甘蔗小分子量熱激蛋白（sHSP）基因克隆及水分脅迫下的表達(dá)分析

梁潘霞黃杏李楊瑞

（1. 廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院資源與環(huán)境研究所，南寧 530007；2. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院甘蔗研究中心 農(nóng)業(yè)部廣西甘蔗生物技術(shù)與遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室廣西甘蔗遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南寧 530007）

甘蔗小分子量熱激蛋白（sHSP）基因克隆及水分脅迫下的表達(dá)分析

梁潘霞1黃杏2李楊瑞2

（1. 廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院資源與環(huán)境研究所，南寧 530007；2. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院甘蔗研究中心 農(nóng)業(yè)部廣西甘蔗生物技術(shù)與遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室廣西甘蔗遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南寧 530007）

為甘蔗抗逆脅迫機(jī)制研究提供依據(jù)，以甘蔗葉片總RNA為模板，通過(guò) RT-PCR 擴(kuò)甘蔗小分子量熱激蛋白（sHSP）基因的cDNA，采用生物信息學(xué)軟件分析所克隆基因的編碼蛋白特性，并用熒光定量PCR分析該基因的表達(dá)情況。結(jié)果表明，克隆得到的cDNA片段長(zhǎng)度為659 bp，包括1個(gè)459 bp的開(kāi)放閱讀框，編碼132個(gè)氨基酸。同源性分析表明，sHSP基因在14個(gè)不同植物中的一致性為69%-96%。甘蔗sHSP具有典型的HSP結(jié)構(gòu)域，并且非常保守。實(shí)時(shí)熒光定量分析結(jié)果表明，隨著甘蔗干旱脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)，sHSP基因表達(dá)量緩慢下降后明顯增加，干旱脅迫加硅處理的甘蔗葉片sHSP基因表達(dá)量峰值出現(xiàn)比干旱處理推遲48 h。說(shuō)明sHSP受到了干旱脅迫的誘導(dǎo)表達(dá)，同時(shí)硅能提高甘蔗抗旱性。

甘蔗；干旱；硅；熱激蛋白

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.10.020

甘蔗是我國(guó)乃至世界重要的糖料作物，也是重要的生物能源作物。甘蔗作為廣西農(nóng)業(yè)主要的經(jīng)濟(jì)作物之一，對(duì)農(nóng)民增收起重要的推動(dòng)作用。但廣西地區(qū)甘蔗大部分種植于耕作層淺薄且缺乏灌溉條件的丘陵旱坡地上，而由于氣候變化異常，尤其是季節(jié)性干旱給甘蔗生產(chǎn)造成巨大的損失［1］。研究表明，甘蔗是喜硅（Si）作物，施用適量Si能促進(jìn)甘蔗的光合作用［2］，提高甘蔗產(chǎn)量和糖分含量［3］，增強(qiáng)甘蔗抗逆性及對(duì)土壤具有一定的改良作用［4］，但迄今未見(jiàn)有關(guān)硅增強(qiáng)甘蔗抗旱性分子機(jī)理研究的報(bào)道。

低分子量熱激蛋白（small heat shock proteins，sHSP）在原核生物和真核生物中廣泛存在，熱激蛋白早期研究證實(shí)與高溫脅迫有關(guān)［5］，隨著研究的深入，低溫、氧化劑、干旱脅迫也可誘導(dǎo)sHSP基因的表達(dá)，說(shuō)明sHSP與植物的逆境脅迫存在一定的關(guān)系，是植物在逆境下產(chǎn)生的應(yīng)激蛋白［6］。向日葵在水分脅迫時(shí)HSP被大量表達(dá)，并與水分喪失呈正相關(guān)關(guān)系［7］；轉(zhuǎn)sHSP17.7水稻干旱處理后植株存活率高達(dá)70%［8］；擬南芥干旱敏感突變株小分子熱激蛋白基因HSP17.4表達(dá)量很低，熱誘導(dǎo)后則大量表達(dá)，并提高了抗旱性［9］。目前已從玉米［10］、花生［11］、杧果［12］、小麥［13］、巴西橡膠樹(shù)［14］等植物中克隆出了熱激蛋白，但還未見(jiàn)甘蔗小分子熱激蛋白基因的克隆研究報(bào)道。為此，本研究利用RT-PCR克隆了甘蔗sHSP基因，通過(guò)熒光定量技術(shù)初步探明HSP基因在甘蔗干旱脅迫下的表達(dá)情況，旨為深入探索HSP基因在甘蔗抗旱分子機(jī)理研究提供證據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1植物材料 選取新臺(tái)糖22號(hào)（ROC22）為研究材料，沙培幼苗長(zhǎng)至2-3片真葉后，選取長(zhǎng)勢(shì)健壯且生長(zhǎng)一致的幼苗，轉(zhuǎn)移到不透光的塑料箱中，每箱裝有25 L硅濃度為1.7 mol/L 的1/2 Hoagland營(yíng)養(yǎng)液（營(yíng)養(yǎng)液pH用H2SO4稀溶液調(diào)至5.8）。當(dāng)幼苗在含硅的1/2 Hoagland營(yíng)養(yǎng)液中生長(zhǎng)至5-6片真葉時(shí)，加入200 g/L的PEG-6000進(jìn)行模擬干旱脅迫（Si+PEG）。以不加硅的1/2 Hoagland營(yíng)養(yǎng)液培養(yǎng)的苗進(jìn)行模擬干旱處理設(shè)為PEG，無(wú)硅和模擬干旱脅迫的為對(duì)照（CK），分別在模擬干旱處理0、18、 40、63、96和144 h取樣（+1葉），將采好的樣品立即保存于-80℃冰箱備用。

1.1.2試劑 大腸桿菌DH5α、BL21、pMD18-T載體、凝膠回收試劑盒購(gòu)自Bioer公司；M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶、均購(gòu)自TaKaRa寶生物工程有限公司（中國(guó)大連）公司，dNTP、Taq DNA聚合酶、硅酸鈉購(gòu)自上海生工，Trizol購(gòu)自Invitrogen公司。

1.2方法

1.2.1總RNA提取及cDNA合成 提取甘蔗葉片總RNA，具體參照Invitrogen公司的Trizol說(shuō)明書(shū)，cDNA合成用M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶，逆轉(zhuǎn)錄引物為Oligo（dT）18：5'-GGCCACGCGTCG ACTAGTAC（T）18-3'，具體步驟按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，完成后取5 μL PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠電泳檢查并用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)cDNA濃度，最后將各處理cDNA濃度稀釋至同一濃度。

1.2.2HSP基因的克隆 依據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中已知的高粱、玉米、水稻、小麥等植物sHSP基因的核酸序列為參照，利用DNAMAN 軟件在基因起始密碼子位置設(shè)計(jì)HSP基因上游簡(jiǎn)并引物HSP：5'-ATGTCGCT（C/G）GTGAG（G/T）CGCAGCA（A/G）CG-3'，下游引物為逆轉(zhuǎn)錄加尾引物 3 side：5'-GGCCACGCGTCGACTAGTAC-3'。

擴(kuò)增甘蔗HSP基因的PCR體系為25 μL，模板以不同處理的cDNA 等量混合樣。PCR擴(kuò)增參數(shù)為：95℃ 5 min；95℃ 40 s，58℃ 45 s，72℃ 2 min，共35個(gè)循環(huán)；72℃延伸10 min。PCR結(jié)束后加2μL核酸染料混勻后經(jīng)1.5%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，檢測(cè)條帶大小正確后，回收純化目的條帶，連接到pMD18-T載體，熱激轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞大腸桿菌DH5α，通過(guò)藍(lán)白斑篩選挑取白色菌落，經(jīng)菌液PCR驗(yàn)證為陽(yáng)性克隆子后送上海生工測(cè)序，測(cè)序結(jié)果經(jīng)拼接后在NCBI BLAST進(jìn)行比對(duì)。

1.2.3HSP基因生物信息學(xué)分析 用BioXM2.6軟件推導(dǎo)該基因氨基酸序列，在NCBI的BLAST上進(jìn)行相似性比對(duì)；Clustalx軟件進(jìn)行多重序列比對(duì)；MEGA6軟件構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)；在線網(wǎng)站（http：//isoelectric. ovh.org/）預(yù)測(cè)甘蔗HSP的蛋白質(zhì)分子量和等電點(diǎn)；用WoLF PSORT在線軟件對(duì)該基因進(jìn)行亞細(xì)胞定位；用SOSUI signal軟件預(yù)測(cè)基因的信號(hào)肽；ExPASy Proteomics Server預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)的親水性和跨膜結(jié)構(gòu)；SOPMA軟件預(yù)測(cè)基因的二級(jí)結(jié)構(gòu)。

1.2.4HSP 基因的表達(dá)分析 根據(jù)獲得的甘蔗HSP基因的開(kāi)放閱讀框序列設(shè)計(jì)實(shí)時(shí)熒光定量引物HSPQF：5'-AGCATCCAGATCTCCGGTTG-3'、HSPQR：5'-GACATACCAAAGCAGAGTAACCA-3'；以甘蔗管家基因 25S作內(nèi)參，設(shè)計(jì)內(nèi)參引物25S F：5'-GCAGCCAAGCGTTCATAGC-3'、25S R：5'-CCAGCTCACGTTCCCTATTG-3'，實(shí)時(shí)熒光定量PCR在ABI Stepone plus型熒光定量PCR儀上進(jìn)行，PCR反應(yīng)體系為20 μL，具體方法參照天根公司熒光定量試劑盒Real Master Mix（SYBR GreenⅠ）說(shuō)明書(shū)。PCR擴(kuò)增參數(shù)為：95℃ 10 min；95℃ 15 s，60℃ 1 min，72℃ 30 s，共40個(gè)循環(huán)。所有樣品在同一臺(tái)PCR儀上進(jìn)行擴(kuò)增，每個(gè)樣品重復(fù)3次，根據(jù)熒光PCR擴(kuò)增CT值，按照 2-ΔΔCt法計(jì)算出基因相表達(dá)量。

2　結(jié)果

2.1sHSP基因全長(zhǎng)cDNA克隆

以甘蔗品種ROC22 幼苗在模擬干旱處理?xiàng)l件下，樣品葉片的混合RNA逆轉(zhuǎn)錄cNDA為模板，用簡(jiǎn)并引物HSP和3 side進(jìn)行PCR擴(kuò)增，產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果（圖1）顯示，從cDNA中擴(kuò)增得到長(zhǎng)約600 bp的條帶。對(duì)得到的序列（登錄號(hào)為JQ712579）通過(guò)GenBank Blast搜索比對(duì)，顯示結(jié)果為小分子量熱激蛋白（sHSP）。sHSP全長(zhǎng)659 bp，包含啟始密碼ATG 和終止密碼TGA，為sHSP基因全長(zhǎng)序列。該基因cDNA包含一個(gè)459 bp（從第1-459 bp）的完整開(kāi)放閱讀框（Open reading frame，ORF），編碼152 個(gè)氨基酸，還包含200 bp的3'非編碼區(qū)，該區(qū)域有個(gè)19 bp ployA 尾巴。

圖1　甘蔗sHPS序列擴(kuò)增結(jié)果

2.2sHSP基因生物信息學(xué)分析

用在線網(wǎng)站（http：//isoelectric.ovh.org/）預(yù)測(cè)sHSP基因所編碼的氨基酸序列的蛋白質(zhì)分子量為17.15 kD，等電點(diǎn)為5.83。sHSP亞細(xì)胞定位于細(xì)胞質(zhì)。SOSUIsignal軟件預(yù)測(cè)sHSP的信號(hào)肽，顯示該基因不含信號(hào)肽，為可溶性蛋白；sHSP疏水性預(yù)測(cè)最小值為-4.5，最大值為4.5，sHSP無(wú)跨膜區(qū)域。在氨基酸組成中，部分氨基酸使用頻率較高，如Val、Glu、Ser分別占總氨基酸的13.60%、10.53%和9.87%，一些出現(xiàn)頻率則較低，如His、Cln和Trp僅占1.97%、1.32%和1.32%。利用SOPMA 軟件完整的預(yù)測(cè)sHSP的二級(jí)結(jié)構(gòu)，結(jié)果顯示，出現(xiàn)38個(gè)α-螺旋占25.00%，隨機(jī)卷曲43個(gè)占48.03%，延伸鏈占21.05%，β-轉(zhuǎn)角（5個(gè)）只占5.92%。另外sHSP序列沒(méi)有糖基化位點(diǎn)，有6個(gè)絲氨酸和2個(gè)蘇氨酸磷酸化位點(diǎn)。

