白雪菇新菌株的培養(yǎng)特性研究

何煥清 肖自添 劉 明 潘新華

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白雪菇新菌株的培養(yǎng)特性研究

何煥清1肖自添1劉 明1潘新華2

（1. 廣東省農(nóng)業(yè)科學院蔬菜研究所廣東省蔬菜新技術(shù)研究重點實驗室，廣東廣州 510640；2. 江西仙客來生物科技有限公司，江西九江332100）

通過對新分離的白雪菇（無毒肥腳環(huán)柄菇）菌株在不同環(huán)境和營養(yǎng)條件下的生長速率和長勢等培養(yǎng)特性研究，探明了白雪菇菌絲生長的最適溫度為30 ℃，培養(yǎng)基最適含水量為55%，pH為5，最佳碳源和氮源分別為葡萄糖和黃豆粉、麩皮。

白雪菇；培養(yǎng)特性；溫度；濕度；碳源；氮源

白雪菇（（Sow.:Fr.) Part.），學名無毒肥腳環(huán)柄菇，是新分離馴化栽培成功的一種食用菌（圖1）。據(jù)中國科學院微生物研究所卯曉嵐研究員對栽培成功的子實體的鑒定結(jié)果，其屬傘菌目、蘑菇科、白鬼傘屬。經(jīng)毒理試驗證明，該菌株無毒、可食用，為了與有關文獻提及的肥腳環(huán)柄菇（有毒）[1]加以區(qū)別，命名為無毒肥腳環(huán)柄菇。本文對白雪菇菌株的適宜碳氮源和培養(yǎng)環(huán)境條件進行了研究，旨在為白雪菇人工栽培提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

（1）供試菌株。白雪菇菌株由廣東省農(nóng)業(yè)科學院蔬菜研究所食用菌研究室保存并提供。

（2）PDA綜合培養(yǎng)基。馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，蛋白胨2 g，KH2PO43 g， MgSO41.5 g，維生素B115 mg，水1 L。

（3）碳源培養(yǎng)基。在基礎培養(yǎng)基（KH2PO43 g，MgSO41.5 g，維生素B115 mg，瓊脂20 g，硝酸銨1.15 g，水1 L）中分別加入0.72%的葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖、淀粉、果糖作為碳源培養(yǎng)基，以基礎培養(yǎng)基為對照。

圖1 白雪菇（無毒肥腳環(huán)柄菇）

（4）氮源培養(yǎng)基。在基礎培養(yǎng)基中分別加入0.03%的牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、麩皮、黃豆粉、硫酸銨、硝酸銨、氯化銨作為氮源培養(yǎng)基，以基礎培養(yǎng)基為對照。

1.2 試驗方法

（1）不同溫度、酸堿度對菌絲生長的影響試驗。用直徑0.5 cm打孔器將經(jīng)活化的菌種接到直徑9 cm PDA綜合培養(yǎng)基平板上。設10 ℃、15 ℃、20 ℃、25 ℃、28 ℃、30 ℃、35 ℃和38 ℃ 8個培養(yǎng)溫度處理，每個處理設5個重復。接種后觀察菌絲生長情況，測量菌絲生長速率。

常規(guī)滅菌后分別用已滅菌的1.0 mol·L-1HCL 和1.0 mol/L NAOH調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH至3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0和10.0，計14個梯度，然后制備平板培養(yǎng)基，每個處理設5個重復，接種后于30 ℃恒溫生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察菌絲生長情況，測量菌絲生長速率。

（2）不同濕度對菌絲生長的影響試驗。培養(yǎng)基配方：棉籽殼88.5%，麩皮8%，石膏1.5%，石灰2%。培養(yǎng)基濕度（含水量）分別設45%、50%、55%、60%、65%、70%共6個處理。含水量（%）＝水分重量/（培養(yǎng)料干物質(zhì)重量＋水分重量）×100。培養(yǎng)基充分混合后裝入30×200 （mm）的試管中，每支試管折合干料10 g，每個處理設5個重復。接入直徑為0.5 cm的菌種塊，于30 ℃恒溫生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察菌絲生長情況，測量菌絲生長速率。

（3）不同碳源對菌絲生長的影響試驗。試驗按1.1（3）設計，采用葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖、淀粉、果糖6種碳源培養(yǎng)基，用直徑0.5 cm打孔器將經(jīng)活化的菌種接到直徑9 cm平板培養(yǎng)基平板上，置于30 ℃恒溫生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每處理設5個重復，觀察菌絲生長情況，測量菌絲生長速率。

（4）不同氮源對菌絲生長的影響試驗。試驗按1.1（4）設計，采用牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、麩皮、黃豆粉、硫酸銨、硝酸銨、氯化銨8種氮源培養(yǎng)基，用直徑0.5 cm打孔器將經(jīng)活化的菌種接到直徑9 cm平板培養(yǎng)基平板上，置于30 ℃恒溫生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每處理設5個重復，觀察菌絲生長情況，測量菌絲生長速率。

（5）采用Excel、DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)軟件處理數(shù)據(jù)[5]。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同溫度下白雪菇菌絲的生長情況

白雪菇菌絲在15～38 ℃范圍內(nèi)均能生長（表1），其中15～30 ℃范圍內(nèi)，隨溫度上升，菌絲生長速度直線上升，長勢趨好；30 ℃時達到最高值，高于30 ℃時菌絲開始受到抑制，生長減慢；38 ℃時菌絲長勢和長速均急速下降；10 ℃時菌絲不能生長。綜上表明，該菌株為耐高溫菌株，適宜生長溫度范圍28～35 ℃，最適生長溫度為30 ℃。

