高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜在蛋白質(zhì)組學(xué)相對(duì)定量分析中的應(yīng)用

洪曉愉王浩徐金玲李水明王勇*(深圳大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，微生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，深圳58060)(深圳大學(xué)生命與海洋科學(xué)學(xué)院，深圳市海洋生物資源與生態(tài)環(huán)境重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，深圳58060)

高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜在蛋白質(zhì)組學(xué)相對(duì)定量分析中的應(yīng)用

洪曉愉1王浩1徐金玲1李水明2王勇*2
1(深圳大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，微生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，深圳518060)2(深圳大學(xué)生命與海洋科學(xué)學(xué)院，深圳市海洋生物資源與生態(tài)環(huán)境重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，深圳518060)

利用TripleTOF 5600高分辨質(zhì)譜儀分析牛血清白蛋白等3種蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品，研究了質(zhì)譜離子強(qiáng)度與蛋白質(zhì)樣品相對(duì)含量的相關(guān)性。蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品用胰酶酶切后，稀釋成1～1024 fmol/7μL的系列溶液，考察在1～1024 fmol上樣量情況下，肽段的前體離子計(jì)數(shù)(cps)、蛋白質(zhì)全部肽段的離子計(jì)數(shù)之和以及被檢出肽段數(shù)目與上樣量的相關(guān)性，以及相同樣品在3次平行實(shí)驗(yàn)之間這些數(shù)值的變化幅度。結(jié)果表明。被檢出肽段數(shù)目與上樣量正相關(guān)，當(dāng)cps超過(guò)1000時(shí)，所有肽段離子強(qiáng)度之和與上樣量呈線性關(guān)系，但是用最靈敏肽段的離子強(qiáng)度表示更為準(zhǔn)確。3次測(cè)量同一肽段的最高離子強(qiáng)度通常不會(huì)超過(guò)最低強(qiáng)度的1．5倍，提示當(dāng)不同樣品中同一蛋白的離子強(qiáng)度相差3倍以上是判斷不同樣品中相同蛋白質(zhì)的含量具有差異的可靠閾值。本研究提供了一種利用高分辨率和高掃描速度蛋白質(zhì)組組學(xué)定性數(shù)據(jù)進(jìn)行半定量分析的方法，簡(jiǎn)便、快速，可為相關(guān)生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究提供參考。

定量蛋白質(zhì)組學(xué);高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜;打擊計(jì)數(shù);信號(hào)強(qiáng)度;無(wú)標(biāo)記定量

1　引言

了解特定生物學(xué)過(guò)程，不僅要知道所涉及的分子種類，還需要明晰它們的含量及動(dòng)態(tài)變化。具有高通量、高靈敏度、高線性范圍和較高準(zhǔn)確度的定量蛋白質(zhì)組學(xué)近年來(lái)發(fā)展迅速，在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用日益廣泛［1～4］。按照不同的定量原理，定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可分為依據(jù)凝膠成像和液相色譜-質(zhì)譜信號(hào)強(qiáng)度兩種定量技術(shù)。前者主要利用雙向電泳(銀染或考染)或雙向熒光差異凝膠電泳(DIGE)［5］，在蛋白質(zhì)水平上進(jìn)行定量分析，蛋白質(zhì)的定量和序列鑒定是兩個(gè)獨(dú)立的步驟，其優(yōu)點(diǎn)是差異蛋白被真正分離，并且更為直觀，但是操作繁瑣耗時(shí)，各種翻譯后修的存在使得“單一”蛋白點(diǎn)上有可能是分子量和等電點(diǎn)非常接近的蛋白質(zhì)的混合物。隨著多維液相色譜-質(zhì)譜技術(shù)和數(shù)據(jù)處理軟件的不斷發(fā)展，基于質(zhì)譜的定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)逐漸成為該領(lǐng)域的主流技術(shù)。

