• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    葉黃素對母鼠乳腺分泌IgA的促進作用

    2016-11-12 06:21:08崔煥忠楊雨江蘭海楠吉林農業(yè)大學動物科學技術學院吉林長春130118
    食品科學 2016年11期
    關鍵詞:母鼠葉黃素乳腺

    崔煥忠,張 輝,楊雨江,尹 劍,蘭海楠,鄭 鑫(吉林農業(yè)大學動物科學技術學院,吉林 長春 130118)

    葉黃素對母鼠乳腺分泌IgA的促進作用

    崔煥忠,張 輝,楊雨江,尹 劍,蘭海楠,鄭 鑫*
    (吉林農業(yè)大學動物科學技術學院,吉林 長春 130118)

    為明確葉黃素對母鼠乳腺分泌IgA能力的影響,本實驗對妊娠母鼠添加飼喂葉黃素,檢測母鼠血清中IgG、IgA和IgM含量變化,母鼠乳腺組織中IgA mRNA表達量和IgA抗體分泌細胞數量變化,以及仔鼠胃內容物中IgA濃度變化。結果表明:在妊娠21 d和分娩后7 d時,實驗組血清中IgG和IgA濃度顯著高于正常對照組(P<0.05),IgM含量雖有升高,與正常對照組相比,無顯著性差異(P>0.05);乳腺組織中IgA mRNA表達量無顯著變化(P>0.05);分娩后14 d IgA抗體分泌細胞數量顯著增加(P<0.05);仔鼠胃內容物中IgA含量極顯著高于對照組(P<0.01)。說明給妊娠母鼠添加飼喂葉黃素可以增強乳腺分泌IgA的能力。

    母鼠;葉黃素;乳腺;IgA

    葉黃素(lutein)屬于類胡蘿卜素(carotenoid),在蔬菜、水果、花卉和某些藻類生物中廣泛存在[1]。天然葉黃素具有獨特的生物學功能,目前對葉黃素的研究主要集中在抗氧化作用[2-3]、抑制腫瘤細胞增殖[4-7]、預防心血管與老年性疾病[8-10]以及對機體免疫功能的調節(jié)[11-13]。鑒于葉黃素安全無毒,已被作為食品補充劑在食品、飲料、化妝品、保健食品,甚至嬰幼兒食品中添加,研究開發(fā)以葉黃素為功能因子的功能性食品和膳食補充劑已成為食品產業(yè)中的研究熱點[6]。本實驗室前期研究表明,妊娠母鼠飼喂葉黃素,可以增強仔鼠被動免疫能力。被動免疫是新生兒能夠存活和健康生長的關鍵,而初乳和常乳是新生兒營養(yǎng)和免疫組成的來源,其中乳汁中IgA是提供新生兒消化道黏膜免疫主要免疫球蛋白。母鼠免疫水平高低直接影響新生仔鼠免疫水平,且乳腺分泌IgA能力的高低與仔鼠被動免疫密切相關,妊娠母鼠添加葉黃素提高仔鼠被動免疫水平是否是通過提高母鼠乳腺生成與分泌IgA能力來實現(xiàn)尚未見報道。本研究對妊娠母鼠添加飼喂葉黃素,檢測母鼠血清中免疫球蛋白及乳腺生成與分泌IgA水平,明確添加葉黃素對妊娠母鼠乳腺分泌IgA能力的影響,為富含葉黃素食品開發(fā)利用提供理論參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 實驗動物

    清潔級健康7~8 周齡雌性昆明鼠50 只、雄性昆明鼠25 只,體質量24~28 g,購自于吉林大學實驗動物中心,動物生產許可證號:SCXK(吉)2003-0001。

    1.1.2 材料與試劑

    葉黃素(純度為95%) 西安瑞林生物科技有限公司。

    Mouse IgA、IgG及IgM酶聯(lián)免疫吸附測定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)定量試劑盒 美國Bethyl公司;SABC three-step試劑盒 杭州博士德生物有限公司;RNAiso Plus Kit、PrimeScript RT?Reagent Kit with gDNA Eeaser(Perfect Real Time)、SYBR?Premix Ex Taq? II(Tli RNaseH Plus) 寶生物工程(大連)有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 動物分組及添加飼喂

    小鼠購買后,給予1 周的時間適應環(huán)境,飼養(yǎng)環(huán)境為無致病菌,飼養(yǎng)環(huán)境溫度為21~24 ℃,相對濕度為48%~65%。1 周后開始實驗,將2 只雌鼠和1 只雄鼠于20:00放于同一籠中飼養(yǎng),第二天8:00檢查陰道栓,選取陰道栓陽性的雌鼠32 只,隨機分為4 組,每組8 只,兩組為葉黃素添加實驗組,兩組為正常對照組。其中實驗一組用于母鼠妊娠7、14、21 d的血液樣品、母鼠分娩后7 d的血液樣品和乳腺組織樣品以及仔鼠出生7 d胃內容樣品的采集;實驗二組用于母鼠分娩后14 d血液樣品和乳腺組織樣品以及仔鼠出生14 d胃內容樣品的采集。所有實驗小鼠單籠飼養(yǎng),參照張靜等[12]飼喂小鼠葉黃素的劑量1.2 mg/(kg·d)(以體質量計,下同)以及Kim等[14]飼喂犬的劑量,從妊娠開始實驗一組和實驗二組小鼠按每千克日糧添加50 mg葉黃素進行添加飼喂實驗,正常對照組小鼠飼喂正常日糧(含有葉黃素),添加時間為從母鼠妊娠開始至實驗結束。

