穿心蓮內(nèi)酯對小鼠早期感染性休克的影響*

王小青 王劍 趙詩云 吳東風(fēng) 劉丹#

（1江西省中醫(yī)藥研究院 南昌 330046；2南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院 江西 南昌 330006）

中西藥苑

穿心蓮內(nèi)酯對小鼠早期感染性休克的影響*

王小青1王劍2趙詩云1吳東風(fēng)1劉丹1#

（1江西省中醫(yī)藥研究院 南昌 330046；2南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院 江西 南昌 330006）

目的：建立感染性休克小鼠動物模型后，觀察穿心蓮內(nèi)酯對早期感染性休克小鼠的影響。方法：采用小鼠腹腔注射內(nèi)毒素（LPS）造成感染性休克模型，觀察穿心蓮內(nèi)酯對模型小鼠的影響。結(jié)果：穿心蓮內(nèi)酯能明顯改善感染性休克小鼠的腸道水腫，同時可以降低肺、腎、肝臟器損害程度。結(jié)論：穿心蓮內(nèi)酯對LPS建立的小鼠感染性休克具有保護(hù)作用。

穿心蓮內(nèi)酯；小鼠；感染性休克模型；內(nèi)毒素

感染性休克也稱敗血癥性休克或中毒性休克，是由病原微生物及其毒素等產(chǎn)物直接或間接地激活宿主的各種細(xì)胞和體液系統(tǒng)，產(chǎn)生細(xì)胞因子和內(nèi)源性介質(zhì)，作用于機(jī)體各種器官、系統(tǒng)，引起急性微循環(huán)灌注不足，導(dǎo)致組織缺氧，細(xì)胞損害、代謝和功能障礙，甚至多器官功能衰竭的危重綜合征［1～2］。本研究應(yīng)用內(nèi)毒素（Lipopolysaccharide，LPS）腹腔注射小鼠建立感染性休克模型，觀察穿心蓮內(nèi)酯對早期感染性休克小鼠的影響?，F(xiàn)報(bào)告如下：

1 材料與方法

1.1 材料健康KM小鼠30只，雌雄各半，體重18～22 g，購自江西中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物管理中心（合格證號：JZDWNo：2016-0064）。內(nèi)毒素購自Sigma。穿心蓮內(nèi)酯滴丸（國藥準(zhǔn)字Z20040078）。

1.2 方法

1.2.1 動物分組、模型制備及標(biāo)本留取KM小鼠隨機(jī)分成正?？瞻讓φ战M、模型組（LPS 40 mg/kg）、給藥組，每組10只。其中空白對照組每天灌胃0.2 ml生理鹽水，模型組腹腔注射LPS 40 mg/kg后每天灌胃0.2 ml生理鹽水，給藥組腹腔注射LPS 40 mg/kg后每天再灌胃給藥穿心蓮內(nèi)酯0.18 g/kg，觀察小鼠情況，并做好記錄［3］。死亡小鼠立即解剖，取出組織器官包括大腸、肝、肺、腎臟，用4%福爾馬林固定，剩余小鼠在72 h后采用頸椎脫臼法處死小鼠，取出腸、肝、肺、腎臟，用4%福爾馬林固定過夜；經(jīng)脫水包埋、切片（3～5 μm）、展開后，進(jìn)行HE染色［4］。顯微鏡下觀察并拍照，比較臟器損傷程度。

1.2.2 腸含水量測定將剛死小鼠立即解剖，剪取腸道近胃端10 cm；其他小鼠72 h后處死，剪取腸道近胃端10 cm，分別準(zhǔn)確稱取其濕重于60℃烘箱烘24 h，分別稱取其腸干重。按照公式：腸含水量（%）=［（腸濕重－腸干重）/腸濕重］×100%，計(jì)算腸含水量。

1.2.3 石蠟切片組織病理學(xué)觀察按順序進(jìn)行如下操作：常規(guī)取材、標(biāo)本固定、梯度酒精脫水、二甲苯透明、浸蠟、包埋、修塊、切片、貼片、脫蠟、HE染色、二甲苯透明、封片，做石蠟HE染色。光鏡下觀察各組織病理學(xué)改變。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理利用SPSS軟件進(jìn)行方差分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用（±s）表示，數(shù)據(jù)比較進(jìn)行組間t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 存活率實(shí)驗(yàn)小鼠模型組腹腔注射LPS后，半小時后小鼠逐漸出現(xiàn)活動減少，全身顫抖，雙眼緊閉及黏液便，12 h后開始出現(xiàn)死亡，72 h后只剩1只存活，給藥組24 h內(nèi)小鼠死亡2只，后續(xù)沒有小鼠死亡。72 h后模型組小鼠的存活率為10%，給藥組存活率為80%，空白對照組存活率為100%。

