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    “制作并觀察植物細(xì)胞有絲分裂的臨時(shí)裝片”實(shí)驗(yàn)的改進(jìn)建議

    2016-11-14 06:56:42陳一波
    讀寫算·素質(zhì)教育論壇 2016年22期
    關(guān)鍵詞:實(shí)驗(yàn)改進(jìn)

    陳一波

    摘 要 對浙科版普通高中生物必修1“制作并觀察植物細(xì)胞有絲分裂的臨時(shí)裝片”實(shí)驗(yàn)的材料、實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行如下改進(jìn):實(shí)驗(yàn)材料由洋蔥根尖改為蠶豆側(cè)根;染色試劑由龍膽紫溶液改為改良的苯酚品紅溶液;實(shí)驗(yàn)步驟改為“取整條側(cè)根—解離—漂洗—染色—洗去浮色—獲取根尖—制作裝片”。

    關(guān)鍵詞 有絲分裂 實(shí)驗(yàn)改進(jìn)

    中圖分類號:G633.91 文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A 文章編號:1002-7661(2016)22-0044-02

    一、背景與意義

    “制作并觀察植物細(xì)胞有絲分裂的臨時(shí)裝片”是浙科版普通高中《生物學(xué)·必修1·分子與細(xì)胞》中的一個(gè)實(shí)驗(yàn)。教材里以洋蔥為實(shí)驗(yàn)材料,實(shí)驗(yàn)的成功率不是很高。究其原因,除操作技術(shù)掌握不當(dāng)外,用于實(shí)驗(yàn)的材料——洋蔥存在的不足可能是關(guān)鍵之處。目前出現(xiàn)最多的是采用大蒜作為實(shí)驗(yàn)材料,因?yàn)榇笏馊〔姆奖?,?jīng)濟(jì)實(shí)惠,而且發(fā)根率高,實(shí)驗(yàn)效果好。但由于大蒜在水培時(shí)會(huì)分泌抑制根生長的物質(zhì)使水體發(fā)臭繼而爛根,在培養(yǎng)時(shí)需要每天更換清水,這無疑加大了實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備的工作量。此外,大蒜根尖分生區(qū)細(xì)胞有絲分裂指數(shù)與根長有關(guān),而且蒜瓣發(fā)根并不同步,因此在取材時(shí)會(huì)有大量的須根因長度不適合而被浪費(fèi)丟棄。

    大多數(shù)根尖作有絲分裂實(shí)驗(yàn)的材料,雖均可以找到有絲分裂期的細(xì)胞,但大多存在這樣或那樣的不足,有的細(xì)胞染色體數(shù)目太多(如小麥等),染色體堆積在一起,不易看清;相比之下,蠶豆側(cè)根作實(shí)驗(yàn)材料具有根尖數(shù)目多、細(xì)胞內(nèi)染色體數(shù)目較少而體積較大等優(yōu)點(diǎn),故用蠶豆側(cè)根根尖作為有絲分裂的實(shí)驗(yàn)材料可以取得較理想的實(shí)驗(yàn)效果,尤其適合學(xué)生實(shí)驗(yàn)。

    二、過程與方法

    (一)實(shí)驗(yàn)材料

    蠶豆取自于農(nóng)家自備的蠶豆種。

    (二)實(shí)驗(yàn)方法

    1.根尖的培養(yǎng)

    選擇飽滿、大小均勻、無損傷的蠶豆種子,自來水洗凈后用0.5%的NaClO消毒30min。蒸餾水沖洗數(shù)次,用蒸餾水浸種。一段時(shí)間后,播種在濕潤的鋸末基質(zhì)中。在培養(yǎng)箱中無光培養(yǎng)(24€?.5℃),每天早晚各灑水一次(溫水效果更佳)。待主根根尖長出3~4cm時(shí),取出種子用快刀迅速切去根尖分生區(qū),然后重新埋好。一段時(shí)間后,主根成熟區(qū)四周會(huì)生出許多側(cè)根。這樣,每粒種子在播種5~7天后可獲得20多個(gè)側(cè)根。期間需注意經(jīng)常灑水保持培養(yǎng)基濕潤。冬季注意保暖,溫度控制在20~25℃左右。

    2.制作臨時(shí)裝片

    在制作裝片的過程中,參考林亮老師的做法,對操作步驟進(jìn)行了略微的變動(dòng),步驟如下“取整條側(cè)根—解離—漂洗—染色—洗去浮色—獲取根尖—制作裝片”。

    (1)取材

    取根尖這環(huán)節(jié),教材將根尖剪取2~3mm,在隨后的幾個(gè)步驟中都用鑷子取放,由于根尖太短、太脆,給操作帶來很大的不便。所以我直接拔取蠶豆的整條側(cè)根,由于整條側(cè)根(含根尖)較長,便于操作。用刀片將根尖端縱剖2~3次,使根尖內(nèi)部組織在解離時(shí)能與解離液充分接觸。此操作要快速進(jìn)行,以防材料變干燥。

