高效液相色譜法測定芪麥苓口服液中原兒茶醛含量

刁保忠，馮家龍，趙文法

（1.山東省聊城市人民醫(yī)院，山東聊城252000；2.山東省聊城市食品藥品檢驗檢測中心，山東聊城252000）

高效液相色譜法測定芪麥苓口服液中原兒茶醛含量

刁保忠1，馮家龍2，趙文法2

（1.山東省聊城市人民醫(yī)院，山東聊城252000；2.山東省聊城市食品藥品檢驗檢測中心，山東聊城252000）

目的建立芪麥苓口服液中丹參主要成分原兒茶醛含量測定的高效液相色譜（HPLC）法。方法色譜柱采用Diamonsil C18柱（250 mm× 4.6 mm，5 m），流動相為甲醇-0.1%冰乙酸（20∶80），檢測波長為279 nm，流速為1.0 mL/min，柱溫為30℃。結果原兒茶醛質量濃度在1.46～116.64 g/mL范圍內與峰面積呈良好的線性關系（r=0.999 9）；平均加樣回收率為92.64%（RSD=1.49%，n=6）。結論該法簡便、準確，結果穩(wěn)定，可用于芪麥苓口服液中丹參主要成分原兒茶醛的含量測定。

芪麥苓口服液；原兒茶醛；含量測定；高效液相色譜法

芪麥苓口服液處方來源于聊城市人民醫(yī)院名老中醫(yī)的臨床經驗方，由丹參、黃芪、茯苓等11味藥組方，經水煎、濾過、濃縮、配制、灌裝、滅菌等工序制得，具有益氣養(yǎng)陰、活血通絡的功效，臨床主要用于2型糖尿病的治療和糖尿病并發(fā)癥的防治。丹參經水煎提取后，其有效成分主要為原兒茶醛等水溶性物質，參考2010年版《中國藥典（一部）》收載的含有丹參水煎提取物的成方制劑，大都采用了高效液相色譜（HPLC）法控制其中原兒茶醛的含量［1］。檢索相關文獻，多采用反相高效液相色譜法測定含有丹參的經水煎提取工藝最終制得的復方制劑中原兒茶醛的含量［2-8］，亦有少數采用其他方法［9-11］。本試驗中采用HPLC法對芪麥苓口服液中主要成分原兒茶醛進行了含量測定，可用于控制芪麥苓口服液的質量，為其質量標準的建立提供依據。

1　儀器與試藥

1.1儀器

1200型高效液相色譜儀（紫外檢測器，美國安捷倫公司）；LC-20A型高效液相色譜儀（PDA檢測器，日本島津公司）；BT125D型電子天平（德國賽多利斯公司）。1.2試藥

原兒茶醛對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為110810-201007）；芪麥苓口服液（聊城市人民醫(yī)院，批號為20140201，20140202，20140203）；甲醇（色譜純，天津賽孚瑞科技有限公司），其他化學試劑（市售，分析純）。

2　方法與結果

2.1色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-0.1%冰乙酸（20∶80）；檢測波長：279 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；進樣量：10 μL。

2.2溶液制備

對照品溶液：取原兒茶醛對照品適量，精密稱定，置量瓶中，加甲醇制成每1 mL含原兒茶醛20 μg的溶液，即得。

供試品溶液：精密量本品10 mL，加稀鹽酸調pH至1～2，用醋酸乙酯提取3次，每次20 mL，合并醋酸乙酯液，揮干，殘渣用甲醇溶解并定容至10 mL，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

陰性對照品溶液：按處方工藝制備不含丹參的陰性對照品，按照供試品溶液制備方法操作，即得。

2.3方法學考察

專屬性試驗：分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按擬訂色譜條件測定。結果表明，陰性對照品溶液對測定無干擾；PDA檢測器記錄的色譜峰純度檢查，峰純度匹配度996，表明峰純度符合規(guī)定，該方法專屬性良好。色譜圖見圖1。

線性關系考察：取原兒茶醛對照品，精密稱定，制成質量濃度為1.46，2.916，11.664，58.32，116.64 μg/mL的溶液，在擬訂色譜條件下，分別注入液相色譜儀測定，以質量濃度（C）為橫坐標、峰面積（A）為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程為A=17.764 C-4.516，r= 0.999 9（n=5）。結果表明，原兒茶醛質量濃度在1.46～116.64 μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。見表1。

圖1　高效液相色譜圖

表1　原兒茶醛線性關系考察結果（n=5）

精密度試驗：取低、中、高3個質量濃度的對照品溶液，擬訂色譜條件下進樣10 μL，分別于1 d內測定5次，連續(xù)測定5 d，記錄峰面積，并計算日內和日間RSD。結果3種質量濃度對照品溶液的日內RSD均小于1%，日間RSD小于2%，表明儀器精密度良好，符合分析要求。

重復性試驗：對同一均勻樣品溶液，連續(xù)取樣6份，各10 mL，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件測定。結果的RSD為1.70%（n=6），表明該方法重復性良好。見表2。