基于質(zhì)譜的定量分析是將蛋白質(zhì)通過(guò)特異性酶切水解成適于質(zhì)譜檢測(cè)的肽段，在進(jìn)行肽段序列鑒定的同時(shí)提取質(zhì)譜信號(hào)的強(qiáng)度信息，然后將來(lái)自肽段的定量信息還原成蛋白質(zhì)的定量信息。根據(jù)定量分析目的，又分為以三重四級(jí)桿質(zhì)譜為平臺(tái)的絕對(duì)定量分析(SRM)［6］和在其它串聯(lián)質(zhì)譜上實(shí)現(xiàn)的相對(duì)定量分析［7］。絕對(duì)定量分析是對(duì)已知蛋白和肽段的靶向測(cè)定，靈敏度高，抗干擾性強(qiáng)，但通量較小并需要合成目標(biāo)肽段。目前應(yīng)用更為廣的方法是在高分辨質(zhì)譜上同時(shí)實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)的鑒定和定量分析，按照定量分析策略，后者又可分為穩(wěn)定同位素標(biāo)記定量分析［8］和無(wú)標(biāo)記定量分析［9］兩類［10～12］。典型的標(biāo)記定量分析方法有兩種:需要含同位素標(biāo)記的細(xì)胞培養(yǎng)基(SILAC)［13］和需要增加蛋白質(zhì)處理步驟的iTRAQ［14］方法，雖然成本較高，但由于其穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性較高，目前被許多研究者在發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)組學(xué)中所采用。非標(biāo)定量分析方法包括信號(hào)強(qiáng)度法和譜圖計(jì)數(shù)法，其在實(shí)驗(yàn)操作上與定性分析相似，但要求復(fù)雜的數(shù)據(jù)提取和處理方法［15］，并且每個(gè)樣品需至少平行測(cè)定3次，以消除各種偶然誤差，耗時(shí)較長(zhǎng)。SILAC和iTRAQ分別根據(jù)一級(jí)和二級(jí)質(zhì)譜信號(hào)進(jìn)行定量分析。近年來(lái)，根據(jù)三級(jí)串聯(lián)質(zhì)譜信號(hào)定量分析和各種非數(shù)據(jù)依賴型采集方法的發(fā)展很快［16］。

但是，在一些生物學(xué)項(xiàng)目中，研究者也希望根據(jù)單次的蛋白質(zhì)組學(xué)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果，得到某些目標(biāo)蛋白含量的粗略比較，為下一步實(shí)驗(yàn)提供研究方向和決定是否進(jìn)行定量分析蛋白質(zhì)組學(xué)分析。因此，如果在蛋白質(zhì)組的定性鑒定實(shí)驗(yàn)中提取出半定量分析信息，將有助于滿足這樣的實(shí)驗(yàn)需求。在Protein-pilot搜庫(kù)軟件輸出的肽段匯總列表中，除肽段序列、誤差和保留時(shí)間等指標(biāo)外，還包括前體離子強(qiáng)度的信息，即總打擊計(jì)數(shù)(counts)，它是通過(guò)對(duì)色譜峰上所有采樣點(diǎn)的數(shù)據(jù)求和所得。為便于不同實(shí)驗(yàn)條件的比較，該值以每秒打擊計(jì)數(shù)(cps)的形式表示，如果該離子被多次掃描，在刪除重復(fù)項(xiàng)之后，系統(tǒng)會(huì)留下最高值。無(wú)標(biāo)記定量分析中通常采用色譜峰的峰面積定量分析，但需要對(duì)每個(gè)肽段逐一進(jìn)行提取，而利用cps的優(yōu)勢(shì)在于該值可自動(dòng)輸出，方便快捷。用該值近似表示肽段含量涉及以下問(wèn)題:(1)由于是定性鑒定實(shí)驗(yàn)，一級(jí)譜掃描時(shí)間較短，取點(diǎn)較少，保留時(shí)間的微小變化可能對(duì)結(jié)果產(chǎn)生較大影響，因此需進(jìn)行平行實(shí)驗(yàn);(2)需證明前體離子信號(hào)強(qiáng)度與蛋白質(zhì)含量是否線性相關(guān);(3)需考察單一肽段的離子強(qiáng)度和所有肽段離子強(qiáng)度之和哪一種更為準(zhǔn)確及適用條件;(4)被檢測(cè)肽段數(shù)目如何隨蛋白質(zhì)濃度變化?；谝陨蠁?wèn)題，本研究將3種標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)按照濃度呈2～4倍的增加梯度配成10-10～10-7mol/L的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)樣品濃度重復(fù)測(cè)定3次，考察3次平行實(shí)驗(yàn)中肽段強(qiáng)度的變化幅度及被檢測(cè)肽段數(shù)量、單一肽段強(qiáng)度及所有肽段強(qiáng)度之和與蛋白質(zhì)濃度的關(guān)系，分析上述指標(biāo)的影響因素，為利用不同樣品單次測(cè)定的質(zhì)譜強(qiáng)度(cps值)半定量分析比較蛋白質(zhì)相對(duì)含量的可能性和應(yīng)用條件提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

2　實(shí)驗(yàn)部分

2．1儀器與試劑

Eksigent nanoLC-UltraTM2D二維納升液相色譜系統(tǒng)、TripleTOF 600高分辨質(zhì)譜儀、Protein Pilot 4．5軟件(AB SCIEX，美國(guó));真空冷凍干燥機(jī)(Thermo Savant，美國(guó))。

牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、溶菌酶C(LYZC)和胰蛋白酶(Sigma公司);其它試劑至少為分析純;實(shí)驗(yàn)用水為超純水(18．2 MΩcm)。

2．2樣品處理

稱取1．00 mg各種蛋白粉末，分別加入25 mmol/L NH4CO3配制成1 mg/mL蛋白溶液，按照蛋白與酶質(zhì)量比為40∶1的比例加入胰酶，在37℃水浴酶切16 h，最后將得到的酶切液逐級(jí)稀釋，配制成1～1024 fmol/7μL的樣品。

2．3反相色譜‐Trip leTOF分析

將3種蛋白質(zhì)的酶切液首先上樣到C18預(yù)柱(100μm×3 cm，3μm，15μm)上，上樣量7μL，流速2μL/min，沖洗脫鹽10min。分析柱為C18反相色譜柱(75μm×15 cm，3μm，120，ChromXP Eksigent)，流動(dòng)相A為水-乙腈(含0．1%甲酸)(98∶2，V/V)，流動(dòng)相B為乙腈-水(含0．1%甲酸)(98∶2，V/V)。梯度洗脫:0～2 min，5%B;2～18 min，5%～40%B;18～24 min，80%B;24～30 min，5%B。質(zhì)譜分析采用TripleTOF 5600結(jié)合納升噴霧III離子源，噴霧電壓為2．4 kV，氣簾氣壓力為30 Psi，霧化氣壓力為5 Psi，加熱溫度為150℃，掃描方式為信息依賴的采集工作模式(Information dependent analysis，IDA)。

2．4數(shù)據(jù)分析

質(zhì)譜采集到的原始wiff圖譜文件，采用Protein Pilot Software v．4．5(AB SCIEX，美國(guó))軟件對(duì)3種蛋白質(zhì)進(jìn)行檢索分析，檢索參數(shù)設(shè)置為胰蛋白酶酶切和生物學(xué)修，假陽(yáng)性率控制為1%FDR。