    1.2.2 樣品采集及處理

    1.2.2.1 母鼠血液樣品的采集

    分別于母鼠妊娠7、14、21 d、分娩后7 d和14 d時,乙醚麻醉實驗組和正常對照組各8 只母鼠,斷尾采集母鼠的血液樣品,樣品室溫放置1 h,3 000 r/min離心10 min,分離血清,分裝后,置于-20 ℃保存,用于免疫球蛋白含量的測定。

    1.2.2.2 母鼠乳腺組織樣品的采集

    分別于母鼠分娩后7 d和14 d時,乙醚麻醉實驗組和正常對照組各8 只母鼠,在完成上述血液樣品采集后,處死母鼠,采集乳腺組織,一部分乳腺組織樣品迅速用液氮凍存,用于IgA mRNA表達量的分析;另一部分乳腺組織樣品用10%福爾馬林中性固定液進行固定,用于免疫組化分析IgA抗體分泌細胞(IgA antibody-secreting cell,IgA ASC)數量。

    1.2.2.3 仔鼠胃內容物樣品的采集

    分別在仔鼠出生7 d和14 d時,每窩各取5 只仔鼠,實驗組和正常對照組各取40 只仔鼠,乙醚麻醉后處死仔鼠,采集胃內容樣品,分裝后,置于-20 ℃保存,用于IgA含量的測定。

    1.2.3 母鼠血清中免疫球蛋白含量的測定

    將血清樣品于室溫解凍,用磷酸鹽緩沖溶液(phosphate buffered saline,PBS)稀釋2 000 倍,按照Mouse IgA、IgG及IgM ELISA定量試劑盒說明書操作步驟,測定血清樣品中IgG、IgA及IgM的含量,根據樣品稀釋倍數,計算樣品中IgG、IgA及IgM的含量,分析妊娠7、14、21 d、分娩后7 d和分娩后14 d血清中免疫球蛋白含量的變化[14-15]。

    1.2.4 實時熒光定量檢測乳腺組織 IgA mRNA表達量[16]

    液氮研磨乳腺組織樣品,利用RNAiso Plus Kit提取樣品中總RNA,利用PrimeScript RT?Reagent Kit將RNA反轉錄為cDNA,按照SYBR?Premix Ex Taq? II說明書步驟進行實時熒光定量聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction,PCR),引物序列如下:IgA C段恒定區(qū):正向引物5’-TGCACAGTTACCCATCCTGA-3’,反向引物5’-GCACCAGCACTTCTTTAGGG-3’;β-actin:正向引物5’-CATCCGTAAAGACCTCTATGCCAA-3’,反向引物5’-ATGGAGCCACCGATCCACA-3’。以β-actin為內參基因,采用ΔΔCt方法分析IgA mRNA表達變化。

    1.2.5 免疫組化檢測乳腺IgA ASC數量

    乳腺組織樣品用10%福爾馬林中性固定液固定24 h后,進行脫水、透明、浸蠟處理,包埋于石蠟中,制成6 μm厚度的切片,切片經烘片、脫蠟、復水后,利用SABC three-step試劑盒進行免疫反應,顯色結束后,再進行脫水透明和封片。每只母鼠隨機選取5 個不同400×電鏡下視野,利用Image-Pro Plus 6.0軟件分析陽性細胞數量。

    1.2.6 仔鼠胃內容物中IgA含量的測定

    將胃內容物樣品于室溫解凍,用含有蛋白酶抑制劑的PBS進行200 倍稀釋,利用ELISA定量試劑盒測定樣品中IgA含量。

    1.3 統(tǒng)計分析

    2 結果與分析

    2.1 母鼠血清中免疫球蛋白的含量

    圖1 母鼠血清中IgG(a)和IgA(b)含量(n==88)Fig. 1 Serum IgG (a) and IgA (b) concentrations in maternal mice (n = 8)

    從妊娠開始至分娩后14 d,每隔7 d采血一次,利用ELISA定量試劑盒測定血清中IgG、IgA和IgM的含量,結果如圖1所示,從妊娠第7天開始,IgG和IgA含量開始升高,妊娠21 d時達到最高,妊娠21 d和分娩后7 d時均顯著高于正常對照組(P<0.05),表明添加飼喂葉黃素可以增加母鼠血清中IgG和IgA水平;血清中IgM的含量與正常對照組相比,無顯著性差異(圖中未顯示)。

    2.2 母鼠乳腺組織中IgA mRNA表達量

    圖2 母鼠乳腺中IgA mRNA表達量(n==88)Fig. 2 IgA mRNA expression in maternal mammary glands (n = 8)

    根據IgA C區(qū)恒定區(qū)序列設計1 對引物,實時熒光定量PCR檢測IgA mRNA表達量,結果如圖2所示,在分娩后7 d和14 d時,實驗組母鼠乳腺中IgA mRNA表達量與正常對照組相比均沒有顯著變化(P>0.05)(圖中未顯示)。

