酶聯(lián)免疫吸附法在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應用

史兆忠

[摘 要] 本文主要介紹了酶聯(lián)吸附法（ELISA）的原理，并闡述如何將該原理通過相應的技術(shù)運用到水產(chǎn)養(yǎng)殖的實際操作中去，其實際操作主要有將ELISA用于水產(chǎn)品安全監(jiān)測、可致病的水產(chǎn)動物病原菌檢測等。

[關鍵詞] 酶聯(lián)免疫吸附法 水產(chǎn)養(yǎng)殖 實際應用辦法 生物科技

[中圖分類號] S942 [文獻標識碼] A [文章編號] 1003-1650 （2016）04-0290-01

作為現(xiàn)代化的檢測技術(shù)，酶聯(lián)免疫吸附法即將酶復合物與抗原（或抗體）有效結(jié)合，通過顯色變化測定病原菌。由于抗原（抗體）在結(jié)合到固相載體表面后仍具免疫活性，抗體（抗原）與酶的結(jié)合物仍能保持二者的活性，結(jié)合物與相應抗原（抗體）反應后所結(jié)合的酶仍能催化底物生成有色物質(zhì)其含量根據(jù)結(jié)合物顏色深淺易于測定，故而使得ELISA具有選擇性優(yōu)良、高靈敏、數(shù)據(jù)客觀可靠、結(jié)果準確、實用性強的優(yōu)點。

1 酶聯(lián)免疫吸附法

1.1 酶聯(lián)免疫吸附法的測定原理

酶聯(lián)免疫吸附法基本原理：根據(jù)抗原或抗體具有特異性功能，通常選取可溶性抗原或抗體結(jié)合到固相載體上，一般采用固苯乙烯作為固相載體，此過程保持抗原抗體具有免疫活性。在固相載體上使抗原或抗體與另外一種酶結(jié)合，成功結(jié)合的產(chǎn)物即具有酶的活性又具有抗原抗體的免疫性。測定時，將待測物于已經(jīng)用酶標記好的抗原抗體反應，時間不需要很長，然后將固相載體上的結(jié)合物洗滌，主要是將待測物于酶抗原抗體結(jié)合的產(chǎn)物分離出來。然后加入酶催化，被酶催化生成有色產(chǎn)物，故而可根據(jù)顏色變化情況進行分析，由于酶的催化效率很高，因此酶聯(lián)免疫吸附法能夠達到很高的準確率。

1.2 酶聯(lián)免疫吸附法的方法及其操作

盡管至今酶聯(lián)免疫吸附法的檢測方法的分類仍沒有一個準確權(quán)威的定論，但是無論采用怎樣的形式進行檢測，均需要在試劑的幫助下完成，具體為酶反應的底物、免疫吸附劑、被酶標記過的抗體或抗原，其中免疫吸附劑主要是將抗原或抗體與固相載體結(jié)合的產(chǎn)物。在確定檢測試劑后，依據(jù)檢測樣本性狀差異，選擇不同的檢測方式進行，目前該種檢測技術(shù)現(xiàn)存方式較多，其中以下幾點最為常見：其一，雙抗體夾心法。結(jié)合特異性抗體與固相載體，形成固相抗體：洗滌未結(jié)合抗體及雜質(zhì)，用BSA進行封閉。洗滌除去多余的BSA，加受檢標本，與固相抗體接觸反應，形成固相抗原復合物，而后洗滌除多余雜質(zhì)。最后加酶標抗體，使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結(jié)合并徹底洗滌未結(jié)合的酶標抗體并根據(jù)顏色深淺進行定量測量；其二，雙位點一步法。該種檢測方法針對抗原檢測，依據(jù)抗原分子的決定簇不同，分別對其單克隆抗體進行標記，形成霉變抗體與固相抗體，將兩種抗體同步檢測，通過將其并作一步完成檢測操作；其三，間接法測抗體。該種檢測方式，主要借助抗原的特異性，通過固相抗原的形成，去除檢測物質(zhì)中的雜物，以及沒有完成結(jié)合的抗原。（4）其余的檢測方法還有競爭法、捕獲法測IgM抗體。

1.3 酶聯(lián)免疫吸附法的特點

與過去經(jīng)典的生物化學檢測方法相比較，酶聯(lián)免疫吸附法由于其檢測限可達ng甚至pg，故而具有靈敏度高的特點；而且，它還具有特異性很強的抗原抗體免疫反應，這就使得那些結(jié)構(gòu)類似物、有色或熒光物質(zhì)對檢測的干擾會變得很小，大大提高了結(jié)果的準確性；最后，本著綠色實驗思想，這種靈敏度高，可以利用低濃度的標準品和少量的有機溶劑就能得到精準實驗結(jié)果的方法，無疑能夠大大減小試劑對環(huán)境和實驗人員的污染和危害。

2 水產(chǎn)養(yǎng)殖中的的酶聯(lián)養(yǎng)殖吸附法應用

2.1 致病病原菌的檢測

近年來，致病微生物嚴重影響著水產(chǎn)品養(yǎng)殖行業(yè)的發(fā)展，下面我們就來說一下水產(chǎn)品中致病微生物。水產(chