瘤第二位，死亡率居首位。近年來，宮頸癌的發(fā)病率有明顯上升及年輕化的趨勢，分型構(gòu)成也有明顯變化，故宮頸癌的相關(guān)研究就更有臨床意義。鈣結(jié)合蛋白S100A9(calcium binding protein A9，S100A9)是鈣結(jié)合蛋白S100蛋白家族中最重要的成員之一，近年來研究發(fā)現(xiàn)其對腫瘤生長、增殖及侵襲有著重要作用。EZRIN蛋白是早期腫瘤轉(zhuǎn)移的重要“十字路口”，是腫瘤轉(zhuǎn)移的核心蛋白，EZRIN過表達與多種來源的腫瘤轉(zhuǎn)移高度相關(guān)[1]。本研究通過免疫組化法檢測S100A9和EZRIN在宮頸癌及正常宮頸組織中的表達，探討其與宮頸癌浸潤深度、分化及轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，為預后及臨床治療提供新思路。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 宮頸組織標本 選取包頭市腫瘤醫(yī)院病理科2014年1月至2015年8月門診活檢及住院手術(shù)病例的蠟塊標本，共140例，其中病理確診為宮頸癌的有70例，術(shù)前均未進行放療、化療，作為宮頸癌組，因子宮肌瘤或其他原因行全子宮切除術(shù)且術(shù)后病理證實無宮頸病變的正常宮頸組織標本70例，作為對照組。

1.1.2 試劑 S100A9兔抗人單克隆抗體、EZRIN兔抗人單克隆抗體、免疫組化試劑盒、二氨基聯(lián)苯胺(diaminobenzidine，DAB)顯色試劑盒均購于北京博奧森生物技術(shù)有限公司。

1.2 方法 采用免疫組織化學染色方法(Envision法)，對正常宮頸組織及宮頸癌組織行S100A9、EZRIN蛋白水平表達測定，按試劑盒說明書進行操作。二抗為Envision套盒，用DAB顯色、蘇木素復染。每次實驗均以陽性對照切片作為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。癌細胞分化程度：Ⅰ級為高分化鱗癌，即角化性大細胞型；Ⅱ級為中分化鱗癌，即非角化性大細胞型：Ⅲ級為低分化鱗癌，即小細胞型。浸潤深度、分化程度以及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移依據(jù)病理診斷判定。

1.3 結(jié)果判定方法 用光學顯微鏡觀察全片，S100A9及EZRIN的陽性染色為細胞膜和細胞漿內(nèi)有棕黃色顆粒，核膜未見著色。按染色著色深度打分：無色為0分、淡黃色為1分、棕黃色為2分、棕褐色為3分。按陽性細胞率打分：陰性為0分，陽性細胞率<10 %為1分、11 %～50 %為2分、>51 %為3分。染色強度與陽性細胞率的乘積：0～2分為(-)、3～4分為(+)、5～9分為(++)。

1.4 統(tǒng)計學處理 所有數(shù)據(jù)均使用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學處理，對數(shù)據(jù)進行χ2檢驗、Spearman等級相關(guān)性檢驗，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 S100A9在宮頸癌組織及正常宮頸組織表達情況 S100A9蛋白在宮頸癌組織陽性表達率為91.3 %，高于正常宮頸組織中的45.6 %(χ2=31.79，P<0.01)見表1。(EZRIN在宮頸癌組織及正常宮頸組織表達情況 EZRIN蛋白在宮頸癌組織陽性表達率為72.8 %，高于正常宮頸組織中的25.6 %(χ2=29.31，P<0.01)。見表1)。

表1 S100A9和EZRIN蛋白在正常宮頸上皮及宮頸癌組織中的表達

S100A9蛋白在宮頸癌中的陽性表達見圖1，S100A9蛋白在正常宮頸上皮的陰性表達見圖2；EZRIN蛋白在宮頸癌中的陽性表達見圖3， EZRIN蛋白在正常宮頸上皮的陰性表達見圖4。

2.3 S100A9與EZRIN表達的相關(guān)性 經(jīng)統(tǒng)計此70例，S100A9與EZRIN蛋白共同陽性表達有47例，共同陰性表達的有6例，S100A9蛋白陽性且EZRIN蛋白陰性表達有13例，S100A9蛋白陰性表達且EZRIN蛋白陽性表達的有4例，S100A9和EZRIN蛋白在宮頸癌組織中的表達呈正相關(guān)(χ2=3.81，rs=0.136，P<0.05)。見表2。

表2 S100A9蛋白和EZRIN的表達關(guān)系

2.4 宮頸癌組織S100A9和EZRIN蛋白的表達與臨床病理特征的關(guān)系 S100A9蛋白在宮頸癌中的表達與年齡及分化程度無關(guān)(P>0.05)，與浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。EZRIN蛋白在宮頸癌中的表達與年齡無關(guān)(P>0.05)，與浸潤深度、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。見表3。

表3 S100A9和EZRIN蛋白在宮頸癌的表達與臨床病理特征的關(guān)系

注：N0為無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，N1為有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