2.2 腸水腫率結(jié)果表明，模型組含水量均明顯高于空白對照組，有極其顯著性差異（P＜0.01），給藥組含水量略高于空白對照組，但無顯著性差異。見表1。

表1 各組小鼠腸含水量比較（±s）

表1 各組小鼠腸含水量比較（±s）

注：與空白對照組比較，*P＜0.05。

組別空白對照組給藥組模型組含水量（%）78.57±0.2379.10±1.7983.27±2.11*

2.3 臟器的病理改變模型組小鼠腸道水腫明顯，局部結(jié)構(gòu)損失，可見糜爛；肺組織支氣管周圍有炎性細(xì)胞，肺泡壁充血，間隔增寬；腎組織出現(xiàn)細(xì)胞水腫，紅細(xì)胞溢出，肝臟呈充血瘀血改變，細(xì)胞壞死。給藥組腸道、肺、腎組織、肝臟損傷程度明顯輕于模型組。見圖1～圖15。

圖1 正常小鼠腸（10×10）

圖2 正常小鼠腸（10×40）

圖3 模型組小鼠腸（10×10）

圖4 模型組小鼠腸（10×40）

圖5 給藥組小鼠腸（10×10）

圖6 給藥組小鼠腸（10×40）

圖7 正常小鼠肝（10×40）

圖8 模型組小鼠肝（10×40）

圖9 給藥組小鼠肝（10×40）

圖10 正常小鼠肺（10×10）

圖11 模型組小鼠肺（10×10）

圖12 給藥組小鼠肺（10×10）

圖13 正常小鼠腎（10×10）

圖14 大劑量小鼠腎（10×10）

圖15 給藥組小鼠腎（10×10）

3 討論

感染性休克目前公認(rèn)的動物模型有內(nèi)毒素誘導(dǎo)、細(xì)菌注射、腹膜炎模型［5］。內(nèi)毒素誘導(dǎo)模型具有制模方便、快捷、模型穩(wěn)定、易于評定等優(yōu)點(diǎn)［6］。現(xiàn)在文獻(xiàn)報(bào)道的感染性休克模型主要為大鼠、狗、兔等，還沒有小鼠模型的報(bào)道。我們采用內(nèi)毒素誘導(dǎo)小鼠感染性休克模型實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本方法采用40 mg/kg劑量的內(nèi)毒素，可以較好的復(fù)制感染性休克模型。實(shí)驗(yàn)過程中，我們還對小鼠的血常規(guī)進(jìn)行了測定，結(jié)果小鼠模型組和正常組血常規(guī)沒有明顯差異，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，故未將血常規(guī)列入感染性休克模型的指標(biāo)之一。通過本實(shí)驗(yàn)研究證明穿心蓮內(nèi)酯對感染性休克造成的臟器損傷具有明顯的保護(hù)作用，對以后臨床提供了很好的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

［1］王勇.兒茶酚胺類藥物對內(nèi)毒素休克兔心肌的影響［D］.南京：南京醫(yī)科大學(xué)，2005

［2］張鳴號，王秀玉，張炎.氧化苦參堿對感染性休克大鼠心肌組織損傷的保護(hù)作用［J］.寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，32（8）：876-878

［3］王雪蓮，趙悅，馬力，等.內(nèi)毒素誘導(dǎo)感染性休克動物模型的建立及血清TNF-α測定［J］.中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，33（5）：390-394

［4］代蓉，董柳慧，石安華，等.HPA軸抑制大鼠感染性休克模型的建立及四逆湯對該模型的作用［J］.云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，35（6）：1-5

［5］陳光，丁曉飛，吳應(yīng)良.注射用生脈對感染性休克的影響［J］.實(shí)用藥物與臨床，2013，16（4）：304-306

［6］陳曉兵，許鐵，李小民，等.不同劑量烏司他丁對感染性休克兔肺損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制探討［J］.臨床合理用藥雜志，2011，4（5C）：8-13

Effect of Andrographolide on Mice of Early Septic Shock

WANG Xiao-qing1，WANG Jian2，ZHAO Shi-yun1，WU Dong-feng1，LIU Dan1#
（1Jiangxi Academy of Traditional Chinese Medicine，Nanchang330046；2The First Affiliated Hospital of Nanchang University，Nanchang330006）

Objective：Establishing mice model of septic shock，to observe the effect of andrographolide on early septic shock. Methods：The mice model with septic shock caused by intraperitoneal injection of lipopolysaccharide（LPS），to observe the effect of andrographolide on early septic shock.Results：Andrographolide could significantly improve intestinal edema，and reduce lung，kidney，hepatic lesion degree of mice model with septic shock.Conclusion：Andrographolide has protective effect of mice with septic shock caused LPS.

Andrographolide；Mice；Model of septic shock；LPS

R96

B

10.13638/j.issn.1671-4040.2016.08.043

2016-01-14）

江西省衛(wèi)生計(jì)生委中醫(yī)藥科研課題（編號：2014A006）

#通訊作者：劉丹，E-mail：liud@syzxyjhlc.com