甘蔗sHSP基因的氨基酸序列與其它物種同源性比較發(fā)現(xiàn)，除N端45個(gè)氨基酸序列的保守性較低外，在熱激蛋白功能區(qū)域非常保守，說(shuō)明sHSP在進(jìn)化過(guò)程中相當(dāng)保守。利用NCBI Blast 檢索甘蔗sHSP基因核苷酸序列和編碼氨基酸序列同源的物種，結(jié)果（圖2）顯示，甘蔗sHSP基因與其它物種的核苷酸序列的同源性在79%-96%，與高粱最高為96%，其次是玉米93%。sHSP基因氨基酸序列與其它物種相比同源在69%-96%之間，其中與大豆的同源性最低為69%，與高粱的同源性最高為96%，其次是玉米為89%。不同物種sHSP基因序列的同源性較高，說(shuō)明sHSP基因在進(jìn)化過(guò)程中相當(dāng)保守。用MEGA軟件，選擇Neighbor-Joining方法構(gòu)建sHSP蛋白基因氨基酸序列進(jìn)化樹(shù)，結(jié)果（圖3）顯示，甘蔗sHSP與高粱的進(jìn)化關(guān)系最近，與李、擬南芥等物種sHSP進(jìn)化關(guān)系較遠(yuǎn)。

2.3sHSP基因在干旱脅迫下表達(dá)量分析

圖2　八種植物sHSP氨基酸序列多重比對(duì)

圖3　甘蔗sHSP基因與其它物種的同源性分析

圖4　熒光定量PCR檢測(cè)sHSP基因在甘蔗水分脅迫中的表達(dá)

以甘蔗管家基因25S作為內(nèi)參，利用熒光定量技術(shù)分析了sHSP基因在甘蔗不同處理干旱脅迫下葉中的轉(zhuǎn)錄水平，結(jié)果（圖4）發(fā)現(xiàn)在干旱脅迫40 h之前兩個(gè)處理的sHSP表達(dá)量表現(xiàn)一樣，都出現(xiàn)緩慢下降，但同一處理不同時(shí)間之間該基因的表達(dá)量有顯著差異，在處理40 h干旱脅迫比對(duì)照減少了55.0%，硅加模擬干旱脅迫比對(duì)照減少了94.0%，但兩個(gè)處理模擬干旱脅迫40 h后sHSP的表達(dá)量都顯著升高，模擬干旱脅迫處理64和96 h時(shí)分別比對(duì)照升高了4.18和13.56倍，并在干旱脅迫144 h時(shí)迅速下降；而硅加干旱脅迫雖然在處理40 h后sHSP的表達(dá)量也迅速增加，但速度較慢，在處理64和96 h時(shí)分別比對(duì)照升高了2.02和4.80倍，在處理144 h時(shí)才出現(xiàn)最大值，比對(duì)照增加了44.64倍。這說(shuō)明sHSP受到了模擬干旱脅迫的誘導(dǎo)表達(dá)，與干旱脅迫有一定的關(guān)系，另外干旱脅迫加硅比干旱處理推遲sHSP表達(dá)峰值出現(xiàn)的時(shí)間，說(shuō)明硅在一定程度上能夠提高甘蔗抗旱性。

