坐骨神經(jīng)非凍結(jié)性冷損傷時(shí)血神經(jīng)屏障損害的研究

李　浩，張　磊，徐　敏

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坐骨神經(jīng)非凍結(jié)性冷損傷時(shí)血神經(jīng)屏障損害的研究

李浩1，張磊2，徐敏3

目的使用大鼠坐骨神經(jīng)制造周圍神經(jīng)非凍結(jié)性冷損傷模型，觀察非凍結(jié)性冷損傷時(shí)神經(jīng)內(nèi)部的水腫變化，研究冷損傷時(shí)血神經(jīng)屏障功能的損害情況及相應(yīng)的病理改變。方法48只雄性Wistar隨機(jī)分成冷損傷后1 d組、3 d組和5 d組。每只大鼠一側(cè)坐骨神經(jīng)予以3 ℃～5 ℃持續(xù)低溫2 h；以對側(cè)坐骨神經(jīng)作為對照。每組大鼠在相應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)取下坐骨神經(jīng)進(jìn)行觀察：靜脈注射伊文思藍(lán)后1 h，測量坐骨神經(jīng)中伊文思藍(lán)濃度；靜脈注射伊文思藍(lán)后1 h，坐骨神經(jīng)包埋制片，在熒光顯微鏡下觀察伊文思藍(lán)的分布；坐骨神經(jīng)包埋制片，在光學(xué)顯微鏡及電子顯微鏡下觀察有髓纖維、無髓纖維及毛細(xì)血管的狀況。結(jié)果冷損傷后1 d，多數(shù)有髓纖維出現(xiàn)以“空、暗”為形式的軸索退變；無髓纖維和緊密連接完好；神經(jīng)內(nèi)膜毛細(xì)血管管腔狹窄；冷損傷后3～5 d，有髓纖維病變繼續(xù)加重；神經(jīng)內(nèi)膜毛細(xì)血管管腔仍然狹窄，內(nèi)皮細(xì)胞間的緊密連接開放；冷損傷后1 d，冷損傷側(cè)坐骨神經(jīng)中的伊文思藍(lán)濃度與對照側(cè)相比有顯著升高；在正常的坐骨神經(jīng)內(nèi)，伊文思藍(lán)紅色熒光局限于神經(jīng)內(nèi)膜的血管腔內(nèi)，未滲漏至血管外；在冷損傷后1 d，坐骨神經(jīng)的一些受冷部位出現(xiàn)了神經(jīng)內(nèi)膜彌漫性紅色熒光；類似熒光也出現(xiàn)冷損傷后3 d與5 d的坐骨神經(jīng)中，但是其熒光強(qiáng)度有所下降。結(jié)論坐骨神經(jīng)非凍結(jié)性冷損傷可以導(dǎo)致血神經(jīng)屏障功能破壞，引起神經(jīng)內(nèi)膜水腫；非凍結(jié)性冷損傷早期主要選擇性損害有髓纖維，而對無髓纖維損傷極輕。

