用聚乙二醇-600（PEG-600）制作小鼠整體標本

張筱雨，陳　宇，高　瑩，徐　博，羅繼龍，白志坤

（東北農(nóng)業(yè)大學動醫(yī)學學院，黑龍江 哈爾濱 150030）

用聚乙二醇-600（PEG-600）制作小鼠整體標本

張筱雨，陳宇，高瑩，徐博，羅繼龍，白志坤

（東北農(nóng)業(yè)大學動醫(yī)學學院，黑龍江 哈爾濱 150030）

為了探索替代福爾馬林制作標本的基本方法，采用聚乙二醇（PEG）浸漬法制作經(jīng)久耐用、適于獸醫(yī)教學的解剖標本。其基本方法是先將標本在福爾馬林固定后，經(jīng)過流水沖洗，在梯度聚乙二醇-600中浸漬。通過使用這種方法制作出了小鼠整體標本（PEG浸漬的標本），可以存儲在塑料袋或箱子中，具有抵抗真菌和細菌的功效，而且不會對皮膚產(chǎn)生刺激性，已在獸醫(yī)解剖教學中成功地使用。

聚乙二醇（PEG）；標本；教學；獸醫(yī)解剖

自甲醛的發(fā)明以來，解剖標本的永久的存儲幾乎沒有什么困難，只要將標本儲存在大型儲罐內(nèi)，蓋子擰緊，避免甲醛的蒸發(fā)就可。但由于甲醛的毒性和致癌作用，在使用標本前標本必須用流水沖洗24 h，這促使研究人員不斷地嘗試其他的無副作用的替代物質(zhì)［1-2］。目前，商業(yè)化生產(chǎn)耐用的解剖教學標本的方法主要為生物塑化［3］。但由于其設備和所需藥品較為昂貴，許多解剖學教學機構(gòu)一直在尋找比生物塑化更便宜、耐用，可行、用于生產(chǎn)的解剖標本制作方法。其中的一種替代方法就是聚乙二醇（PEG）保存法，其與生物塑化標本相比因具有更容易制作又便宜。自20世紀七十年代以來，已被越來越廣泛用于制作組織切片。

現(xiàn)介紹我們使用聚乙二醇（PEG）制成的小鼠整體解剖標本的一點經(jīng)驗。

1　材料與方法

實驗動物昆明系小鼠由哈爾濱醫(yī)科大學實驗動物中心提供，經(jīng)乙醚深度麻醉致死，并向腹腔內(nèi)注射少量福爾馬林溶液后，浸泡于5%福爾馬林溶液中數(shù)天或數(shù)周。反復研究表明，福爾馬林滲入組織的速度大約是每天1 cm，以此來估計固定的持續(xù)時間約為1周。取出小鼠用流水沖洗24 h后，根據(jù)教學需求仔細解剖，并使其暴露一側(cè)腹腔器官，并對器官清空和清洗。然后將小鼠放于3%過氧化氫溶液中漂白24 h。漂白后的標本要再次用流水沖洗24 h之后，放于25%～100%梯度PEG-600（聚乙二醇-600），光復精細化工研究所，天津）中浸漬。為了達到更好的浸漬效果，可用不銹鋼吊籃將小鼠浸沒在PEG溶液中。在每種濃度中浸漬時間可以控制在7 d左右，直到100%PEG時可以延長時間。當沒有更多的水流動時，說明完成脫水。浸漬時，PEG溶液可更換數(shù)次。在完全飽和后，取出容器中的標本，并小心地用吸水紙擦去過量的PEG溶液，將其放置在濾紙上，在避光房間干燥數(shù)天。

2　結(jié)果

圖1　小鼠整體PEG浸漬標本

通過使用聚乙二醇-600浸漬法，高品質(zhì)的小鼠整體標本被制作出來，如圖1所示。小鼠標本毛皮保持著原有的光滑色澤，內(nèi)臟清晰。干燥后，標本變軟。如此浸漬的樣本外觀類似于它們的天然狀態(tài)，栩栩如生，適合在教學過程中使用。經(jīng)過長時間放置并未發(fā)現(xiàn)腐敗和蟲蛀的現(xiàn)象，因而無需額外的保養(yǎng)。這種方法的另一大優(yōu)點是處理時間較短，標本最快可以在2個月內(nèi)完成。生物塑化標本的制作時間，則較長。PEG標本保存在一個開放的環(huán)境中，一段時間后他們就會吸濕，所以它們不可能完全干燥。建議制作好的標本放在塑料袋中儲存最合適，在標本用于教學后，應盡快重新包裝。