3　討論

熱激蛋白是一類植物體受到逆境脅迫時(shí)誘導(dǎo)合成的應(yīng)激蛋白。熱激蛋白按分子量的大小分為：HSP110、HSP90、HSP70、HSP60和smHSP（small HSP，15-30 kD）5個(gè)家族。對(duì)HSP 功能的研究一直是熱點(diǎn)，特別是熱激蛋白在高溫及低溫脅迫下的功能研究。其功能主要參與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的重新折疊、加工、穩(wěn)定、轉(zhuǎn)運(yùn)及蛋白質(zhì)變性后的復(fù)性、胞內(nèi)運(yùn)輸、降解，以及修復(fù)受損的蛋白質(zhì)等，維持胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，從而保護(hù)植物細(xì)胞免受進(jìn)一步的損傷，對(duì)減輕逆境引起的傷害有很大的作用［15，16］。

本研究以甘蔗為材料，克隆了甘蔗sHSP基因全長(zhǎng)，通過(guò)與其它物種的序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)，該基因與其它物種的氨基酸序列高度保守同源性高達(dá)69%-96%，大部分都高于75%，進(jìn)一步說(shuō)明HSP基因在進(jìn)化中高度保守［17］。對(duì)該基因編碼的氨基酸序列功能預(yù)測(cè)顯示，有個(gè)酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位點(diǎn)SSTD，已有研究表明細(xì)胞質(zhì)sHSP在應(yīng)激激酶通路中具有抑制作用，能削弱逆境脅迫中依賴于ASK1的細(xì)胞凋亡［18］。在序列中還發(fā)現(xiàn)6個(gè)絲氨酸和2個(gè)蘇氨酸磷酸化位點(diǎn)，根據(jù)Abravaya［19］提出的HSF 活化的反饋調(diào)控模型，認(rèn)為脅迫條件使HSF-HSP70復(fù)合體解離，HSF以單體形式被Ser/ Thr激酶磷酸化形成同源三聚體，經(jīng)一系列轉(zhuǎn)運(yùn)、結(jié)合、轉(zhuǎn)錄后使HSP的合成重新處于動(dòng)態(tài)平衡。該基因在N末端出現(xiàn)一個(gè)細(xì)菌免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域MSLV，37-83位氨基酸序列發(fā)現(xiàn)一個(gè)MVP重復(fù)序列，雖然目前已經(jīng)知道所有的HSF都具有這個(gè)保守的特征以及3個(gè)HSF成員抗原抗體反應(yīng)不同，但還不清楚它們是受何種信號(hào)激活。

為進(jìn)一步研究甘蔗sHSP基因在干旱脅迫下的表達(dá)模式，本研究從mRNA水平上對(duì)轉(zhuǎn)錄特性進(jìn)行分析，表明sHSP基因在轉(zhuǎn)錄水平受到了干旱脅迫的誘導(dǎo)，在對(duì)照sHSP有一定的表達(dá)，可能是植物在外界生長(zhǎng)環(huán)境中或多或少的受到一些因素的影響所致，之后兩個(gè)處理sHSP的表達(dá)量緩慢下降，說(shuō)明甘蔗本身在干旱脅迫下有一定的適應(yīng)能力，短期的干旱脅迫能提高甘蔗的耐旱性。在本研究條件下，甘蔗用PEG6000進(jìn)行模擬干旱處理40 h，對(duì)提高甘蔗的耐旱性有一定的促進(jìn)作用。之后幼苗sHSP的表達(dá)量急劇上升，說(shuō)明甘蔗幼苗已受到了干旱脅迫的傷害，sHSP表達(dá)的上升是對(duì)干旱脅迫作出的應(yīng)答反應(yīng)，熱激蛋白上升能有效阻止蛋白質(zhì)的變性，幫助變性蛋白重新折疊，恢復(fù)其功能。另外，HSP能促進(jìn)細(xì)胞骨架形成，保護(hù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，減輕對(duì)膜的損傷和細(xì)胞脫水，從而減輕細(xì)胞受損程度［20，21］。單獨(dú)干旱脅迫在處理96 h時(shí)sHSP的表達(dá)量達(dá)到最大，之后急劇下降，推測(cè)這時(shí)甘蔗對(duì)干旱脅迫的防御能力已逐漸喪失。而加硅后干旱脅迫直到處理144 h才急劇上升達(dá)到處理的最大值，說(shuō)明硅處理能提高甘蔗的耐旱能力。黃海榮等［4］、江澤普［22］、曾憲錄等［23］先后報(bào)道施硅肥能增強(qiáng)甘蔗光合作用。我們推測(cè)，施硅后能使硅在甘蔗葉片中沉積，從而提高細(xì)胞水勢(shì)，防止水分流失，使葉片更直立，改善光合作用從而提高甘蔗的抗旱性［24］。在干旱脅迫下，sHSPs 具有保護(hù)電子傳遞鏈穩(wěn)定和增加光系統(tǒng)Ⅱ穩(wěn)定性的作用，從而提高甘蔗光合作用和呼吸作用，穩(wěn)定膜結(jié)構(gòu)，提高甘蔗耐旱能力［25，26］。另外，大量的研究證明，熱激能使細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度升高，CaM活性增加，促進(jìn)CaM基因的表達(dá)，并提出一條新的熱激信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑（鈣-鈣調(diào)素途徑），而Ca2+和CaM可能是熱激信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的主要上游組分［27］。施硅肥能促進(jìn)甘蔗對(duì)Ca、Mg、Mn等元素的吸收，是否甘蔗在施硅后通過(guò)這條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑來(lái)提高甘蔗耐旱性，有待進(jìn)一步的研究。