非凍結(jié)性冷損傷；血神經(jīng)屏障；坐骨神經(jīng)；神經(jīng)變性

非凍結(jié)性冷損傷是指0 ℃以上的低溫潮濕環(huán)境所導(dǎo)致的人體組織損傷，如戰(zhàn)壕足、浸潰足等[1]。早在古希臘的希波克拉底時(shí)代，就已經(jīng)存在對非凍結(jié)性冷損傷的報(bào)道。近代以來，隨著低溫天氣下軍事戰(zhàn)爭的增多，非凍結(jié)性冷損傷的報(bào)道也逐漸增多，例如兩次世界大戰(zhàn)、朝鮮戰(zhàn)爭等[2～4]。在當(dāng)今的和平年代，我國某些人群的非凍結(jié)性冷損傷發(fā)病率仍可高達(dá)8.7%[5]，如新兵、登山愛好者、大海中的漁民、冬天的酗酒者、癡呆者等。2008年雪災(zāi)時(shí)，非凍結(jié)性冷損傷在寧波地區(qū)發(fā)生率為12.78%，占傷害類型的67.28%[6]。雖然非凍結(jié)性冷損傷現(xiàn)象已經(jīng)存在了很長時(shí)間，但它對周圍神經(jīng)的損傷機(jī)制卻依然不清楚，許多領(lǐng)域還有待深入研究。本研究以大鼠坐骨神經(jīng)內(nèi)的血神經(jīng)屏障功能為研究對象，探討非凍結(jié)性冷損傷下血神經(jīng)屏障功能的損害情況。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料體質(zhì)量300～400 g的3～4月齡SPF級成年雄性Wistar大鼠48只(北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，合格證號(hào)：SCXK(京)2002-003)，室內(nèi)飼養(yǎng)溫度25 ℃，相對濕度50%。制冷裝置選擇德國Julabo公司生產(chǎn)的制冷和加熱循環(huán)器(F12-ED)，測溫裝置選擇優(yōu)利德專業(yè)型數(shù)字測溫表(UT325A)。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1坐骨神經(jīng)非凍結(jié)性冷損傷模型非凍結(jié)性冷損傷模型的制作參考賈建平等人[7]的方法：用2%戊巴比妥鈉以0.25 ml/100 g體質(zhì)量的劑量腹腔麻醉大鼠；麻醉后大鼠俯臥位固定，在其左側(cè)大腿根部常規(guī)備皮、消毒，于菱形窩處皮膚上作一個(gè)3 cm長切口；充分暴露坐骨神經(jīng)后，將其置于已預(yù)冷的實(shí)驗(yàn)裝置(見圖1)中，使神經(jīng)溫度維持在3 ℃～5 ℃，持續(xù)2 h，受冷結(jié)束后直接將神經(jīng)從銅槽中移出。同樣暴露右側(cè)坐骨神經(jīng)，僅給予暴露坐骨神經(jīng)，不給予低溫處理，作為對照。造模過程中監(jiān)測大鼠直腸溫度、心率。術(shù)中大鼠身下用電熱毯維持肛門溫度在35 ℃以上。術(shù)中每20 min記錄一次循環(huán)水及神經(jīng)的溫度。

1.2.2動(dòng)物分組將48只大鼠隨機(jī)分組,冷損傷后1 d組(16只)：對大鼠左側(cè)坐骨神經(jīng)手術(shù)暴露后進(jìn)行2 h的持續(xù)冷處理(3 ℃～5 ℃)，縫合傷口后于室溫下飼養(yǎng)24 h。冷損傷后3 d組(16只)：對大鼠左側(cè)坐骨神經(jīng)手術(shù)暴露后進(jìn)行2 h的持續(xù)冷處理(3 ℃～5 ℃)，縫合傷口后于室溫下飼養(yǎng)72 h。冷損傷后5 d組(16只)：對大鼠左側(cè)坐骨神經(jīng)手術(shù)暴露后進(jìn)行2 h的持續(xù)冷處理(3 ℃～5 ℃)，縫合傷口后于室溫下飼養(yǎng)120 h。對上述3組大鼠右側(cè)坐骨神經(jīng)手術(shù)暴露后不給予冷處理，2 h后縫合傷口，于室溫下飼養(yǎng)相應(yīng)時(shí)間作為各組的對照。

1.2.3標(biāo)本取材、處理在冷損傷后的23 h，給予每組各8只大鼠靜脈注射伊文思藍(lán)溶液(1 ml伊文思藍(lán)溶液/100 g體質(zhì)量)。伊文思藍(lán)溶液是含有1%伊文思藍(lán)的生理鹽水溶液。在注射后1 h，取下每只大鼠雙側(cè)坐骨神經(jīng)，吸去多余水分后稱重。坐骨神經(jīng)放置于1 ml甲酰胺內(nèi)50 ℃下孵育24 h。使用分光光度儀(日本島津公司蘇州市分公司生產(chǎn)，型號(hào)：UV-1800)對所得到藍(lán)色溶液測量伊文思藍(lán)吸光度，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線轉(zhuǎn)換為其濃度，除以神經(jīng)重量。同樣采用上述實(shí)驗(yàn)方法，每組各4只大鼠的雙側(cè)坐骨神經(jīng)切成5 mm長的數(shù)段，包埋于Tissue-Tek Optical Cutting Temperature Compound(美國SAKURA公司生產(chǎn))中，冷凍于液氮內(nèi)，儲(chǔ)存于-80 ℃環(huán)境下。這些組織使用時(shí)制成10 μm 厚的橫切片，經(jīng)過甘油-生理鹽水封存后在熒光顯微鏡(日本奧林巴斯公司東京生產(chǎn)，型號(hào)：CX41-32RFL)下觀察伊文思藍(lán)在神經(jīng)內(nèi)的分布。在冷損傷后的24 h，每組4只大鼠被麻醉后迅速取下雙側(cè)坐骨神經(jīng)，按以下步驟操作：(1)2%多聚甲醛-2.5%戊二醛中4 ℃固定2 h；(2)0.1 mmol/L磷酸鹽緩沖液(pH值7.4)浸泡3次，每次10 min；(3)四氧化鋨固定，乙醇脫水，環(huán)氧樹脂Epon812包埋；(4)制備1 μm半薄切片，甲苯胺藍(lán)染色后光學(xué)顯微鏡(型號(hào)：Eclipse 50i POL；尼康公司，Melville,USA)下觀察；(5)制備5 nm超薄切片，醋酸鈾-枸櫞酸鉛染色后用透射電子顯微鏡(型號(hào)：EM208s；荷蘭 Eindhoven市，皇家飛利浦公司)觀察。