    2.3 母鼠乳腺組織中IgA ASC數量檢測結果

    表1 母鼠乳腺中IgA ASC數(x =8)Table 1 Number of IgA ASC in maternal mammary glands (s, = 8)

    表1 母鼠乳腺中IgA ASC數(x =8)Table 1 Number of IgA ASC in maternal mammary glands (s, = 8)

    注:*. 與正常對照組相比,差異顯著(P<0.05)。

    組別IgA ASC數量/(個/10 000 μm2)分娩后7 d 分娩后14 d正常對照組 6.3±0.48.8±0.6實驗組 6.7±0.511.9±0.9*

    免疫組化方法檢測IgA ASC數量,由表1可知,實驗組母鼠分娩后7 d和14 d IgA ASC數量均增加,并于分娩后14 d顯著高于正常對照組(P<0.05)。

    2.4 仔鼠胃內容物中的IgA含量

    表2 仔鼠胃內容物中IgA含量測定結果(±s,n==4400)Table 2 IgA content in stomach contents of neonatal mice (, n = 40)

    表2 仔鼠胃內容物中IgA含量測定結果(±s,n==4400)Table 2 IgA content in stomach contents of neonatal mice (, n = 40)

    注:**. 與正常對照組相比,差異極顯著(P<0.01)。

    組別IgA含量/(μg/g)分娩后7 d分娩后14 d正常對照組14.1±3.141.9±4.5實驗組26.8±3.7**71.2±8.6**

    檢測出生仔鼠胃內容物IgA含量,結果如表2所示,實驗組仔鼠在分娩后7 d和14 d胃內容物中IgA含量均極顯著高于正常對照組(P<0.01)。

    3 結論與討論

    在化妝品、飲料和食品行業(yè)中作為食品添加劑和保健食品原料被廣泛使用的葉黃素,其在提高機體免疫能力方面的作用越來越被重視。研究表明,給禽類添加飼喂葉黃素,不僅可以有效阻止自由基對胚胎的過氧化損傷[17-18],還可提高幼雛血清抗氧化水平[19]。種蛋中葉黃素含量高,孵化后其子代具有良好的淋巴細胞合成能力和細胞免疫能力。給雌鵪鶉及子代鵪鶉飼料中添加葉黃素,可以顯著提高卵黃中IgG水平,子代鵪鶉血清IgG的含量與葉黃素的添加量成正比,高劑量葉黃素可顯著提高1 日齡子鵪鶉血清中IgG水平[20]。

    高品質乳汁對新生兒獲得最佳營養(yǎng)和被動免疫至關重要,IgA是乳汁中最主要的一種免疫球蛋白,可為新生兒提供保護對抗致病微生物抗原[21-22]。本研究開展了對妊娠母鼠添加飼喂葉黃素,檢測乳腺分泌IgA的能力,結果表明,添加飼喂葉黃素可以顯著增加母鼠血清中IgG和IgA含量,乳汁中和黏膜分泌物中的IgA可能來自于血清中IgA[23],因此血清中IgA含量的增加有助于向乳汁中轉移。母鼠添加飼喂葉黃素,雖然乳腺組織中的IgA mRNA表達量沒有顯著變化,但乳腺中IgA ASC數量顯著增 加,表明乳腺分泌IgA的能力增強。分娩后14 d,仔鼠胃內容物中IgA含量升高極顯著,也反映出添加葉黃素可有效增加母鼠乳汁中IgA的含量,這與β-胡蘿卜素營養(yǎng)作用類似[24-25]。綜上,妊娠母鼠添加飼喂葉黃素,可有效增加乳腺分泌IgA的能力,有助于增強仔鼠被動免疫能力。因此,葉黃素作為保健食品原料或食品添加劑,可能提高母體乳汁中IgA的含量,提高新生兒被動免疫能力,促進人類健康。

    [1] 惠伯棣, 裴凌鵬. 類胡蘿卜素化學與生物化學[M]. 北京: 中國輕工業(yè)出版社, 2005: 121-138.

    [2] ZANFINI A, CORBINI G, ROS C L, et al. Antioxidant activity of tomato lipophilic extracts and interactions between carotenoids and α-tocopherol in synthetic mixtures[J]. LWT-Food Science and Technology, 2010, 43(1): 67-72. DOI:10.1016/j.lwt.2009.06.011.

    [3] KIM Y S, PARK S J, CHO Y H, et al. Effects of combined treatment of high hydrostatic pressure and mild heat on the quality of carrot juice[J]. Journal of Food Science, 2011, 66(9): 1355-1360. DOI:10.1111/j.1365-2621.2001.tb15214.x.

    [4] LO H M, CHEN C L, YANG C M, et al. The carotenoid lutein enhances matrix metal oproteinase-9 production and phagocytosis through intracellular ROS generation and ERK1/2, p38 MAPK, and RARβ activation in murine macrophages[J]. Journal of Leukocyte Biology, 2013, 93(5): 723-735. DOI:10.1189/jlb.0512238.

    [5] LEONCINI E, EDEFONTI V, HASHIBE M, et al. Carotenoid intake and head and neck cancer: a pooled analysis in the International Head and Neck Cancer Epidemiology Consortium[J]. European Journal of Epidemiology, 2015: 1-15 (First online). DOI:10.1007/s10654-015-0036-3.

