復(fù)方太子參片中淫羊藿苷含量測(cè)定研究

汪　濤，趙雁平，胡衛(wèi)東（解放軍武漢療養(yǎng)院藥械科，湖北 武漢 430074）

復(fù)方太子參片中淫羊藿苷含量測(cè)定研究

汪濤，趙雁平，胡衛(wèi)東（解放軍武漢療養(yǎng)院藥械科，湖北 武漢 430074）

目的：建立復(fù)方太子參片中淫羊藿苷含量測(cè)定方法。方法：采用HPLC法測(cè)定復(fù)方太子參片中所含淫羊藿苷的含量，選用Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-水（30 ： 70），檢測(cè)波長(zhǎng)270 nm，流速1.0 mL·min-1，柱溫35 ℃。結(jié)果：淫羊藿苷進(jìn)樣量在0.033 57～1.007 μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r = 0.999 8）。加樣回收率為102.0%，RSD為0.70%。結(jié)論：HPLC法簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、可靠，可作為復(fù)方太子參片中淫羊藿苷含量測(cè)定的質(zhì)量控制方法。

復(fù)方太子參片；淫羊藿苷；高效液相色譜法；含量測(cè)定

復(fù)方太子參片為純中藥制劑，軍隊(duì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑批準(zhǔn)文號(hào)：廣制字（2013）F03004，由解放軍武漢療養(yǎng)院配制。該制劑具有扶正固本、鎮(zhèn)咳平喘、清熱解毒的作用，臨床用于治療慢性支氣管炎、過(guò)敏性支氣管炎引起的咳嗽、咳痰及哮喘等癥。復(fù)方太子參片由太子參、淫羊藿、桔梗、魚(yú)腥草等中藥組成，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，淫羊藿所含淫羊藿苷（icariin，ICA）具有免疫調(diào)節(jié)、類皮質(zhì)激素樣作用，可緩解氣管痙攣［1-6］。本研究采用高效液相色譜法［7-8］（HPLC）對(duì)復(fù)方太子參片中淫羊藿所含淫羊藿苷進(jìn)行含量測(cè)定研究，旨為完善該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供理論參考。

1　儀器與試藥

高效液相色譜儀（Dionex Ultimate 3000，美國(guó)戴安公司）；色譜柱為welch Ultimate AQ-C18柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）、phenomenex Luna C18柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）、Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）；LC-350A型超聲波中藥處理機(jī)（濟(jì)寧市市中區(qū)魯超儀器廠）。

淫羊藿苷（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)111524-201407）。復(fù)方太子參片（批號(hào)為150121、150212、150305）由解放軍武漢療養(yǎng)院提供。硅膠H薄層板、硅膠G薄層板均由青島海洋化工廠分廠提供。乙腈（色譜純，美國(guó)Fisher公司，批號(hào)15035045）；水為純水機(jī)凈化水（純水機(jī)型號(hào)Millipore Milli-Qbiocel型純水器）。其余試劑均為分析純（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

2　含量測(cè)定［9］

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

色譜柱為Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm），以乙腈-水（30 ： 70）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)270 nm，流速1.0 mL·min-1，柱溫35 ℃。理論塔板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不得低于1500。

2.2溶液的制備

2.2.1供試品溶液制備方法 取復(fù)方太子參片10片，研細(xì)，取粉末約1 g（批號(hào)150121），精密稱定，置有塞錐形瓶?jī)?nèi)，精密加入50%乙醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（頻率40 kHz，功率250 W）1 h，冷卻，再稱定重量，用50%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.2對(duì)照品溶液制備 精密稱取淫羊藿苷11.19 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液（0.111 9 mg·mL-1）。再精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液3 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得溶液濃度為33.57 μg·mL-1［10］。

2.2.3陰性對(duì)照溶液制備 取除去淫羊藿以外的其它藥材，按確定的制備工藝生產(chǎn)陰性樣品。按擬訂的供試品溶液制備方法，制成陰性對(duì)照溶液［11］。

2.3專屬性實(shí)驗(yàn)

將上述3種溶液各10 μL，分別進(jìn)樣分析，色譜圖中，淫羊藿苷色譜峰峰形對(duì)稱，達(dá)到基線分離，陰性對(duì)照溶液無(wú)干擾，結(jié)果表明該方法專屬性良好（見(jiàn)圖1）。

圖1　復(fù)方太子參片中淫羊藿苷含量測(cè)定色譜圖A - 對(duì)照品，B - 供試品，C - 陰性對(duì)照；1 - 淫羊藿苷Fig 1　The chromatograms of content determination of icariin in Fufang Taizishen tabletsA - reference substance， B - sample， C - negative reference substance；1 - icariin