2　實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1各組坐骨神經(jīng)中伊文思藍(lán)的濃度比較將一定量的伊文思藍(lán)分別溶解于甲酰胺內(nèi)，配制成濃度為2 μg/ml、5 μg/ml、8 μg/ml、10 μg/ml、12 μg/ml、25 μg/ml、50 μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液，使用分光光度法測定標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，吸光度與濃度呈線性關(guān)系(見表1、圖2)。各組坐骨神經(jīng)放置于甲酰胺內(nèi)孵育24 h，得到藍(lán)色溶液，使用分光光度法測量溶液吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線將吸光度轉(zhuǎn)換為濃度，并除以神經(jīng)重量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：冷損傷后第3天、第5天時(shí)低溫側(cè)的伊文思藍(lán)濃度均顯著低于第1天時(shí)，而第1天時(shí)低溫側(cè)的伊文思藍(lán)濃度顯著高于對照側(cè)(具體數(shù)據(jù)見表2)。

2.2各組坐骨神經(jīng)中伊文思藍(lán)的分布靜脈注射伊文思藍(lán)1 h 后觀察作為對照的坐骨神經(jīng)，發(fā)現(xiàn)紅色熒光局限于神經(jīng)內(nèi)膜的血管腔內(nèi)，未見有熒光滲漏至血管外。觀察低溫處理的坐骨神經(jīng)發(fā)現(xiàn)：在冷損傷后第1天，大多數(shù)坐骨神經(jīng)的受冷部位出現(xiàn)了神經(jīng)內(nèi)膜彌漫性紅色熒光，但也有一些受冷部位始終未見熒光滲漏。類似的彌漫性熒光也出現(xiàn)冷損傷后第3天，第5天的坐骨神經(jīng)中，但是其熒光強(qiáng)度明顯下降(見圖3)。

2.3各組大鼠坐骨神經(jīng)光學(xué)顯微鏡下的形態(tài)比較對照側(cè)坐骨神經(jīng)僅少量有髓纖維出現(xiàn)空或暗軸索，伴隨正常的神經(jīng)內(nèi)膜毛細(xì)血管。低溫處理后1 d，許多有髓纖維出現(xiàn)以巨大、空或萎縮、暗為形式的軸索退變。由于內(nèi)皮細(xì)胞腫脹，神經(jīng)內(nèi)膜毛細(xì)血管管腔狹窄。低溫處理后3～5 d時(shí)有髓纖維顯示出更加嚴(yán)重的以“空或萎縮、暗”為形式的軸索退變，并且神經(jīng)內(nèi)膜毛細(xì)血管管腔仍然狹窄(見圖4)。

2.4各組大鼠坐骨神經(jīng)電子顯微鏡下的形態(tài)比較對照側(cè)1 d時(shí)僅少量有髓纖維輕微板層松散，無髓纖維與神經(jīng)內(nèi)膜血管基本正常。低溫處理后1 d時(shí)，坐骨神經(jīng)的有髓纖維已經(jīng)出現(xiàn)嚴(yán)重病變，表現(xiàn)為：髓鞘板層結(jié)構(gòu)松散，乃至于結(jié)構(gòu)完全消失；軸索輕則微絲溶解，重則結(jié)構(gòu)消失，表現(xiàn)為“空軸索”。無髓纖維基本正常。神經(jīng)內(nèi)膜血管管腔狹窄，血管內(nèi)皮細(xì)胞增生，但緊密連接未見破壞，血管內(nèi)未見血小板激活與紅細(xì)胞淤滯。低溫處理后3～5 d時(shí)，大鼠坐骨神經(jīng)中有髓纖維出現(xiàn)更加明顯的軸索退變和髓鞘分裂。內(nèi)皮細(xì)胞仍然腫脹，緊密連接出現(xiàn)開放。直到第5天時(shí)才能發(fā)現(xiàn)散亂的無髓纖維退變(見圖5)。