4　結(jié)論

獲得的sHSP基因cDNA長(zhǎng)度為659 bp，包括1個(gè)459 bp的開(kāi)放閱讀框，編碼132個(gè)氨基酸，具有典型的HSP結(jié)構(gòu)域。HSP基因在甘蔗干旱脅迫過(guò)程中起到增強(qiáng)甘蔗耐旱時(shí)間，提高抗旱性的作用。該基因GenBank登錄號(hào)為JQ712579。

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（責(zé)任編輯 馬鑫）

Cloning of Small Heat-shock Protein（HSP）Gene from Sugarcane and Analysis of Its Expression Under Drought Stress

LIANG Pan-xia1HUANG Xing2LI Yang-rui2
（1. Resources and Environment Research Institute，Guangxi Academy of Agricultural Sciences，Nanning 530007；2. Sugarcane Research Center，Chinese Academy of Agricultural Sciences/ Key Laboratory of Sugarcane Biotechnology and Genetic Improvement（Guangxi），Ministry of Agriculture/ Guangxi Key Laboratory of Sugarcane Genetic Improvement，Nanning 530007）

The present experiment was conducted to clone Small Heat-shock Protein（sHSP）in sugarcane to explore mechanism of stress resistance in sugarcane. sHSP was amplified using RT-PCR from sugarcane leaves，the characteristics of the deduced protein were analyzed using bioinformatics software and its expression was analyzed using quantitative real-time PCR. The results showed that the cDNA of HSP gene was 659 bp in full length with a 459 bp open reading frame，and encodes a putative sHSP protein with 152 amino acids. Comparison of the amino acids sequences homology in sHSP protein from 14 different species indicated that，the sHSP protein had 69% to 96% identity in amino acids sequence with other plants. The deduced amino acids sequence not only contained a typical sHSP domain，but also was conservative. The results of quantitative real-time PCR analysis showed that the mRNA of sHSP was decreased initially and then increased with time under drought stress. These results suggested that sHSP might be involved in function of water stress and drought resistance in sugarcane enhanced by Si application.

sugarcane；drought；silicon；HSP

2016-02-18

國(guó)家高技術(shù)研究計(jì)劃（“863”計(jì)劃）項(xiàng)目（2013AA102604），科技部國(guó)際合作項(xiàng)目（2013DFA31600），廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2014GXNSFBA118139），廣西農(nóng)科院基本業(yè)務(wù)專項(xiàng)（桂農(nóng)2014YD13）

梁潘霞，女，博士，研究方向：植物生理生化和生物技術(shù)；E-mail：lpx831@163.com

李楊瑞，男，博士生導(dǎo)師，研究方向：甘蔗生理生化和生物技術(shù)；E-mail：liyr@gxaas.net