表1 不同溫度下白雪菇菌絲的生長速度與長勢

注：“+”越多，表示菌絲長勢越好，以下各表同。

2.2 不同pH下白雪菇菌絲的生長情況

白雪菇菌絲在pH 3.5～9.0范圍內(nèi)均可生長（表2），其中pH 3.5～5.0范圍內(nèi)，隨pH的上升，菌絲長速加快，長勢趨好，pH 5時達到最高；此后，隨著pH的上升，菌絲生長速度減慢，長勢趨一致；pH 3時菌絲不能生長。表明該菌株喜好偏酸性，適宜pH范圍為4.5～6.0，最適pH為5。

表2 不同pH培養(yǎng)基白雪菇菌絲生長速度與長勢

2.3 不同濕度培養(yǎng)基白雪菇菌絲的生長情況

培養(yǎng)基含水量對菌絲生長速度有明顯影響，在含水量45%～55%范圍內(nèi)，隨著培養(yǎng)料含水量的升高，菌絲長速和長勢均趨好，55%時達到最高；其后隨著含水量的升高，菌絲長勢和長速均降低。表明，培養(yǎng)料最適含水量為55%。

2.4 不同碳源培養(yǎng)基白雪菇菌絲的生長情況

白雪菇菌絲可以利用多種碳源，但不同碳源對菌絲生長的影響有顯著差異（表4）。以淀粉為碳源的菌絲生長速度最快，顯著高于其他處理；但菌絲長勢較弱。其次是蔗糖和葡萄糖，以葡萄糖為碳源的菌絲長勢最好。以果糖為碳源的菌絲生長速度和長勢中等。對照中菌絲雖能生長，且長速與果糖無明顯差異，甚至比以麥芽糖和乳糖為碳源的菌絲長速快，但長勢最弱。以麥芽糖和乳糖為碳源菌絲長勢較弱，長速較慢，其中乳糖的長速尤慢，顯著或極顯著低于其他處理。綜上結(jié)果，葡萄糖是該菌株菌絲生長的最適碳源，蔗糖次之。

表3 不同培養(yǎng)料含水量的白雪菇菌絲的生長速度與長勢

表4 不同碳源培養(yǎng)基白雪菇菌絲的生長速度與長勢

2.5 不同氮源培養(yǎng)基白雪菇菌絲的生長情況

以蛋白胨為氮源的培養(yǎng)基菌絲生長速度最快，日均生長量達3.34 mm；其次為氯化銨，但兩者的長勢均較弱。以黃豆粉和麩皮為氮源，菌絲生長快且旺盛，其生長速度與蛋白胨、氯化銨沒有顯著差異。以硫酸銨、硝酸銨為氮源，菌絲長勢和長速一致，表現(xiàn)均較弱、較慢。牛肉膏在所有添加氮源中長速最慢，酵母膏次之。對照雖然能生長，但菌絲非常弱，長速也最慢。綜上結(jié)果，黃豆粉、麩皮等有機氮是培養(yǎng)該菌株較理想的氮源。

表5 不同氮源培養(yǎng)基白雪菇菌絲生長速度與長勢

3 結(jié) 論

本試驗表明，白雪菇屬耐高溫品種，適宜生長溫度范圍28～35 ℃，最適生長溫度為30 ℃；喜酸性，最適pH為5；培養(yǎng)基含水量為55%時菌絲長勢好、長速快。

白雪菇能利用多種碳源、氮源。以淀粉為碳源菌絲長速最快但長勢較弱；而以葡萄糖為碳源的菌絲生長最好，為最佳碳源。以黃豆粉和麩皮為氮源菌絲長勢最好，且生長速度較快，是理想的氮源。

白雪菇是最近分離馴化成功的一種新菌株，我們還對其開展了形態(tài)學觀察、馴化栽培、營養(yǎng)分析，以及毒理等方面的研究，將另文逐一報道。

參考文獻：

[1] 何介元. 肥腳環(huán)柄菇人工栽培初探[J]. 微生物學通報, 1996, 23(2): 67-69.

Research on the culture characteristics of

He Huanqing1Xiao Zitian1Liu Ming1Pan Xinhua2

（1.Vegetables Research Institute Guangdong Academy of Agriculture Sciences, Key laboratory of Guangdong Vegetables Newly Technology, Guangzhou, Guangdong 510640, China; 2.Jiang Xi Xian Ke Li Biotechnology Limited Company , Jiu Jiang, Jiang Xi 332100,China）

The culture conditions of the newly strain Baixue mushroom (), such as the growth rate and the growth vigor were studied , The optimal temperature ,moisture and pH for the mushroom growth are 30℃, 55%, and 5 respectively , the best carbon source for the mycelium growth is glucose, and the best nitrogen source are soybean flour, bran.

; culture characteristics; temperature; moisture; carbon source; nitrogen source

S646

A

2095-0934（2016）05-316-04

廣東省科技廳農(nóng)業(yè)攻關項目（2013B020406008）；廣東省公益研究與能力建設項目（2015A020210076）

何煥清（1964—），男，研究員，從事食藥用菌技術(shù)研究與推廣；E-mail：hhq407@sina.com