表1　伊文思藍(lán)在甲酰胺中的吸光度-濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線

r=0.999

表2　各組坐骨神經(jīng)中伊文思藍(lán)的濃度比較

與冷損傷后1 d相同側(cè)比較*P<0.05；同一組內(nèi)與對照側(cè)比較#P<0.05

圖1實(shí)驗(yàn)裝置的設(shè)計(jì)[7]致冷管道(自制)由銅管組成，表面覆蓋環(huán)氧樹脂，做成一個(gè)中空的半圓形。在入水口和出水口之間有15 mm的間距。通過加熱制冷循環(huán)器(型號(hào)：F12-ED；德國Julabo公司)驅(qū)動(dòng)，使冷水不斷循環(huán)通過管道，從而冷卻坐骨神經(jīng)。在銅管底部和神經(jīng)之上可放置測溫裝置，用于測定制冷溫度和神經(jīng)實(shí)際溫度，兩點(diǎn)間溫差不超過0.2 ℃

圖2伊文思藍(lán)在甲酰胺中的吸光度-濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線

3　討　論

在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)，血腦屏障使腦組織和血液隔絕，并對血液和腦組織之間的多種物質(zhì)交換進(jìn)行調(diào)控。當(dāng)機(jī)體受到寒冷損傷時(shí)，由于氧化損傷導(dǎo)致血腦屏障通透性增加，血管內(nèi)液體滲出，可以引起繼發(fā)性腦水腫[8]。在周圍神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)，神經(jīng)組織的內(nèi)環(huán)境也由相似的屏障進(jìn)行維持，該屏障即稱為血神經(jīng)屏障，它主要由神經(jīng)內(nèi)膜微血管上皮細(xì)胞和神經(jīng)束膜鞘構(gòu)成[9]。它對許多物質(zhì)都具有低通透性，可以阻止一些溶質(zhì)、大分子物質(zhì)、白細(xì)胞及細(xì)菌通過被動(dòng)擴(kuò)散方式進(jìn)入周圍神經(jīng)組織，從而將周圍神經(jīng)與血液系統(tǒng)分隔，起到一種保護(hù)作用[10]。同時(shí)，它通過一些轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白調(diào)節(jié)某些離子、營養(yǎng)物質(zhì)及其他外源性物質(zhì)出入神經(jīng)組織，并通過維持鈉、鉀離子濃度的梯度差，調(diào)節(jié)軸索去極-復(fù)極化過程，保證神經(jīng)信號(hào)正常傳導(dǎo)[10～12]。在大部分周圍神經(jīng)疾病中，如熱損傷、糖尿病、神經(jīng)壓榨傷，人們都發(fā)現(xiàn)了血神經(jīng)屏障的破壞[13,14]。同樣地，在非凍結(jié)性冷損傷中也存在血神經(jīng)屏障的破壞。

人們通過對動(dòng)物靜脈注射多種示蹤劑，并對示蹤劑所浸潤的組織進(jìn)行化學(xué)固定來觀察血-神經(jīng)屏障的完整性變化。熒光類示蹤劑如臺(tái)盼藍(lán)、熒光素鈉及伊文思藍(lán)等，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于此類研究。我們的研究使用了一種分子量為66200 Da的熒光示蹤劑-伊文思藍(lán)。該物質(zhì)可以在特殊顯微鏡下發(fā)出高亮度的紅色熒光。在其630 nm的最大吸收值時(shí)，通過比色法可以由吸光度算出它的濃度。Olsson[15]發(fā)現(xiàn)在正常情況下，神經(jīng)內(nèi)膜血管對伊文思藍(lán)不具備通透性。但是，當(dāng)神經(jīng)發(fā)生損傷，如壓榨傷或切割傷時(shí)，神經(jīng)內(nèi)膜血管對它的通透性會(huì)增大，該物質(zhì)就可以通過損傷部位的細(xì)胞間隙滲漏出去，這種現(xiàn)象反映了血神經(jīng)屏障完整性的損害。目前，伊文思藍(lán)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于周圍神經(jīng)熱損傷后屏障功能破壞的研究[16～18]，卻沒有用于研究周圍神經(jīng)非凍結(jié)性冷損傷后屏障功能的破壞。因此，我們采用靜脈注射伊文思藍(lán)來觀察非凍結(jié)性冷損傷時(shí)坐骨神經(jīng)屏障功能的損害。