    [6] 孫震, 姚惠源. 葉黃素玉米黃素分子結構修飾對抑制腫瘤細胞增殖活性的影響[J]. 食品科學, 2007, 28(4): 296-301.

    [7] ZHANG Y Y, LU L, ABLIZ G, et al. Serum carotenoid, retinol and tocopherol concentrations and risk of cervical cancer among Chinese women[J]. Asian Pacifi c Journal of Cancer Prevention, 2015, 16(7): 2981-2986. DOI:10.7314/APJCP.2015.16.7.2981.

    [8] SEMBA R D, LAURETANI F, FERRUCCI L. Carotenoids as protection against sarcopenia in older adults[J]. Archives of Biochemistry and Biophysics, 2007, 458(2): 141-145. DOI:10.1016/ j.abb.2006.11.025.

    [9] WU J, CHO E, WILLETT W C, et al. Intakes of lutein, zeaxanthin, and other carotenoids and age-related macular degeneration during 2 decades of prospective follow-up[J]. JAMA Ophthalmol, 2015, 133(12): 1415-1424. DOI:10.1001/jamaophthalmol.2015.3590.

    [10] ARUNA G, BASKARAN V. Comparative study on the levels of carotenoids lutein, zeaxanthin and β-carotene in Indian spices of nutritional and medicinal importance[J]. Food Chemistry, 2010, 123(2): 404-409. DOI:10.1016/j.foodchem.2010.04.056.

    [11] LO H M, WANG S W, CHEN C L, et al. Effects of all-trans retinoic acid, retinol, and β-carotene on murine macrophage activity[J]. Food Function, 2014, 5(1): 140-148. DOI:10.1039/c3fo60309a.

    [12] 張靜, 唐粉芳, 張?zhí)燧? 等. 葉黃素對小鼠免疫功能影響的研究[J]. 食品工業(yè)科技, 2007, 28(12): 193-195. DOI:10.13386/ j.issn1002-0306.2007.12.062.

    [13] SPINAS E, SAGGINI A, KRITAS S K, et al. Can vitamin a mediate immunity and infl ammation?[J]. Journal of Biological Regulators and Homeostatic Agents, 2015, 29(1): 1-6.

    [14] KIM H W, CHEW B P, WONG T S, et al. Dietary lutein stimulates immune response in the canine[J]. Veterinary Immunology and Immunopathology, 2000, 74(3/4): 315-327. DOI:10.1016/S0165-2427(00)00180-X.

    [15] KIM H W, CHEW B P, WONG T S, et al. Modulation of humoral and cell mediated immune responses by dietary lutein in cats[J]. Veterinary Immunology and Immunopathology, 2000, 15(73): 331-341. DOI:10.1016/S0165-2427(00)00152-5.

    [16] NISHIYAMA Y, SUGIMOTO M, IKEDA S, et al. Supplemental β-carotene increases IgA-secreting cells in mammary gland and IgA transfer from milk to neonatal mice[J]. British Journal of Nutrition, 2011, 105(1): 24-30. DOI:10.1017/S0007114510003089.

    [17] BIARD C, SURAI F, MOLLER A P. Carotenoid availability in diet and phenotype of blue and great tit nestlings[J]. Journal of Experimental Biology, 2006, 209(6): 1004-1015. DOI:10.1242/jeb.02089.

    [18] RAIPUT N, ALI S, NAEEM M, et al. The effect of dietary supplementation with the natural carotenoids curcumin and lutein on pigmentation, oxidative stability and quality of meat from broiler chickens affected by a coccidiosis challenge[J]. British Poultry Science, 2014, 55(4): 501-509. DOI:10.1080/00071668.2014.925537.

    [19] BLOUNT J D, SURAI P F, HOUSTON D C, et al. Patterns of yolk enrichment with dietary carotenoids in gulls: the roles of pigment acquisition and utilization[J]. Functional Ecology, 2002, 16(4): 445-453. DOI:10.1046/j.1365-2435.2002.00648.x.

    [20] 阿侖, 董曉芳, 佟建明, 等. 葉黃素對鵪鶉繁殖性能及母源IgG向后代轉移的影響[J]. 畜牧獸醫(yī)學報, 2010, 41(3): 371-376.

    [21] MORA J R, von ANDRIAN U H. Role of retinoic acid in the imprinting of gut-homing IgA-secreting cells[J]. Seminars Immunology, 2009, 21: 28-35. DOI:10.1016/j.smim.2008.08.002.

    [22] HARRIS N L, SPOERRI I, SCHOPFER J F, et al. Mechanisms of neonatal mucosal antibody protection[J]. Journal of Immunology, 2006, 177: 6256-6262. DOI:10.4049/ jimmunol.177.9.6256.

    [23] LIN J Y, LU S, LIOU Y L, et al. Increased IgA and IgG serum levels using a novel yam-boxthorn noodle in a BALB/c mouse model[J]. Food and Chemical Toxicology, 2006, 44: 170-178. DOI:10.1016/ j.fct.2005.06.014.