3　討論

動物尸體在動物醫(yī)學及人醫(yī)教學中有著不可替代的作用，但教學人員和學生一直受到防腐劑甲醛的侵害，因此找到好的可替代的方法是人們長期的期望［4-5］。PEG浸漬標本和生物塑化標本是保存標本的兩種不同方法，兩者有區(qū)別又有共同之處。這兩種技術之間的差別是由不同材料確定的。PEG是用醇（聚乙二醇），而生物塑化則用硅膠；PEG浸漬過程中，醇不會發(fā)生聚合反應，因此標本是軟的，而硅膠會發(fā)生聚合反應，在塑化中會變硬；使用哪種方法很大程度上決定于標本制作的目的。在一般情況下，當需要比較靈活或制備可以擴大的中空器官時，可以使用PEG，例如PEG浸漬關節(jié)標本，使其靈活，可移動。同時，出于教學目的以及更好表現(xiàn)鄰近結(jié)構(gòu)，可以用水彩或油畫顏料上色。PEG浸漬的中空臟器可以被打開，這樣你就可以看一下里面的成分，尤其對于展示狗、貓、豬或馬的腹腔的黏膜的不同外觀特別有用。此外，由于PEG-浸漬樣品可切片，可以用于組織學研究觀察［6］。如果在浸漬前，做各種不同的預處理，可以使樣品滿足各種使用目的。例如，血管和淋巴管可填充有顏色的樹脂，使血管和神經(jīng)的分布可以清晰可見。不同的體腔可以注入不同顏色，以更好的展示其分布方向。如果PEG浸漬標本被妥善處理的話，是可能長期使用的，因為它們能抵抗真菌和細菌的能力。PEG浸漬標本在外觀和形狀上與生物塑化標本相同，但PEG技術比生物塑化標本便宜得多，并且需要較少的技術設備。一瓶為500 mL PEG-600成本僅為32元，而且PEG液體可循環(huán)使用。要想回收PEG的話，只需要將混合物加熱到90℃，排出水蒸汽即可。

4　小結(jié)

PEG和生物塑化方法都有自己的優(yōu)點和缺點。相較于生物塑化技術，PEG-浸漬更有資金優(yōu)勢，標本有更大的靈活性；更為有利的是PEG浸漬的標本沒有毒性［7-8］，并具有較高的皮膚親和性［9］。因此PEG浸漬標本制作技術是一種非常有用的保存動物尸體和器官的方法，使用可達數(shù)年。

志謝：本實驗是在小組成員共同配合下完成的。東北農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院家畜解剖學教研室梁建廣高級實驗師給予幫助。

［1］李紅霞，黃厚今.甲醛的毒性研究進展［J］.國外醫(yī)學（衛(wèi)生學分冊），2006，02：114-117.

［2］謝穎.甲醛的生殖毒性［J］.工業(yè)衛(wèi)生與職業(yè)病，2002，02：118-120.

［3］張紹祥，劉正津，何光箎.生物塑化技術（Plastination）［J］.中國臨床解剖學雜志，1996，01：67-70.

［4］白志坤.尸體解剖作為教學方法：過去、現(xiàn)在和將來［J］.四川解剖學雜志，2008，02：44-46.

［5］白志坤，曹允考，羅繼龍，等.學生期望的家畜解剖學教學方法［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2010，15：171-172.

［6］朱洪亮，劉向東，盧永根，等.研究植物胚囊中微管的PEG切片法的改進［J］.華南農(nóng)業(yè)大學學報，2001，04：52-54.

［7］張偉，劉琳婕，何仲貴.聚乙二醇在藥物制劑中的應用［J］.中國藥劑學雜志，2007，02：67-74.

［8］李愛貴，鄧聯(lián)東，董岸杰.聚乙二醇在新型藥物制劑中的應用［J］.高分子通報，2004，04：96-101.

［9］呂邵娃，葉揚帆，趙權濤，等.新型聚乙二醇穴位藥貼的制備工藝研究［J］.哈爾濱商業(yè)大學學報（自然科學版），2012，05：520-522.

S859.79+7

A

0529-6005（2016）04-0042-02

2014-10-26

東北農(nóng)業(yè)大學實驗中心開放項目（06600023c）；黑龍江省高等教育學會規(guī)劃課題（14G043）

張筱雨（1993-），女，本科生，就讀于動物醫(yī)學專業(yè)，E-mail：raining931014@hotmail.com

陳宇（1992-），女，本科生，就讀于動物醫(yī)學專業(yè)，E-mail：1373768879@qq.com

陳宇與張筱雨對本文具有同等貢獻

白志坤，E-mail：baizhikun@neau.edu.cn