研究發(fā)現(xiàn)冷損傷后1 d時(shí)，坐骨神經(jīng)某些經(jīng)過低溫處理的節(jié)段出現(xiàn)神經(jīng)內(nèi)膜彌漫性高亮度紅色熒光。直到冷損傷后3～5 d時(shí)，這種紅色熒光依然存在。它提示由于血神經(jīng)屏障功能的損傷，冷損傷后1 d時(shí)神經(jīng)內(nèi)膜血管的通透性明顯增加，伊文思藍(lán)隨著液體從血管內(nèi)大量滲出至神經(jīng)內(nèi)膜中。而電鏡發(fā)現(xiàn)冷損傷后3 d時(shí)，神經(jīng)內(nèi)膜中的血管內(nèi)皮細(xì)胞間緊密連接出現(xiàn)開放的現(xiàn)象也支持血-神經(jīng)屏障功能存在損傷。此外，在大型有髓纖維軸索嚴(yán)重退變時(shí)，無髓纖維較好地得到了保存，提示非凍結(jié)性冷損傷主要選擇性破壞有髓纖維。

周圍神經(jīng)的冷損傷改變了神經(jīng)內(nèi)膜中的血管通透性，損傷了血神經(jīng)屏障，導(dǎo)致液體滲入神經(jīng)內(nèi)膜，破壞其微環(huán)境，引起神經(jīng)內(nèi)膜水腫。這些過多的液體將會(huì)進(jìn)一步擠壓周圍的神經(jīng)束膜，使其超出正常調(diào)節(jié)范圍，造成神經(jīng)內(nèi)膜壓力的迅速上升[19]，破壞內(nèi)部的神經(jīng)纖維。此外，神經(jīng)內(nèi)膜水腫也會(huì)進(jìn)一步降低內(nèi)部的血流量，加重神經(jīng)內(nèi)膜缺氧，繼續(xù)破壞血神經(jīng)屏障功能。但是，血神經(jīng)屏障功能的損傷并非是一個(gè)簡單過程，而是涉及了兩個(gè)階段：早期階段中(冷損傷后24 h)主要由內(nèi)皮細(xì)胞中的吞飲小泡轉(zhuǎn)運(yùn)有害物質(zhì)，而后期階段(冷損傷后3～5 d)則是有害物質(zhì)通過損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞間隙滲透進(jìn)入神經(jīng)內(nèi)膜[20]。這就可以解釋為什么第1天時(shí)已經(jīng)存在液體滲出至神經(jīng)內(nèi)膜，電鏡卻沒有發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接的開放，直到冷損傷后第3天才發(fā)現(xiàn)緊密連接的開放。同時(shí)發(fā)現(xiàn)當(dāng)神經(jīng)內(nèi)的血流量逐漸恢復(fù)到基線狀態(tài)時(shí)[7,21,22]，第3天～第5天時(shí)的伊文思藍(lán)滲出量卻比第1天時(shí)明顯減少，原因不是很清楚，我們認(rèn)為可能是由于神經(jīng)內(nèi)膜中的液體壓力升高，阻止了液體從微血管繼續(xù)滲出至神經(jīng)內(nèi)膜[19]。

與我們的研究發(fā)現(xiàn)類似，在許多實(shí)驗(yàn)性周圍神經(jīng)疾病中也存在神經(jīng)內(nèi)膜血管通透性改變，但是具體過程仍然不清楚。Olsson[23,24]曾指出這種血管通透性的異?？赡苁怯捎谏窠?jīng)內(nèi)膜中的肥大細(xì)胞脫顆粒釋放的血管活性胺引起。因此，冷損傷時(shí)血神經(jīng)屏障的通透性增高也可能是由于血管活性胺的釋放。但是，由于實(shí)驗(yàn)條件的限制，我們沒有進(jìn)行對血管活性胺的釋放進(jìn)行觀察，這是需要繼續(xù)深入研究的領(lǐng)域。