    [24] NISHIYAMA Y, YASUMATSUVA K, KASAI K, et al. Effects of supplemental β-carotene with whey on IgA transfer from maternal milk and mucosal IgA induction in neonatal mice and calves[J]. Livestock Science, 2011, 137: 95-100. DOI:10.1016/ j.livsci.2010.10.007.

    [25] NISHIDA K, SUGINOTO M, IKEDA S, et al. Effects of supplemental β-carotene on mucosal IgA induction in the jejunum and ileum of mice after weaning[J]. British Journal of Nutrition, 2014, 111(2): 247-253. DOI:10.1017/S0007114513002195.

    Promoting Effect of Lutein on the IgA Secretion Capacity of Mammary Glands in Maternal Mice

    CUI Huanzhong, ZHANG Hui, YANG Yujiang, YIN Jian, LAN Hainan, ZHENG Xin*
    (College of Animal Science and Technology, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China)

    The present experiment was conducted to explore the effect of supplemental lutein on the serum concentrations of IgG, IgA and IgM, the mRNA expression of IgA C-region and the number of IgA antibody-secreting cells (ASC) in breast of maternal mice as well as IgA concentration in stomach contents of neonatal mice. Maternal mice were fed rodent feed or 50 mg/kg lutein-supplemented rodent feed during pregnancy and after parturition. The serum concentrations of IgG and IgA increased signifi cantly at 21 days of pregnancy and at 7 days after parturition (P < 0.05), but IgM concentration and the mRNA expression of IgA C-region were not signifi cantly affected by lutein supplementation (P > 0.05). The number of IgA ASC at 14 days after parturition (P < 0.05) and the IgA concentration in stomach contents of neonatal mice at 7 and 14 days after parturition were enhanced markedly (P < 0.01) in response to lutein supplemention. These results indicated that supplemental lutein for maternal mice is effective in enhancing the secretion of IgA in mammary glands.

    maternal mouse; lutein; mammary glands; IgA

    10.7506/spkx1002-6630-201611037

    R392.9

    A

    1002-6630(2016)11-0214-04

    崔煥忠, 張輝, 楊雨江, 等. 葉黃素對母鼠乳腺分泌IgA的促進作用[J]. 食品科學, 2016, 37(11): 214-217. DOI:10.7506/ spkx1002-6630-201611037. http://www.spkx.net.cn

    CUI Huanzhong, ZHANG Hui, YANG Yujiang, et al. Promoting effect of lutein on the IgA secretion capacity of mammary glands in maternal mice[J]. Food Science, 2016, 37(11): 214-217. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201611037. http://www.spkx.net.cn

    2015-08-23

    吉林省科技廳國際科技合作項目(20130413037GH);吉林省科技廳自然科學基金項目(20140101028JC)