2.4線性關(guān)系的考察

分別精密吸取對(duì)照品溶液（33.57 μg·mL-1）1、2、5、10、20、30 μL注入液相色譜儀中，測(cè)定峰面積，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸方程為：Y = 36.867 4 X - 0.015 0，r = 0.999 8。結(jié)果表明，淫羊藿苷進(jìn)樣量在0.033 57 ～1.007 μg范圍內(nèi)時(shí)，線性關(guān)系良好［12-13］。

2.5儀器精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液（批號(hào)150121）10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，RSD為0.09%。結(jié)果表明儀器精密度良好［14］。

2.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取同一批樣品（批號(hào)150121）6份，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定峰面積并計(jì)算含量，結(jié)果樣品中淫羊藿苷的平均含量為0.780 5 mg·g-1，RSD為0.84%。

2.7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取同一批樣品（批號(hào)150121），按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于制備后0、1、2、4、8、12 h測(cè)定峰面積值，RSD為0.65%。測(cè)定結(jié)果表明，供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8加樣回收率實(shí)驗(yàn)

分別精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液（0.111 9 mg·mL-1）10、15、25 mL，置100 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制得不同濃度的淫羊藿苷對(duì)照品溶液（濃度分別為11.19、16.78、27.98 μg·mL-1）。再精密稱取已知準(zhǔn)確含量的同一批樣品（批號(hào)150121）共9份，分別精密加入上述不同濃度的淫羊藿苷對(duì)照品溶液25 mL，每個(gè)濃度制備3份，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，精密吸取10 μL注入高效液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示淫羊藿苷的平均回收率為102.0%，RSD為0.70%［15］，見(jiàn)表1。

表1　加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果. n = 9Tab 1　The result of sample recovery rate test. n = 9

2.9耐用性實(shí)驗(yàn)

分別精密稱取同一批號(hào)（批號(hào)150121）的樣品粉末，按供試品溶液制備方法制備，在“2.1”項(xiàng)下色譜條件，采用三種不同品牌的色譜柱，依法測(cè)定，welch Ultimate AQ-C18柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）：分離度＞ 4，理論塔板數(shù)13 812，含量為0.772 9 mg·g-1；phenomenex Luna C18柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）：分離度＞ 4，理論塔板數(shù)11 321，含量為0.766 5 mg·g-1；Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）：分離度＞ 4，理論塔板數(shù)10 438，含量為0.780 5 mg·g-1；RSD為0.91%，表明三種不同品牌色譜柱均能重現(xiàn)現(xiàn)有方法。

2.10樣品的含量測(cè)定

取本品3批，批號(hào)分別為150121、150212、150305，按“2.2”至“2.6”項(xiàng)下方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　樣品中淫羊藿苷的含量測(cè)定結(jié)果Tab 2　The result of content determination of icariin in Fufang Taizishen tablets

3　討論

復(fù)方太子參片由4味中藥材組成。方中太子參，甘、微苦、平，入脾肺經(jīng)，益氣健脾，生津潤(rùn)肺，為君藥；淫羊藿，辛、溫，入肝腎經(jīng)，強(qiáng)身固本，補(bǔ)腎納氣，為臣藥；桔梗，苦、辛、平，入肺經(jīng)，降氣止咳平喘，祛痰利咽，為佐藥；魚(yú)腥草，辛、酸，微寒，入肺經(jīng)，清利濕熱，消癰腫之功，清肺熱，為使藥。諸藥相伍，扶正固本、鎮(zhèn)咳平喘，適用于慢性支氣管炎，哮喘。

3.1含量測(cè)定指標(biāo)成分的選擇

在建立復(fù)方太子參片中有效成分含量測(cè)定方法的過(guò)程中，在測(cè)定太子參所含太子參環(huán)肽B，要使用HPLC法進(jìn)行梯度洗脫，由于設(shè)備條件不具備，未能實(shí)施。淫羊藿為方中主藥，淫羊藿苷又為淫羊藿有效成分之一，并且含量測(cè)定及加樣回收實(shí)驗(yàn)不存在干擾，故選擇淫羊藿苷作為復(fù)方太子參片質(zhì)量控制的指標(biāo)成分。

3.2流動(dòng)相的選擇

《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版一部中淫羊藿項(xiàng)下測(cè)定淫羊藿苷，以乙腈-水（30 ： 70）為流動(dòng)相，結(jié)果顯示供試品溶液峰形較好，淫羊藿苷能夠達(dá)到基線分離，理論塔板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算不低于1500，故采用此流動(dòng)相。

3.3淫羊藿苷含量限度的確定

由于《中華人民共和國(guó)藥典》2015年一部中對(duì)淫羊藿中淫羊藿苷的含量有規(guī)定，根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況，選擇淫羊藿苷的含量為重點(diǎn)控制對(duì)象。根據(jù)含量測(cè)定的結(jié)果及大量配制中的實(shí)際情況，建議復(fù)方太子參片應(yīng)含淫羊藿苷≥0.20 mg·片-1。

［1］ 馮曉燕，嚴(yán)魯萍，楊源.淫羊藿苷對(duì)骨髓增生異常綜合征模型大鼠骨髓細(xì)胞凋亡的影響［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2007，18（12）：3070-3072.