    (2)解離

    將整條側(cè)根立即投入盛有1:1濃鹽酸與95%酒精的固定離析液中,迅速殺死細(xì)胞并使細(xì)胞保持于分裂狀態(tài),同時(shí)溶解了細(xì)胞間的胞間層,在壓片時(shí)細(xì)胞易于分散。5~7分鐘后,根尖完全酥軟時(shí)取出。氣溫高時(shí),解離時(shí)間要稍短些。此操作注意嚴(yán)格控制時(shí)間,如果解離過久,材料完全離散就無法進(jìn)行清洗等操作;若解離不夠充分,則壓片時(shí)材料細(xì)胞堆積在一起,不易分散,無法觀察。此時(shí),仔細(xì)觀察可發(fā)現(xiàn)解離完全的根尖分生區(qū)會(huì)呈現(xiàn)出與伸長區(qū)不一樣的乳白色。這時(shí)候的根尖分生區(qū)十分脆弱,可用鑷子捏住根的伸長區(qū),取出側(cè)根進(jìn)行下一步。

    (3)漂洗

    可用鑷子捏住根的伸長區(qū),將整條側(cè)根取出,立即投入清水漂洗2~3次,每次1-2分鐘。此操作直接影響下一步染色的效果。

    (4)染色

    將側(cè)根的根尖用蒸餾水沖洗后,然后將根尖置于染色板上,用改良的苯酚品紅染色2-3分鐘。

    改良的苯酚品紅液配方如下:

    母液A:稱取3g堿性品紅,溶解于100ml的70%酒精中(此液可長期保存);母液B:取母液A10ml,加入90ml的5%苯酚水溶液(2周內(nèi)使用);

    苯酚品紅染色液:取母液B45ml,加入6ml冰醋酸和6ml37%的甲醛;

    改良的苯酚品紅染色液:取苯酚品紅染色液2~10ml,加入90~98ml45%的醋酸和1.8g山梨醇。放置兩周后,效果更佳。

    (5)洗去浮色

    教材在敘述臨時(shí)裝片制作時(shí),并未詳細(xì)介紹洗去浮色這一步驟。其實(shí)這一步十分關(guān)鍵,只有洗去了浮色,才能在顯微鏡下看的清晰。所以我的做法是:一只手拿鑷子夾著側(cè)根的伸長區(qū),另一只手用清水對著根尖分生區(qū)輕輕沖洗1-2次。

    (6)制片并鏡檢

    最后切取整條側(cè)根上已經(jīng)染色過的根尖2~3mm于載玻片,滴加一滴清水,蓋上蓋玻片。用鑷子輕輕敲打蓋玻片,讓根尖細(xì)胞均勻分散而又不破裂。

    三、結(jié)果與討論

    有絲分裂是一個(gè)連續(xù)的過程,根據(jù)不同分裂階段的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)可以把有絲分裂過程分成4個(gè)時(shí)期,即:前期、中期、后期和末期。有絲分裂的中期是觀察染色體形態(tài)的最佳時(shí)期。這一時(shí)期的染色體是由兩條染色單體組成,在每條染色體的著絲點(diǎn)部位有紡錘絲相連,這個(gè)區(qū)域一般染不上顏色或是縊縮變細(xì),叫做主縊痕。蠶豆根尖處于分裂相的細(xì)胞多,細(xì)胞較大,染色體清晰,用高倍鏡觀察還可以計(jì)數(shù)(2n=12),實(shí)驗(yàn)效果很好。

    我認(rèn)為實(shí)驗(yàn)的成功幾個(gè)關(guān)鍵之處。在于:第一,選擇蠶豆的側(cè)根而非主根。我們用染色液處理主根,結(jié)果顯示主根分生細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)著色顆粒多,導(dǎo)致背景著色深,難以觀察到染色體形態(tài),實(shí)驗(yàn)效果較差。而其側(cè)根染色后,背景著色均較淺,染色體形態(tài)清晰。主根觀察效果差的原因可能是取材部位或染色液濃度不當(dāng),或是細(xì)胞質(zhì)成分差異所致。其真實(shí)原因,有待進(jìn)一步研究。第二,改用改良苯酚品紅染色經(jīng)比較研究發(fā)現(xiàn),用改良苯酚品紅染色較傳統(tǒng)教科書上介紹的用醋酸洋紅或龍膽紫染色理想。醋酸洋紅染色體著色效率不高,且背景著色較深;而龍膽紫著色力太強(qiáng),操作時(shí)極易染色過度,使整個(gè)細(xì)胞均染成深紫色,無法觀察,而用改良苯酚品紅染色效果很好,細(xì)胞核和染色體均被染成鮮艷的紅紫色,而細(xì)胞質(zhì)無色或只有淡粉紅色,故背景清晰。

    參考文獻(xiàn):

    [1]張?jiān)?,林?觀察根尖分生組織細(xì)胞有絲分裂的好材料——紅蔥[J].生物學(xué)通報(bào),2013,(2).

    [2]林亮,上官興星.“觀察根尖分生組織細(xì)胞的有絲分裂”實(shí)驗(yàn)方法的改進(jìn)[J].中學(xué)生物教學(xué),2012,(07).

    [3]劉昌平.植物細(xì)胞有絲分裂實(shí)驗(yàn)材料的選擇及其實(shí)驗(yàn)操作[J].皖西學(xué)院學(xué)報(bào),2002,(04).

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