3　結(jié)果與討論

3．1標(biāo)準(zhǔn)品含量與檢出肽段數(shù)目的正相關(guān)性

離子信號(hào)強(qiáng)度和圖譜數(shù)目與蛋白質(zhì)含量的關(guān)系的研究較多，發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)被檢測(cè)到肽段數(shù)目與其含量密切相關(guān)，因此在不同體系中的同一蛋白質(zhì)，其肽段的檢出數(shù)目是其相對(duì)含量的一個(gè)最簡(jiǎn)單指標(biāo)。本研究考察BSA，OVA和LYZC在上樣量從1 fmol增至1 pmol過(guò)程中被檢測(cè)到的肽段數(shù)目的變化。如圖1A所示，BSA總量為1 fmol時(shí)，3次平行實(shí)驗(yàn)測(cè)得肽段數(shù)目分別為1，1和3;BSA總量為2 fmol時(shí)，肽段數(shù)目為3，6和6;BSA總量繼續(xù)增加2倍(4 fmol)時(shí)，肽段數(shù)量變化不大，分別為5，5和6;但是當(dāng)BSA總量繼續(xù)增加后，肽段數(shù)目均顯著增加;除在64和128 fmol有1次檢測(cè)到的肽段數(shù)均為26個(gè)外，在高含量組所檢測(cè)到的肽段數(shù)目總是高于低含量組，但在相同濃度組內(nèi)具有一定偶然性。在溶菌酶C上也觀察到類似現(xiàn)象，即被檢測(cè)的肽段數(shù)目隨蛋白質(zhì)含量增加(圖1B)，但含量起點(diǎn)升高，即在8 fmol含量時(shí)，在3次實(shí)驗(yàn)中只有1次檢測(cè)到1個(gè)肽段，而從16 fmol增至64 fmol時(shí)，肽段數(shù)量增加并不明顯;從256 fmol增至1024 fmol時(shí)，肽段數(shù)目增加顯著。卵清蛋白的肽段數(shù)目隨濃度變化的趨勢(shì)(數(shù)據(jù)未給出)與溶菌酶C相近，在16 fmol時(shí)，有1個(gè)肽段檢出;含量高于128fmol時(shí)，檢出肽段數(shù)目顯著增加。以上結(jié)果表明，對(duì)同一蛋白質(zhì)而言，在濃度超過(guò)一定閾值后，其被檢測(cè)到的肽段數(shù)目與它的量具有正相關(guān)性，該閾值應(yīng)與蛋白質(zhì)的種類、結(jié)構(gòu)、其酶切肽段的化學(xué)性質(zhì)和是否容易電離等因素有關(guān)。對(duì)于不同蛋白質(zhì)不能簡(jiǎn)單比對(duì)，但同一蛋白質(zhì)在不同體系中被檢測(cè)到的肽段數(shù)目差異反映了其含量的不同。此外，肽段的前體離子強(qiáng)度還可提供進(jìn)一步的半定量分析信息。

圖1　蛋白質(zhì)上樣量對(duì)檢出肽段數(shù)目的影響Fig．1　Influence of protein amounts on the number of detected peptides (A)牛血清白蛋白(B)溶菌酶C。(A)Bovine serum albumin(BSA);(B)Lysozyme C(LYZC)．

圖2　牛血清白蛋白的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig．2　Standard curve for BSA A:1－1024 fmol;B:1－16 fmol．

3．2標(biāo)準(zhǔn)品上樣量與前體離子強(qiáng)度之和的相關(guān)性

用cps表示離子強(qiáng)度，考察了蛋白質(zhì)所有檢出肽段的cps值之和與其含量的關(guān)系，首先驗(yàn)證了3種蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品的總離子強(qiáng)度之和與其上樣量間的關(guān)系。如圖2所示，BSA各肽段的離子強(qiáng)度之和在1～1024 fmol的上樣量范圍內(nèi)與上樣量呈線性關(guān)系，回歸系數(shù)為0．985，但是在低上樣量(1～16 fmol)時(shí)線性關(guān)系不好，2與4 fmol的信號(hào)相近。此外，雖然3次平行測(cè)定實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)偏差較大，但在上樣量的遞增過(guò)程中，所有梯度實(shí)驗(yàn)的上樣量與離子強(qiáng)度信號(hào)之和都具有正相關(guān)性，即可以用BSA各肽段離子強(qiáng)度之和表示其含量?？紤]到同一樣品信號(hào)強(qiáng)度的最高值與最低值之間的比值小于1．5倍，可以認(rèn)為如果在不同樣品中某蛋白質(zhì)的總肽段信號(hào)強(qiáng)度之和變化超過(guò)3倍(極差)，則可以忽略儀器在測(cè)定過(guò)程中色譜峰取點(diǎn)波動(dòng)所產(chǎn)生的影響，認(rèn)為含量有變化。對(duì)于卵清蛋白和溶菌酶C也觀察到了類似關(guān)系，但線性范圍較窄，重現(xiàn)性亦較差。