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A.在對照側(cè)，紅色熒光局限于血管腔內(nèi)，神經(jīng)內(nèi)膜中未見熒光外漏出血管；B.冷損傷后1 d 坐骨神經(jīng)內(nèi)膜可見彌漫紅色熒光；C.冷損傷后3 d，在大鼠坐骨神經(jīng)受冷段可見神經(jīng)內(nèi)膜紅色熒光減少；D.冷損傷后5 d，在大鼠坐骨神經(jīng)受冷段可見神經(jīng)內(nèi)膜紅色熒光減少

圖3冷損傷后坐骨神經(jīng)內(nèi)伊文思藍(lán)的分布變化 (伊文思藍(lán)染色，×40)

A.對照側(cè)坐骨神經(jīng)；B.低溫組冷損傷后1 d，神經(jīng)軸索出現(xiàn)以“暗、空”為主要表現(xiàn)的退變，并出現(xiàn)血管管腔狹窄和內(nèi)皮細(xì)胞腫脹；C.冷損傷后3 d，大鼠坐骨神經(jīng)中出現(xiàn)更多的神經(jīng)軸索出現(xiàn)嚴(yán)重的暗退變；D.冷損傷后5 d大鼠坐骨神經(jīng)出現(xiàn)退變軸索

圖4坐骨神經(jīng)非凍結(jié)性冷損傷光學(xué)顯微鏡下所見圖像(甲苯胺藍(lán)染色,×400)

A.對照側(cè)神經(jīng)內(nèi)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞大致正常(×13000)；B.低溫后1 d時(shí)低溫組神經(jīng)內(nèi)膜血管管腔狹窄，內(nèi)皮細(xì)胞增生(×10000)；C.低溫后3 d時(shí)低溫組神經(jīng)內(nèi)膜血管管腔狹窄，內(nèi)皮細(xì)胞增生(×10000)；D.低溫后5 d時(shí)低溫組神經(jīng)內(nèi)膜血管管腔狹窄，內(nèi)皮細(xì)胞增生(×10000)

圖5坐骨神經(jīng)非凍結(jié)性冷損傷電子顯微鏡下所見圖像(醋酸鈾-枸櫞酸鉛染色)

The study of blood-nerve barriers in non-freezing cold injury of the sciatic nerves

LIHao,ZHANGLei,XUMin.

(DepartmentofNeurology,TheFirstPeople’sHospitalofYibin,Yibin644000,China)

ObjectiveTo make the model of non-freezing cold injury in peripheral nerves,observe edema in endoneurium in non-freezing cold injury,and study the effect of barrier function and corresponding pathological changes.MethodsMale Wistar rats were randomly divided into the 1st group,3rd group and 5th group.One side of sciatic nerves wastreated at 3 ℃ ～5 ℃ for 2 hours,the other side was as control.The bilateral sciatic nerves of each group were harvested on the 1st,3rd and 5th day after cooling.The structure of nerves and blood-nerve barrier were examined.ResultsOn the 1st day,most of the myelinated fibres in sciatic nerves showed “empty or dark” axons,with normal unmyelinated fibres and tight junction.Endoneurial capillary lumen was seriously narrowed.From the 3rd day to 5th day,myelinated fibre degeneration became more widespread and unmyelinated fibres also began to degenerate.The vasculature was similar to that of the 1st day,with tight junction open.There was significant difference between the cooled group and control group in the 1st day.Normal rat sciatic nerve showed a bright red fluorescence confined to the lumen of endoneurial blood vessels and none appeared outside the vascular walls.The segments at the cooling sites of sciatic nerves were examined on 1st day after the cooled injury,the sciatic nerve showed intense red fluorescence in endoneurium,outside the vascular.On the 3rd and 5th day after nerve cooled,the red fluorescence was also seen,but the intensity decreased.ConclusionNon-freezing cold injury to rat sciatic nerve could resulted in breakdown of the blood-nerve barrier function,causing endoneurial edema.Myelinated fibers were mainly selectively damaged,but unmyelinated fibers were preserved.

Non-freezing cold injury；Blood-nerve barrier；Sciatic nerve；Nerve degeneration

1003-2754(2016)02-0104-05

2015-12-16；

2016-01-29

四川省醫(yī)學(xué)會(huì)“施慧達(dá)”課題(SHD12-21)

(1.宜賓市第一人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，四川 宜賓 644000；2.宜賓市第一人民醫(yī)院藥劑科，四川 宜賓 644000；3.首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，北京 100053)

李浩，E-mail:lihao119@sohu.com

R745

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