表2　重復性試驗結果（n=6）

穩(wěn)定性試驗：取重復性試驗項下供試品溶液，分別于0，6，12，24 h時各進樣1次，測定供試品中原兒茶醛的含量。原兒茶醛溶液具有還原性，在環(huán)境中易被氧化分解而變色，試驗過程中應密閉操作。結果的RSD為1.20%，表明供試品溶液在24 h內穩(wěn)定性良好。見表3。

表3　穩(wěn)定性試驗結果（n=4）

加樣回收試驗：取已知含量的供試品（批號為20140201）適量，加入適量原兒茶醛對照品，制成低、中、高3個不同質量濃度的待測溶液各3份，分別測定其含量。結果見表4。

表4　原兒茶醛加樣回收試驗結果（n=6）

2.4樣品含量測定

取3批樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件測定，以峰面積計算含量。結果批號為20140201，20140202，20140203的樣品含量分別為0.024，0.025，0.025 g/L。

3　討論

3.1色譜條件選擇

主要選擇依據供試品溶液中原兒茶醛主峰有無干擾。通過DAD檢測器對供試品中原兒茶醛的全波長檢測，流動相為甲醇-0.1%冰乙酸（20∶80），檢測波長為279 nm，流速為1.0 mL/min，柱溫為30℃，結果供試品原兒茶醛主峰與其他雜質峰分離良好，原兒茶醛主峰的純度因子999，在可接受的閾值內。

3.2提取溶液考察

比較了乙醚和醋酸乙酯2種不同提取溶劑的提取效果，綜合考慮提取溶劑的安全性，結果發(fā)現醋酸乙酯提取原兒茶醛效果相對較好，所以本試驗中采用醋酸乙酯為提取溶劑。

綜上所述，本方法簡便、準確，結果穩(wěn)定，可用于控制芪麥苓口服液的質量及本品中原兒茶醛含量的質量評價。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：38，456-457，579-580，835-836.

［2］蔡麗云，李子鴻，劉東文，等.骨傷康顆粒中原兒茶醛的含量測定［J］.中國藥業(yè)，2007，16（11）：23-24.

［3］黃雅蘭，孫廣紅，孫偉光，等.HPLC法測定不同廠家的復方丹參注射液中丹參素和原兒茶醛的含量［J］.中國藥業(yè)，2002，11（12）：36.

［4］王道平，周欣，梁光義，等.不同產地丹參中有效成分的含量比較［J］.天然產物研究與開發(fā)，2005，17（1）：70-72.

［5］曹冬，黃喜茹，劉偉娜，等.反相高效液相色譜法測定冠心寧注射液中的丹參素和原兒茶醛［J］.色譜，2006，24（5）：533.

［6］王海龍，王寶全，趙慶華.反相高效液相色譜法測定胃炎片中原兒茶醛的含量［J］.實用醫(yī)藥雜志，2007，24（5）：574-575.

［7］涂瓊，盧慶紅.高效液相色譜法測定小兒清炎合劑中原兒茶醛的含量［J］.實用臨床醫(yī)學，2013，14（2）：4-6.

［8］朱春健，郁梅，柳冬梅，等.高效液相色譜法測定活血復脈合劑中原兒茶醛的含量［J］.中國新藥與臨床雜志，2013，32（11）：921-923.

［9］姚定友，王林麗.薄層掃描法測定補益口服液中原兒茶醛含量［J］.中國藥業(yè)，2005，14（1）：43.

［10］何建國，雷永軍，朱建華，等.一階導數光譜法測定復方丹參注射液中原兒茶醛的含量［J］.時珍國醫(yī)國藥，2002，13（10）：590-591.

［11］朱迪，譚丹，侯靖宇，等.參芎葡萄糖注射液中總酚酸含量測定方法研究［J］.中國藥業(yè)，2015，24（13）：28-29.

Content Determination of the Protocatechuic Aldehyde in Qimailing Oral Liquid by HPLC

Diao Baozhong1，Feng Jialong2Zhao Wenfa2
（1.Liaocheng People′s Hospital，Liaocheng，Shandong，China252000；
2.Liaocheng Institute for Food and Drug Control，Liaocheng，Shandong，China252000）

ObjectiveTo establish an HPLC method for the content determination of protocatechuic aldehyde in Qimailing Oral Liquid. MethodsThe Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）was used as the chromatographic column，Methanol-0.1%glacial acetic acid solution（30∶70）as mobile phase；the wavelength was 279 nm.The flow rate was 1.0 mL/min，and the column temperature was at 30℃. ResultsThelinear rangeof protocatechuicaldehyde was 1.46-116.64μg/mL（r=0.999 9），with an averagerecovery rateof 92.64%（RSD=1.49%，n=6）.ConclusionThe method is simple，accurate and stable，which could be used for the content determination of Qimailing Oral Liquid.

Qimailing Oral Liquid；protocatechuic aldehyde；content determination；HPLC

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2016）15-0074-03

（2016-01-14；

2016-03-29）