3．3單一肽段離子打擊數(shù)與上樣量的相關(guān)性

由以上的實(shí)驗(yàn)結(jié)果和分析可知，蛋白質(zhì)被檢測(cè)到的肽段數(shù)目與上樣量有關(guān)，所以使用肽段的離子強(qiáng)度之和表示蛋白質(zhì)含量也會(huì)受到上樣量的影響。對(duì)于3種蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品，所檢測(cè)到肽段的最小打擊數(shù)分別為152，164和175，進(jìn)一步隨機(jī)分析其它樣品的數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)被檢測(cè)肽段的最低打擊數(shù)約為50，因此，打擊數(shù)150已接近能夠被檢測(cè)的極限，而只有打擊數(shù)大于1000時(shí)才開始呈現(xiàn)較強(qiáng)的濃度-信號(hào)強(qiáng)度之間的線性關(guān)系和較小的隨機(jī)誤差，而不同序列肽段質(zhì)譜檢測(cè)的靈敏度不同，此結(jié)果表明，可以利用類似SRM的方法選擇最靈敏肽段進(jìn)相對(duì)定量分析。

由圖3可見(jiàn)，以BSA為例，最先被檢測(cè)到的酶切肽段為L(zhǎng)VNELTEFAK，并且在各組結(jié)果中其離子強(qiáng)度均為最高，在進(jìn)樣量為1024 fmol時(shí)，該肽段離子強(qiáng)度約占總57條肽段的總離子強(qiáng)度的22%，用該肽段進(jìn)行定量分析的效果優(yōu)于使用離子強(qiáng)度之和，回歸系數(shù)為0．996。此外，肽段QTALVELLK的定量分析效果也較好，回歸系數(shù)為0．995。在溶菌酶C中，最靈敏和次靈敏肽段分別為GTDVQAWIR和NTDGSTDYGILQINSR，它們?cè)谏蠘恿?56 fmol時(shí)cps值大于1000，線性范圍為256～1024 fmol。卵清蛋白的最靈敏肽段為L(zhǎng)TEWTSSNVMEER，也是在256～1024 fmol時(shí)呈現(xiàn)穩(wěn)定的線性范圍。以上結(jié)果說(shuō)明，低濃度或低響應(yīng)時(shí)，由于電離的隨機(jī)性和離子傳輸過(guò)程中的損失對(duì)響應(yīng)信號(hào)的影響不可忽略，而在高濃度時(shí)這兩種影響的損失占總離子的比重較小，即可呈現(xiàn)較強(qiáng)的線性關(guān)系。此外，離心管和內(nèi)插管等容器對(duì)蛋白質(zhì)和多肽的吸附無(wú)法完全避免，在蛋白質(zhì)和多肽濃度較低時(shí)這些因素對(duì)分析結(jié)果的影響相對(duì)較大。因此，如果蛋白質(zhì)具有很靈敏的檢測(cè)肽段，用該肽段的離子強(qiáng)度表示蛋白質(zhì)的含量更為準(zhǔn)確。

圖3　肽段LVNELTEFAK和QTALVELLK的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig．3　Standard curves for peptide LVNELTEFAK and QTALVELLK

