規(guī)?；叼B(yǎng)肉鴨禽流感疫苗H5N1（Re-6）株免疫程序的研究與推廣

梁麗娟，李　丹，李　芳，經孝紅，吳雙燕，蘇益瓊，余　波，韋玉慶

（1.廣西鹿寨縣動物疫病預防控制中心，廣西 鹿寨 545600；2.柳州市動物疫病預防控制中心，廣西 柳州 545006；3.廣西鹿寨縣畜牧工作站，廣西 鹿寨 545600）

規(guī)模化旱養(yǎng)肉鴨禽流感疫苗H5N1（Re-6）株免疫程序的研究與推廣

梁麗娟1，李丹2，李芳1，經孝紅3，吳雙燕1，蘇益瓊1，余波1，韋玉慶1

（1.廣西鹿寨縣動物疫病預防控制中心，廣西 鹿寨 545600；2.柳州市動物疫病預防控制中心，廣西 柳州 545006；3.廣西鹿寨縣畜牧工作站，廣西 鹿寨 545600）

高致病性禽流感是由正黏病毒科、流感病毒屬A型H5或H7等亞型流感病毒引起的，以禽類為主的高度接觸性傳染病，近年來在全球范圍內已呈多發(fā)態(tài)勢，造成了相當大的經濟損失和政治影響，并直接威脅到人類生命及公共衛(wèi)生安全。2014年1-4月，筆者在當?shù)?個規(guī)?；叼B(yǎng)肉鴨場隨機抽檢110份血清進行監(jiān)測，高致病性禽流感H5N1（Re-6株）疫苗免疫抗體合格率只有22.7%。為有效提高免疫抗體水平，并對旱養(yǎng)肉鴨免疫抗體水平偏低的原因進行了調查，在規(guī)?；?、產業(yè)化的生產鏈中，不斷地進行大田免疫試驗，根據(jù)免疫抗體水平科學地、適時地指導防疫工作，從中篩選出最適合本地的、最優(yōu)化的免疫程序，現(xiàn)將研究結果報道如下。

1　試驗材料

1.1疫苗重組禽流感病毒滅活疫苗（H5N1亞型，Re-6株），通過政府采購，生產企業(yè)和批號分別為：廣東永順生物制藥股份有限公司，2014016/17。

1.2試驗地點及動物廣西鹿寨縣養(yǎng)殖龍頭企業(yè)：A公司、B公司旗下養(yǎng)殖戶中的李某、李有某等50多個鴨場。

1.3診斷試劑禽流感病毒H5亞型HI試驗抗原和禽流感病毒H5亞型陽性血清通過政府采購，生產廠家為哈爾濱維科生物技術開發(fā)公司?？乖枮椋?013004，陽性血清批號為2014001。

2　試驗方法及步驟

2.1試驗設計對A、B兩家公司的雛鴨進行母源抗體監(jiān)測；對B公司原免疫程序進行免疫抗體與母源抗體對比監(jiān)測；根據(jù)母源抗體水平做多個單次或二次免疫試驗。

2.2試驗步驟

2.2.1免疫試驗時間旱養(yǎng)肉鴨平均出欄為45 d，疫苗停藥期為28 d，即17日齡內要完成末次免疫。

2.2.2免疫方法及劑量2～3周齡的雛鴨首免為0.5 mL/羽，二免為0.8 mL/羽，頸部皮下注射。

2.2.3肉鴨血清的采集肉鴨免疫3周后或出欄時，于鴨翅下靜脈采血2.5～3 mL/羽，每群鴨隨機采集10～20羽。送檢的血清要求不溶血，并記錄好場別、日齡、養(yǎng)殖規(guī)模、免疫時間和次數(shù)，所有血清均置于-20℃保存，統(tǒng)一檢測。

2.2.4血凝試驗（HA）和血凝抑制試驗（HI） 參照《高致病性禽流感診斷技術》（GB/T18936-2003）［1］進行。

3　試驗設計及試驗結果與分析

試驗結果見表1、2、3、4、5?？贵w檢測結果都以HI滴度≧4log2為合格。

3.1表1為兩家公司的母源抗體檢測情況，A、B公司分別于7日齡、9日齡免疫當天未注射疫苗時對雛鴨進行心臟采血檢測。

表1　兩家公司的母源抗體檢測情況

結果表明，兩家公司雛鴨的母源抗體水平相差較大，其各自的種鴨免疫程序不一致，經調查A公司種鴨產蛋前最后1次免疫H5亞型禽流感疫苗是125日、產蛋后于308日齡補免疫1次，而B公司則在110日齡最后1次免疫。一般種鴨在180日齡開始產蛋，至200日齡產蛋率達30%，220日齡達產蛋高峰期，按H5亞型禽流感疫苗說明，免疫有效期為4個月，其鴨苗的母源抗體水平與所檢測2家公司的結果相符，即A公司雛鴨母源抗體水平高，B公司雛鴨母源抗體水平很低。