    崔煥忠(1973—),男,副教授,博士研究生,研究方向為動物營養(yǎng)免疫調控。E-mail:huanzhongcui@163.com

    *通信作者:鄭鑫(1965—),女,教授,博士,研究方向為動物營養(yǎng)調控。E-mail:zhengxinjilin@126.com

    猜你喜歡
    母鼠葉黃素乳腺
    母鼠訓子
    如何提高竹鼠繁殖率
    天然葉黃素在水產飼料中的研究與應用
    當代水產(2019年1期)2019-05-16 02:42:10
    體檢查出乳腺增生或結節(jié),該怎么辦
    母竹鼠吃仔的原因有哪些
    農家之友(2017年5期)2017-03-27 09:28:56
    得了乳腺增生,要怎么辦?
    媽媽寶寶(2017年2期)2017-02-21 01:21:22
    葉黃素的功能及在飼料中的應用
    廣東飼料(2016年4期)2016-12-01 03:43:17
    哺乳期母鼠飼喂過量精氨酸對幼鼠的影響
    飼料博覽(2016年6期)2016-04-05 14:11:14
    容易誤診的高回聲型乳腺病變
    葉黃素的抗氧化-促氧化作用研究
    最近最新中文字幕免费大全7| 久久人妻熟女aⅴ| 国产色爽女视频免费观看| 色视频www国产| 久久精品国产亚洲网站| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 久久青草综合色| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 亚洲国产av新网站| 亚洲av成人精品一二三区| 中文欧美无线码| 国产精品成人在线| 爱豆传媒免费全集在线观看| 久久婷婷青草| 欧美 日韩 精品 国产| 国产精品久久久久久久久免| 国产亚洲一区二区精品| 免费黄色在线免费观看| 天堂俺去俺来也www色官网| 三级国产精品片| 亚洲人与动物交配视频| 简卡轻食公司| 国产精品人妻久久久影院| 草草在线视频免费看| 亚洲一区二区三区欧美精品| freevideosex欧美| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 国产精品成人在线| 国产极品天堂在线| 国产乱人视频| 午夜日本视频在线| 91aial.com中文字幕在线观看| 国产一区二区三区av在线| 观看av在线不卡| 亚洲熟女精品中文字幕| 少妇人妻久久综合中文| 高清日韩中文字幕在线| 爱豆传媒免费全集在线观看| xxx大片免费视频| 国产精品三级大全| 男女国产视频网站| 一级二级三级毛片免费看| 91精品国产国语对白视频| 91精品国产国语对白视频| videossex国产| 欧美成人一区二区免费高清观看| 高清不卡的av网站| 最近中文字幕高清免费大全6| 亚洲高清免费不卡视频| 久久国产亚洲av麻豆专区| 成人特级av手机在线观看| xxx大片免费视频| xxx大片免费视频| 亚洲国产欧美人成| 国产精品免费大片| 午夜免费鲁丝| 91精品国产国语对白视频| 丰满少妇做爰视频| 国产亚洲欧美精品永久| 又大又黄又爽视频免费| 又大又黄又爽视频免费| 亚洲欧美精品自产自拍| 精品少妇黑人巨大在线播放| 韩国高清视频一区二区三区| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产 精品1| 亚洲欧美一区二区三区国产| 少妇人妻精品综合一区二区| 干丝袜人妻中文字幕| 啦啦啦啦在线视频资源| 亚洲成人一二三区av| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 久久久久久久久久久丰满| 国产色婷婷99| 欧美97在线视频| 久热这里只有精品99| 亚洲人成网站在线观看播放| 亚洲久久久国产精品| 精品一品国产午夜福利视频| 99久久人妻综合| 成年av动漫网址| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 欧美一级a爱片免费观看看| 亚洲精品一二三| 少妇精品久久久久久久| 国产色婷婷99| 免费看不卡的av| 国产在线免费精品| 日韩国内少妇激情av| 网址你懂的国产日韩在线| av在线蜜桃| 中文字幕av成人在线电影| 国产精品成人在线| 亚洲av成人精品一二三区| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| a级毛片免费高清观看在线播放| 亚洲,一卡二卡三卡| 亚洲综合精品二区| av女优亚洲男人天堂| 在线免费观看不下载黄p国产| 久久久久精品性色| 久久精品国产亚洲网站| 99热6这里只有精品| 亚洲av免费高清在线观看| 在线免费十八禁| 婷婷色综合www| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 久久久久久久久大av| 国产精品偷伦视频观看了| 国产精品一区二区性色av| 少妇的逼水好多| 韩国高清视频一区二区三区| 午夜免费鲁丝| 777米奇影视久久| 亚洲精品,欧美精品| 久久人妻熟女aⅴ| 国产黄片美女视频| 在线观看一区二区三区激情| 色视频www国产| 久久午夜福利片| 一级a做视频免费观看| 美女主播在线视频| 成人毛片60女人毛片免费| 精品少妇黑人巨大在线播放| 精品久久久噜噜| 嘟嘟电影网在线观看| 欧美成人一区二区免费高清观看| 久久99热这里只频精品6学生| 亚洲综合精品二区| 少妇人妻精品综合一区二区| 久久久久久久国产电影| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 午夜免费男女啪啪视频观看| 十八禁网站网址无遮挡 | 中国国产av一级| 观看美女的网站| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 丰满人妻一区二区三区视频av| 久久鲁丝午夜福利片| 国产 精品1| 日本色播在线视频| 成年免费大片在线观看| 欧美国产精品一级二级三级 | 成人亚洲欧美一区二区av| 日日啪夜夜爽| 久久久久久久精品精品| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 日本欧美视频一区| 国产免费一区二区三区四区乱码| 国产极品天堂在线| 美女高潮的动态| 26uuu在线亚洲综合色| 联通29元200g的流量卡| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜 | 少妇人妻一区二区三区视频| 国产黄色视频一区二区在线观看| 黑人猛操日本美女一级片| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 国产色爽女视频免费观看| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 日韩制服骚丝袜av| 人妻夜夜爽99麻豆av| 麻豆成人av视频| 成人午夜精彩视频在线观看| 人妻 亚洲 视频| 精品视频人人做人人爽| 插阴视频在线观看视频| 97在线视频观看| 搡老乐熟女国产| 三级国产精品欧美在线观看| 久久久久久久久久成人| 在现免费观看毛片| 在线观看一区二区三区| 大陆偷拍与自拍| 亚洲图色成人| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 午夜福利网站1000一区二区三区| 日本欧美视频一区| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 狂野欧美激情性xxxx在线观看| www.