高效液相色譜法測(cè)定藿香正氣水中蒼術(shù)素含量

楊立志，姜雪敏

（黑龍江省雞西市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，黑龍江雞西158100）

高效液相色譜法測(cè)定藿香正氣水中蒼術(shù)素含量

楊立志，姜雪敏

（黑龍江省雞西市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，黑龍江雞西158100）

目的建立測(cè)定藿香正氣水中蒼術(shù)素含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法色譜柱為Agilent Extend-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 m），流動(dòng)相為甲醇-水（78∶22），流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為340 nm，柱溫為30℃。結(jié)果蒼術(shù)素進(jìn)樣量在0.021 67～0.433 097 g范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，r=1.000 0（n=6），平均回收率為97.44%，RSD=0.83%（n=6）。結(jié)論該方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于藿香正氣水的質(zhì)量控制。

蒼術(shù)素；藿香正氣水；高效液相色譜法

藿香正氣水由蒼術(shù)、陳皮、厚樸、白芷、茯苓、大腹皮、生半夏、甘草浸膏、廣藿香油、紫蘇葉油組方，具有解表化濕、理氣和中的功效，用于外感風(fēng)寒、內(nèi)傷濕滯所致的感冒。在其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［1］中無(wú)蒼術(shù)素的含量控制項(xiàng)，為更好地控制藿香正氣水的質(zhì)量，筆者參考文獻(xiàn)［2-15］采用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定了制劑中蒼術(shù)素的含量?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1　儀器與試藥

島津LC-2010A型高效液相色譜儀（株式會(huì)社島津制作所）；AG285型電子分析天平（瑞士梅特勒托利多公司），KQ-400KDE型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。蒼術(shù)素對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為111924-201404）；藿香正氣水（市售品，批號(hào)分別為150302，150603，150902）；水為屈臣氏蒸餾水，甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Agilent Extend-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（78∶22）；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：340 nm。理論板數(shù)按橙皮苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

2.2溶液制備

對(duì)照品溶液：精密稱取蒼術(shù)素對(duì)照品（含量為99.7%）10.86 mg，加甲醇制成每1 mL含21.654 84 μg的溶液，即得。

供試品溶液：精密量取本品5 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，稱定質(zhì)量，超聲（功率400 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

陰性對(duì)照品溶液：按處方量以相同工藝制備不含蒼術(shù)的陰性對(duì)照樣品，按供試品溶液制備方法制備，即得。

2.3方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下3種溶液適量，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果，陰性對(duì)照品溶液色譜中，在與蒼術(shù)素色譜峰相應(yīng)位置處無(wú)干擾峰出現(xiàn)，表明陰性對(duì)照品溶液的其他組分對(duì)蒼術(shù)素的測(cè)定無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。

線性關(guān)系考察：精密吸取橙皮苷對(duì)照品溶液1，2，5，10，15，20 μL，注入高相液相色譜儀，記錄峰面積，以蒼術(shù)素進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=1.076 463 1×107X+ 1.872 109×102，r=1.000 0（n=6）。結(jié)果表明，蒼術(shù)素進(jìn)樣量在0.021 67～0.433 097 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算峰面積。結(jié)果的RSD=0.28%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批（批號(hào)為150302）樣品，依法制備供試品溶液6份，并進(jìn)樣測(cè)定含量。結(jié)果的RSD= 1.06%（n=6），表明方法重復(fù)性較好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，10，12 h時(shí)依法進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果的RSD=0.36%（n=7），表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

圖1　高效液相色譜圖

加樣回收試驗(yàn)：精密量取同一已知含量的樣品（批號(hào)為150302，含量為0.172 mg/mL）2.5 mL，共6份，分成3組，每組分別精密加入0.4 mg/mL的蒼術(shù)素0.8，1.0，1.2 mL。依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　蒼術(shù)素加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.4樣品含量測(cè)定

取3批樣品，依法制備供試品溶液，并進(jìn)樣測(cè)定含量。結(jié)果批號(hào)為150302，150603，150902的3批樣品中蒼術(shù)素的含量分別為0.172，0.165，0.188 mg/mL。

3　討論

藿香正氣水中，蒼術(shù)在處方中起到極其重要的作用，故選擇測(cè)定處方中的蒼術(shù)素含量作為質(zhì)量控制。選擇測(cè)定波長(zhǎng)時(shí)，對(duì)蒼術(shù)素對(duì)照品溶液在300～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果蒼術(shù)素在340 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，靈敏度最高，故選擇340 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。

蒼術(shù)素結(jié)構(gòu)含有較大的不飽和體系，在高溫下易分解，在光照條件下也不穩(wěn)定，很快發(fā)生變化，顏色加深呈棕黃色，因此在制備供試品溶液時(shí)應(yīng)控制溫度，置棕色瓶中保存，否則會(huì)影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性，且供試品溶液和對(duì)照品貯備液均應(yīng)避光保存。

本試驗(yàn)中考察了甲醇-水、甲醇-0.1%醋酸水溶液、乙腈-0.8%醋酸水溶液等不同的流動(dòng)相系統(tǒng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，采用甲醇-水溶液系統(tǒng)，基線平穩(wěn)，出峰時(shí)間縮短，故選擇甲醇-水溶液作為本試驗(yàn)的流動(dòng)相體系。

制備供試品溶液時(shí)，曾分別以甲醇超聲和回流處理樣品，結(jié)果回流提取與超聲提取相比，蒼術(shù)素略有損失，且超聲提取操作簡(jiǎn)便，耗時(shí)短，不需加熱，故選用以甲醇超聲提取。同時(shí)，考察發(fā)現(xiàn)，超聲30 min有效成分即可提取完全，故確定提取時(shí)間為30 min。

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Content Determination of Atractylodin in Huoxiang Zhengqi Liquid by HPLC

Yang Lizhi，Jiang Xuemin
（Jixi Center for Food and Drug Inspection and Testing，Jixi，Heilongjiang，China158100）

ObjectiveToestablish an high performanceliquid chromatographic（HPLC）techniquefor thecontentdetermination of atractylodin in Huoxiang Zhengqi Liquid.MethodsThe optimized method was achieved for the separation and detection of the selected constituent on Agilent Extend-C18column（250 mm×4.6 mm，5 m）using methanol-wather（78∶22）as mobile phase at a flow rate of 1.0 mL/min，and 340 nm as the detection wavelength.The column temperature was 30℃.ResultsAtractylodin showed the good linea relationship when the amounts were between 0.021 67-0.433 097 μg，r=1.000 0（n=6）.The average recovery rate was 97.44%，RSD=0.83%（n=6）.ConclusionThe method is simple，accurate and can be applied for the quality control of Huoxiang Zhengqi Liquid.

atractylodin；Huoxiang Zhengqi Liquid；HPLC

R284．1；R286．0

A

1006－4931（2016）16－0070－03

楊立志（1977-），男，大學(xué)本科，副主任藥師，主要從事食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)工作，（電子信箱）Lizhi669@sohu.com。

（2016－04－06；

2016－05－18）