3 討論

S100A9最初被發(fā)現(xiàn)是作為中性粒細胞表達和分泌的免疫蛋白，后來的研究表明S100A9是急性和慢性炎癥中重要的炎癥介質(zhì)，是中性粒細胞化學趨化性和黏附性的強有力的誘導劑[2]。S100A9不僅促進免疫反應和炎癥修復，也可以作為癌癥的一種危險信號，有研究發(fā)現(xiàn)胞外S100A8/S100A9表現(xiàn)出對多種細胞(包括腫瘤細胞)有抑制生長和誘導凋亡的作用。S100A9可分布在正常人的上皮細胞，比如口腔黏膜、食管、子宮頸等組織，但在某些病理條件下也可表達，如鼻息肉、銀屑病、肺癌等。據(jù)研究S100A9在腫瘤中發(fā)揮著重要生物學作用，與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)S100A9在腫瘤中發(fā)揮不同的生物學作用，大致表現(xiàn)為兩種情況：一種為S100A9呈現(xiàn)上調(diào)表達，與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，表現(xiàn)為促癌作用，如在肺腺癌、肺鱗癌、胃癌、乳腺癌(浸潤性導管癌)、結(jié)直腸癌、膀胱移行細胞癌等腫瘤組織中高表達[3-5]；另一種為S100A9在食管鱗狀細胞癌、喉頭癌中表達明顯下調(diào)，表現(xiàn)為促進腫瘤細胞的凋亡，抑制腫瘤的生長，但也有研究有著相反的結(jié)果。本實驗中S100A9高表達于宮頸癌中，且與腫瘤的浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示S100A9與宮頸癌有著密不可分的聯(lián)系，其參與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展，也可為判斷預后提供線索。

EZRIN蛋白是埃茲蛋白-根蛋白-膜突蛋白(ezfin-radixin-moesin，ERM)蛋白家族成員之一，EZRIN蛋白與膜表面受體分子、黏附分子等相互作用，在細胞分化、黏附、信號轉(zhuǎn)導等方面發(fā)揮重要作用。研究顯示，因其是一種胞膜細胞骨架蛋白，在機體細胞生長、腫瘤細胞的黏附、遷移、浸潤等過程中有著重要作用。最新研究發(fā)現(xiàn)，EZRIN和FAS、FAS配體組成共同體促進細胞凋亡，當EZRIN不能與之正常結(jié)合時，細胞凋亡過程受阻，實現(xiàn)腫瘤細胞的無休止增殖。EZRIN與多條信號轉(zhuǎn)導途徑有關(guān)，可在多種腫瘤中過表達并促進腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移。因此，EZRIN可能成為多種惡性腫瘤轉(zhuǎn)移和預后的分子標志[6]。本研究結(jié)果顯示EZRIN在宮頸癌組織中高表達，且其表達與S100A9相似，表現(xiàn)為浸潤越深，分化越低，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移EZRIN表達的陽性率越高。

S100A9及EZRIN在宮頸病變中表達呈正相關(guān)性，反映出S100A9有可能參與宮頸癌乃至其他惡性腫瘤早期的轉(zhuǎn)移。S100A9及EZRIN蛋白在宮頸癌組織中的高表達以及與浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示宮頸癌的惡性程度及浸潤轉(zhuǎn)移的潛能，為判斷預后提供依據(jù)。隨著今后有關(guān)研究的深入會為進一步闡明腫瘤發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移和腫瘤的藥物治療及分子靶向治療尋找腫瘤標志物等提供新的思路。

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Expressions of S100A9 and EZRIN protein in cervical carcinoma and their clinical significances

ZHANG Meng1，WANG Ranran2, TIAN Jianhu1, BA Caixia2

(1.BaotouMedicalCollege,Baotou014040,China;2.BaotouTumorHospital,Baotou014060,China)

Objective:To investigate the expressions of calcium binding protein A9 (S100A9) and EZRIN protein in cervical carcinoma and their clinical significances.Methods：Immunohistochemistry was adopted to test the expressions of S100A9 and EZRIN protein in 70 cases of cervical carcinoma and 70 cases of normal cervical epithelium and their correlation was analyzed. Results：The expressions of S100A9 and EZRIN protein in cervical carcinoma tissues were higher than those in the normal cervical epithelium (P<0.05). Their expressions had no relationship with age (P>0.05)，but were closely associated with the depth of cancer invasion and lymphatic metastasis (P<0.05). The expression of S100A9 protein had no relationship with degrees of differentiation (P>0.05), but EZRIN protein expression was closely correlated with the degrees (P<0.05). The expressions of S100A9 and EZRIN protein were positively correlated (rs=0.136，P<0.05). Conclusion：The expressions of S100A9 and EZRIN protein may be closely related to the invasion of cervical carcinoma and can be used as clinical prognostic indicator.

Cervical carcinoma; S100A9; EZRIN; Immunohistochemistry

巴彩霞

2016-01-04)