色视频.com| 亚洲欧美日韩无卡精品| 亚洲精品aⅴ在线观看| 成人免费观看视频高清| 亚洲av成人精品一区久久| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 精品久久久久久电影网| 亚洲av欧美aⅴ国产| 久久久久久九九精品二区国产| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 秋霞伦理黄片| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 亚洲精品日本国产第一区| 国产成人免费观看mmmm| 亚洲真实伦在线观看| 欧美xxⅹ黑人| 黄色欧美视频在线观看| 少妇 在线观看| 日韩大片免费观看网站| av免费在线看不卡| 成人黄色视频免费在线看| 国产高潮美女av| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 成人特级av手机在线观看| 日韩精品有码人妻一区| 边亲边吃奶的免费视频| 直男gayav资源| 一级av片app| 亚洲精品国产成人久久av| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 在线观看av片永久免费下载| 久久精品国产a三级三级三级| 国产乱来视频区| 亚洲国产精品成人久久小说| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 嫩草影院新地址| 亚州av有码| 日本午夜av视频| 美女主播在线视频| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产熟女欧美一区二区| 国产精品99久久久久久久久| 一级毛片aaaaaa免费看小| 热re99久久精品国产66热6| 51国产日韩欧美| 黄色视频在线播放观看不卡| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 七月丁香在线播放| 色婷婷av一区二区三区视频| 日韩av在线免费看完整版不卡| 亚州av有码| av免费在线看不卡| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 青青草视频在线视频观看| 久久综合国产亚洲精品| 久久影院123| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 婷婷色综合大香蕉| 亚洲天堂av无毛| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 永久网站在线| 欧美xxⅹ黑人| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 日韩视频在线欧美| 亚洲av成人精品一区久久| av在线老鸭窝| 丝袜喷水一区| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 99热这里只有是精品50| 亚洲精品国产av蜜桃| 国产精品伦人一区二区| 成年免费大片在线观看| 少妇熟女欧美另类| 毛片女人毛片| 春色校园在线视频观看| 一区二区三区免费毛片| 男男h啪啪无遮挡| 久久国产亚洲av麻豆专区| 简卡轻食公司| 国产v大片淫在线免费观看| 新久久久久国产一级毛片| 黄色欧美视频在线观看| 国产一区二区三区综合在线观看 | 成人美女网站在线观看视频| 久久这里有精品视频免费| 国产伦理片在线播放av一区| 国产欧美亚洲国产| 国产高潮美女av| 婷婷色综合大香蕉| 九色成人免费人妻av| 嫩草影院新地址| 日韩亚洲欧美综合| 国产69精品久久久久777片| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 欧美高清成人免费视频www| 亚洲,欧美,日韩| 九九在线视频观看精品| 精品熟女少妇av免费看| 男女边摸边吃奶| 久久99热这里只有精品18| 国产精品欧美亚洲77777| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 国产成人精品一,二区| 国产av精品麻豆| 亚洲精品视频女| 国产伦精品一区二区三区视频9| 亚洲精品日韩av片在线观看| 国产成人免费无遮挡视频| 国产精品久久久久久精品古装| 内地一区二区视频在线| 国产毛片在线视频| 久久久午夜欧美精品| 亚洲av男天堂| 久久97久久精品| 一级黄片播放器| 国产 一区 欧美 日韩| 在线精品无人区一区二区三 | 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 在线免费十八禁| 超碰av人人做人人爽久久| 日本一二三区视频观看| 春色校园在线视频观看| 国产亚洲一区二区精品| 婷婷色综合www| 国内精品宾馆在线| 久久久久精品性色| 亚洲精品成人av观看孕妇| 性色av一级| 99热这里只有精品一区| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| xxx大片免费视频| 亚洲欧美精品专区久久| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 日本免费在线观看一区| 插逼视频在线观看| 国产av一区二区精品久久 | 在线天堂最新版资源| av.在线天堂| 97超碰精品成人国产| 国产日韩欧美亚洲二区| 99热这里只有是精品50| 一级毛片aaaaaa免费看小| 国产高清三级在线| 最近最新中文字幕大全电影3| 国产成人午夜福利电影在线观看| 99久久精品一区二区三区| 熟女av电影| 久久精品国产亚洲av天美| 超碰97精品在线观看| 一级毛片我不卡| 久久午夜福利片| 国产精品爽爽va在线观看网站| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲国产色片| 亚洲精品456在线播放app| 免费少妇av软件| videos熟女内射| 精品亚洲成a人片在线观看 | 美女视频免费永久观看网站| 91久久精品国产一区二区三区| 嫩草影院入口| 天堂俺去俺来也www色官网| 97精品久久久久久久久久精品| 热re99久久精品国产66热6| 国产色爽女视频免费观看| 青青草视频在线视频观看| 一个人看的www免费观看视频| 边亲边吃奶的免费视频| 永久免费av网站大全| 日本与韩国留学比较| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 最近最新中文字幕免费大全7| 18禁在线播放成人免费| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 人妻系列 视频| 中文字幕亚洲精品专区| a级一级毛片免费在线观看| 亚洲成人av在线免费| 黄片无遮挡物在线观看| 精品午夜福利在线看| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲精品日本国产第一区| av线在线观看网站| 亚洲久久久国产精品| 欧美精品一区二区大全| 99久久中文字幕三级久久日本| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产一级毛片在线| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 18+在线观看网站| .