［2］ 潘志偉，王秋娟，徐靜，等.淫羊藿苷對(duì)大鼠離體心臟的作用及對(duì)血液流變學(xué)的影響［J］.中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，38（5）：429-432.

［3］ 王茜，林煥冰，程玉芳，等.淫羊藿苷對(duì)高脂血癥大鼠粘附分子基因表達(dá)的影響［J］.中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志，2008，16（1）：4-6.

［4］ 高素強(qiáng)，傅得興，張紅梅.淫羊藿及其復(fù)方防治骨質(zhì)疏松的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)中藥雜志，1999，24（4）：249-251.

［5］ 王天然，邢善田，周金黃.淫羊藿總黃酮促進(jìn)免疫功能的實(shí)驗(yàn)［J］.中成藥研究，1987（2）：27-28.

［6］ 王敏，劉蒿銘，張寶風(fēng).淫羊藿苷擴(kuò)張腦血管作用的研究［J］.沈陽(yáng)藥學(xué)院學(xué)報(bào)，1991，8（4）：272.

［7］ 么淑芬，張欣，李英剛，等.HPLC測(cè)定醒腦再造丸中淫羊藿苷的含量［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2008，36（3）：47-48.

［8］ 張虹，鄭捷，葉顯撐，等.高效液相色譜法測(cè)定升白合劑中淫羊藿苷的含量［J］.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2007，27（7）：872-874.

［9］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄ⅥD.

［10］ 張?jiān)伱?，陳曉峰，姚莉?HPLC法測(cè)定無(wú)糖型胃炎靈顆粒中柚皮苷的含量［J］.安徽醫(yī)藥，2014，18（6）：1045-1047.

［11］ 楊炳川，楊浩然，方應(yīng)權(quán)，等.HPLC法測(cè)定復(fù)方玄駒膠囊中淫羊蕾苷的含量［J］.中國(guó)藥房，2015，26（9）：1282-1283.

［12］ 馮庭平，黃順旺，陳曼，等.HPLC法測(cè)定金馬肝泰分散片中淫羊藿苷的含量［J］.安徽醫(yī)藥，2014，18（3）：453-455.

［13］ 張斯?jié)h，李榮亨，巫艷芬，等.HPLC法測(cè)定復(fù)元膠囊三七皂苷R1及淫羊藿苷的含量［J］.實(shí)用藥物與臨床，2015，18（3）：308-310.

［14］ 賴昕，洪振豐，李煌，等.HPLC法測(cè)定復(fù)方益節(jié)健片中淫羊藿苷的含量［J］.海峽藥學(xué)，2015，27（7）：44-46.

［15］ 俞吉，朱裕林，桑冉，等.高效液相色譜法測(cè)定骨疏靈顆粒中淫羊藿苷含量［J］.實(shí)用藥物與臨床，2015，18（6）：691-693.

Study on content determination of icariin in Fufang Taizishen tablets

WANG Tao， ZHAO Yan-ping， HU Wei-dong（The Drug and Equipment Section of Wuhan Sanatorium of People's Liberation Army， Wuhan 430074， China）

Objective： To establish a content determination method of icariin in Fufang Taizishen tablets. Methods： The content of icariin in the Fufang Taizishen tablets was determined by HPLC. Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18column （4.6 mm × 250 mm，5 μm） was used with mobile phase of acetonitrile-water （30 ： 70）， the detection wavelength was 270 nm， flow rate was 1.0 mL·min-1，column temperature was 35 ℃. Results： The calibration curves were linear when the concentration of icariin was within the range of 0.033 57 - 1.007 μg·mL-1（r = 0.999 8）. The average recovery was 102.0% （RSD = 0.70%）. Conclusion： The HPLC method is simple， stable， reliable， and can be adopted as the quality control method of Fufang Taizishen tablets.

Fufang Taizishen tablets； Icariin； HPLC； Content determination

R917

A

1672 - 8157（2016）05 - 0271 - 03

2015年軍隊(duì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)提高計(jì)劃（14TG0198）

汪濤，男，主管藥師，主要從事醫(yī)院藥學(xué)工作。E-mail：taidi1127@126.com

（2016-01-29

2016-04-25）