選擇肽段時(shí)應(yīng)注意，蛋白質(zhì)序列的多樣性也可能影響分析結(jié)果。例如，肽段QTALVELLK還會(huì)發(fā)生N端的焦谷氨酸化和絲氨酸的脫水以及胰酶漏切肽段KQTALVELLK，而肽段KQTALVELLK還會(huì)發(fā)生N端的甲?；⒁阴；桶奔柞；@種序列的多樣性對(duì)酶解過(guò)程的平行性和酶的質(zhì)量穩(wěn)定性提出了更高要求。此外，有些肽段在濃度較高時(shí)還會(huì)發(fā)生鈉離子化［17］。本方法不適于低質(zhì)譜響應(yīng)的蛋白和肽段，在采用非數(shù)據(jù)依賴性采集技術(shù)，如全部理論碎片離子的連續(xù)窗口采集(SWATH)技術(shù)［18］，有可能對(duì)這些肽段更為有效，但SWATH技術(shù)要求4次質(zhì)譜分析，也比較耗時(shí)。本研究表明，對(duì)于低濃度和低質(zhì)譜響應(yīng)肽段，無(wú)論采用哪種標(biāo)記或非標(biāo)定量分析方法，都無(wú)法完全避免生物學(xué)吸附和質(zhì)譜分析過(guò)程中的不確定性。

4　結(jié)論

利用TripleTOF 5600高分辨質(zhì)譜儀，分析牛血清白蛋白等3種蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品，研究了質(zhì)譜離子強(qiáng)度與蛋白質(zhì)樣品相對(duì)含量的相關(guān)性。結(jié)果表明，蛋白質(zhì)濃度或上樣量的增加與肽段檢出數(shù)量、肽段cps數(shù)和總肽段cps數(shù)目之和具有正相關(guān)性，但線性范圍起點(diǎn)的cps數(shù)要超過(guò)1000，否則樣品在電離和離子傳輸階段的損失不能忽視。平行實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)cps數(shù)大于1000時(shí)，同一肽段在3次測(cè)量中cps的波動(dòng)一般在0．5～1．5倍之間，將所有肽段cps數(shù)求和可降低波動(dòng)值。以上結(jié)果表明，當(dāng)不同樣品中相同蛋白質(zhì)的總離子強(qiáng)度之和的變化值超過(guò)3倍，并結(jié)合檢出肽段數(shù)目，可為蛋白質(zhì)半定量分析比較提供參考，而利用最靈敏肽段可提供更準(zhǔn)確的定量分析關(guān)系。

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16ZHANGWei．Chinese J．Anal．Chem．，2014，42(12):1859－1868張偉．分析化學(xué)，2014，42(12):1859－1868

17Clarke D J，Campopiano D J．Analyst，2015，140(8):2679－2686

18Schubert O T，Gillet L C，Collins B C，Navarro P，Rosenberger G，WolskiW，Lam H，Amodei D，Mallick P，MacLean B，Aebersold R．Nat．Protoc．，2015，10(3):426－441

2016第十屆中國(guó)科學(xué)儀器發(fā)展年會(huì)(ACCSI 2016)第一輪通知

“2016第十屆中國(guó)科學(xué)儀器發(fā)展年會(huì)(Annual Conference of China Scientific Instruments 2016，簡(jiǎn)稱ACCSI 2016)”，將于2016年4月22日在北京隆重召開。

第十屆ACCSI2016將繼續(xù)秉承“科學(xué)儀器行業(yè)的達(dá)沃斯”論壇的高端定位，以研究和探討科學(xué)儀器行業(yè)以及相關(guān)產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀、追蹤發(fā)展趨勢(shì)、促進(jìn)行業(yè)交流為宗旨。

在“新一代信息技術(shù)與制造業(yè)深度融合”的大趨勢(shì)下，作為“立國(guó)之本、科技強(qiáng)國(guó)之基”的科學(xué)儀器行業(yè)有哪些新趨勢(shì)、新熱點(diǎn)、新應(yīng)用，是業(yè)界管理者共同關(guān)心的問(wèn)題。在國(guó)家十三五的開局之年，會(huì)議將邀請(qǐng)業(yè)內(nèi)專家、行業(yè)領(lǐng)袖深度解讀過(guò)去10年科學(xué)儀器行業(yè)發(fā)展的經(jīng)驗(yàn)，與科學(xué)儀器制造企業(yè)管理者、研發(fā)者一起，從運(yùn)營(yíng)、技術(shù)、和市場(chǎng)角度，共同探討科學(xué)儀器行業(yè)趨勢(shì)，新機(jī)遇以及如何抓住機(jī)遇。