3.2表2為A公司7日齡雛鴨1次免疫后至14日齡第二次免疫前的雛鴨免疫抗體水平及從未免疫雛鴨的母源抗體水平對照。

表2　A公司的首次免疫抗體與母源抗體檢測情況對照

結果證實筆者在平時免疫監(jiān)測時，A公司高致病性禽流感H5N1（Re-6株）疫苗免疫抗體水平只有22.7%左右的原因，因其當時的免疫程序只在6～7日齡做1次免疫，而雛鴨體中的母源抗體水平7日齡時高達75%，HI滴度平均值達5.08log2，因而注射疫苗會被雛鴨體內的高含量母源抗體中和［2］所致。

3.3表3為在A公司旗下不同日齡肉鴨進行免疫試驗及免疫檢測結果。表4為A公司部分免疫試驗組之間統(tǒng)計學分析（卡方檢驗）結果。

表3　A公司旗下雛鴨的免疫試驗及免疫抗體檢測情況

從試驗數(shù)據(jù)中分析，以9、17日齡免疫組最佳，其免疫抗體平均水平可達94.87%，顯著高于9日齡一次免疫組和9、15日齡免疫組；9日齡以上首免，間隔1周以上二免的各組免疫效果都很好，但與9、17日齡免疫組無顯著性差異。

3.4在B公司旗下不同日齡肉鴨進行免疫試驗及免疫檢測結果見表5。

結果雛鴨母源抗體極低的B公司，9日齡一次免疫，其群體免疫抗體水平未達70%以上，而以9、17日齡免疫組，其群體免疫水平達92.31%。

表4　A公司部分免疫試驗組之間統(tǒng)計學分析（卡方檢驗）結果

表5　B公司旗下雛鴨的免疫試驗及免疫抗體檢測情況

4　討論與防控建議

4.1從免疫試驗數(shù)據(jù)綜合分析，認為鹿寨縣本地的旱養(yǎng)肉鴨無論有無母源抗體的影響，以9日齡初次免疫，間隔1周以上二次免疫，其群體的HI效價平均值達4log2以上，免疫抗體水平都達到70%以上的農業(yè)部標準，可在全縣推廣應用。

4.2從試驗中，1周齡以下首免，2周齡以內二免的群體免疫抗體水平都不達標的原因尚需進一步探討，其中高母源抗體水平可干擾幼齡雛鴨疫苗免疫效果，是造成免疫失敗的原因之一［3］；其次雛鴨免疫器官發(fā)育未完善也是造成免疫失敗的因素之一。

4.3雛鴨在9、17日齡免疫，其免疫抗體水平高，免疫效果好，與雛鴨體內母源抗體的消長相關［4-5］，試驗檢測4家在9日齡時平均母源抗體在55.1%，在14日齡時為29.41%；同時疫苗免疫產生抗體有一定的誘導期，一般菌苗抗原在5～7 d，病毒苗抗原在3～4 d，毒素苗抗原在2～3周，而機體連續(xù)多次受同一疫苗抗原刺激可不斷產生再次免疫應答反應，而且有免疫記憶力，產生堅強的免疫力，且持續(xù)時間長［6］。

4.4在實際生產中，母源抗體水平低的雛鴨受禽流感病毒的威脅很大，而試驗中的B公司因其在1日齡免疫鴨肝疫苗，5日齡免疫漿膜炎疫苗，9日齡免疫禽流感H5亞型疫苗，若按疫苗說明，禽流感免疫兩周后產生免疫力，那么雛鴨存在23 d的免疫空白期，存在疫情的風險很大，建議種鴨于開產前加強免疫，以后根據(jù)免疫抗體檢測結果，每隔4～6個月用疫苗免疫一次，使雛鴨獲得一定的母源抗體，可有效保護雛鴨群發(fā)生疫情。

志謝：本文的撰寫得到廣西動物疫病預防控制中心鄭敏博士的悉心指導。

［1］國家標準化管理委員會.GB/T18936-2003《高致病性禽流感診斷技術》［S］.北京：中國標準出版社，2003.

［2］張評滸，唐應華，劉曉文，等.不同NA亞型H5禽流感疫苗在鴨群的免疫效力及母源抗體對免疫效力的影響［J］.中國家禽，2005（20）：13-16.

［3］［6］楊漢春.《動物免疫學》［M］.2版.北京：中國農業(yè)大學出版社，2003：238、240.

［4］董海嵐，惠煜，牛萍，等.櫻桃谷肉鴨禽流感抗體消長規(guī)律的試驗［J］.中國獸醫(yī)雜志，2009，45（5）：41.

［5］薛峰，吳圣龍，唐應華，等.不同免疫程序的雞群新城疫和禽流感抗體水平與免疫保護之間的相關性試驗［J］.中國獸醫(yī)雜志，2005，41（9）：23-25.

S858.32

B

0529-6005（2016）04-0059-02

2014-12-31

廣西鹿寨縣科技計劃課題［2014014號，鹿科計字（2014）第1號］

梁麗娟（1976-），女（壯族），獸醫(yī)師，本科，主要從事動物疫病預防控制工作，E-mail：465132221qq.com