国产精品久久| 免费高清在线观看视频在线观看| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产亚洲最大av| 美女cb高潮喷水在线观看| 精品亚洲成国产av| 成人亚洲欧美一区二区av| 又大又黄又爽视频免费| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 十八禁网站网址无遮挡 | 午夜福利视频精品| 日本一二三区视频观看| tube8黄色片| 精品酒店卫生间| 国产一区二区在线观看日韩| 中国国产av一级| 亚洲av综合色区一区| 亚洲性久久影院| 亚洲成人av在线免费| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲精品日韩av片在线观看| 免费观看a级毛片全部| 激情 狠狠 欧美| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产乱人偷精品视频| 国产色婷婷99| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 26uuu在线亚洲综合色| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 91久久精品国产一区二区成人| 久久99热6这里只有精品| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 日本欧美视频一区| 插逼视频在线观看| 婷婷色综合大香蕉| 舔av片在线| 国产精品嫩草影院av在线观看| 香蕉精品网在线| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 黑丝袜美女国产一区| 男女下面进入的视频免费午夜| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 丰满迷人的少妇在线观看| 婷婷色综合www| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 性色av一级| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 伊人久久精品亚洲午夜| 边亲边吃奶的免费视频| 26uuu在线亚洲综合色| 色婷婷av一区二区三区视频| 99九九线精品视频在线观看视频| av在线播放精品| 国产老妇伦熟女老妇高清| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 99国产精品免费福利视频| 蜜臀久久99精品久久宅男| 大片电影免费在线观看免费| 一二三四中文在线观看免费高清| 性色av一级| 色5月婷婷丁香| 日韩av不卡免费在线播放| 国国产精品蜜臀av免费| 最后的刺客免费高清国语| 国产在线一区二区三区精| 成年女人在线观看亚洲视频| 精品酒店卫生间| 婷婷色综合大香蕉| 丰满乱子伦码专区| 免费在线观看成人毛片| 午夜免费男女啪啪视频观看| 国产爱豆传媒在线观看| 色哟哟·www| 在线观看免费高清a一片| 一级av片app| 成人免费观看视频高清| av免费观看日本| 91精品国产国语对白视频| 一级av片app| 欧美+日韩+精品| 永久网站在线| 久久久久久伊人网av| 中国三级夫妇交换| 久久婷婷青草| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 成人毛片a级毛片在线播放| 色综合色国产| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲欧洲国产日韩| 国产亚洲91精品色在线| 一级二级三级毛片免费看| 最近手机中文字幕大全| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 亚洲国产av新网站| 国产精品女同一区二区软件| 成年人午夜在线观看视频| 秋霞伦理黄片| 日韩精品有码人妻一区| 青春草国产在线视频| 色网站视频免费| 视频中文字幕在线观看| 在线观看免费视频网站a站| 黑人高潮一二区| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 男女下面进入的视频免费午夜| 如何舔出高潮| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 国产中年淑女户外野战色| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 乱系列少妇在线播放| 日韩欧美 国产精品| 精品一区二区三区视频在线| 身体一侧抽搐| 国产亚洲精品久久久com| 大陆偷拍与自拍| 国产精品久久久久久av不卡| 亚洲国产精品999| 七月丁香在线播放| 丝瓜视频免费看黄片| 日本午夜av视频| a级毛色黄片| 国产av码专区亚洲av| 在线观看国产h片| 免费人成在线观看视频色| 又大又黄又爽视频免费| 久久精品国产亚洲网站| 制服丝袜香蕉在线| 天美传媒精品一区二区| 久久久久久人妻| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 久久久久精品性色| 欧美人与善性xxx| 男女下面进入的视频免费午夜| 插阴视频在线观看视频| 极品教师在线视频| 国产人妻一区二区三区在| 日本色播在线视频| 国产视频首页在线观看| 99久国产av精品国产电影| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲精品一二三| 日韩av在线免费看完整版不卡| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 特大巨黑吊av在线直播| 日本欧美视频一区| 国产av一区二区精品久久 | 成人亚洲精品一区在线观看 | 久热这里只有精品99| 欧美xxⅹ黑人| 久久久久视频综合| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 久久久色成人| 直男gayav资源| 国产又色又爽无遮挡免| 亚洲欧美精品专区久久| 六月丁香七月| 国产色婷婷99| 国产黄频视频在线观看| av不卡在线播放| 久久久欧美国产精品| 国产黄频视频在线观看| 午夜福利视频精品| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 在线观看三级黄色| 欧美xxxx性猛交bbbb| 寂寞人妻少妇视频99o| 久久午夜福利片| 黄色一级大片看看| 久久久国产一区二区| av线在线观看网站| 五月伊人婷婷丁香| a级毛色黄片| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国产亚洲精品久久久com| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜 | 在线看a的网站| 夜夜骑夜夜射夜夜干| av天堂中文字幕网| 综合色丁香网| 日韩成人伦理影院| av又黄又爽大尺度在线免费看| 新久久久久国产一级毛片| 久久久成人免费电影| 亚洲图色成人| 看非洲黑人一级黄片| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产高潮美女av| 国产片特级美女逼逼视频| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 十八禁网站网址无遮挡 | 国产男女内射视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 亚洲av.av天堂| 直男gayav资源| 草草在线视频免费看| 免费黄网站久久成人精品| 3wmmmm亚洲av在线观看| 免费看av在线观看网站| 日本av免费视频播放| 久久精品国产亚洲网站| 亚洲精品自拍成人| 久久久久国产精品人妻一区二区| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 女性被躁到高潮视频| 免费观看av网站的网址| 日本一二三区视频观看| 熟女电影av网| 亚洲精品国产av成人精品| 免费av不卡在线播放| videossex国产| 日本免费在线观看一区| 性色avwww在线观看| 黑丝袜美女国产一区| 久久韩国三级中文字幕| 伦理电影大哥的女人| videossex国产| 熟女电影av网| 99久久精品国产国产毛片| 大陆偷拍与自拍| 久久国内精品自在自线图片| 免费观看在线日韩| 在现免费观看毛片| 欧美精品一区二区大全| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 日本黄大片高清| 在线免费十八禁| 日日啪夜夜撸|