主辦單位:

中國(guó)儀器儀表行業(yè)協(xié)會(huì);中國(guó)儀器儀表學(xué)會(huì);中國(guó)儀器儀表學(xué)會(huì)分析儀器分會(huì);儀器信息網(wǎng)(www．instrument．com．cn)

協(xié)辦單位:

首都科技條件平臺(tái);我要測(cè)網(wǎng)(www．woyaoce．cn)

ACCSI2016參會(huì)理由

理由一:十周年盛會(huì)，不一樣的精彩分享;理由二:行業(yè)十年騰飛路，引領(lǐng)行業(yè)發(fā)展走向;理由三:掌握行業(yè)發(fā)展數(shù)據(jù)借勢(shì)發(fā)揮企業(yè)優(yōu)勢(shì);理由四:調(diào)研數(shù)據(jù)指導(dǎo)做大科學(xué)儀器市場(chǎng)的“蛋糕”;理由五:行業(yè)高端人式對(duì)話，解析行業(yè)脈膊;理由六:助推儀器成果轉(zhuǎn)化，鼓勵(lì)創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)同行;理由七:借力資本市場(chǎng)助力企業(yè)騰飛;理由八:必須知道的互聯(lián)網(wǎng)+……;

年會(huì)網(wǎng)站:http://accsi．instrument．com．cn

會(huì)務(wù)組聯(lián)系方式

電話:4000074077傳真:010-82051730

會(huì)議贊助:010-51654077-8044齊先生

報(bào)名參會(huì):010-51654077-8055杜女士

Email:accsi@instrument．com．cn

2016中國(guó)科學(xué)儀器發(fā)展年會(huì)組委會(huì)

2015年9月

(儀器信息網(wǎng)供稿)

Application of High Resolution Time-of-Flight Mass Spectroscopy in Relative Quantitative Analysis in Proteomics

HONG Xiao-Yu1，WANG Hao1，XU Jin-Ling1，LIShui-Ming2，WANG Yong*2
1(College of Life Science，Shenzhen Key Laboratory of Microorganism，Shenzhen University，Shenzhen 518060，China)2(College of Life Science，Shenzhen Key Laboratory of Marine Bioresources and Ecology，Shenzhen University，Shenzhen 518060，China)

By using the high resolution mass spectrometer TripleTOF 5600，three kinds of standard proteins including bovine serum albumin(BSA)，ovalbumin(OVA)and lysozyme C(LYZC)were analyzed，and the correlationship between the ion intensity ofmass spectrometry and the relative content of protein sample was investigated．The protein samples were digested by trypsion and diluted to 1－1024 fmol in 7μL．The ion counts per second(cps)were used to stand for the amounts of proteins and peptides．Then the correlation between sum of ion intensity(cps)of all the peptides，number of peptides detected and the amountof proteinswas investigated．By comparing the change of values of the same sample in three parallel experiments，a linear relationship between these indexes and the amount of proteinswithin 1－1024 fmolwas found when the cpswas more than 1000．Usually，themaximal ion intensity was nomore than 1．5 times of theminimum value for same peptide in triplicate experiments，which suggested that the 3 times or more change of ion intensity was the minimum threshold to determine the differences of proteins amounts in different samples．This study provides a relative quantitative analysis method using qualitative data of high resolution and high scan speed mass spectrometry，which can quickly and easily provide reference for biological and medical research．

Quantitative proteomics;High resolution time-of-flightmass spectrometry;Counts per second; Signal intensity;Label-free quantification

22 September 2015;accepted 12 December 2015)

10．11895/j．issn．0253-3820．150751

2015-09-22收稿;2015-12-12接受

本文系深圳市科技項(xiàng)目(Nos．JSGG20140703163838793，20150006)資助

*E-mail:wyong@szu．edu．cn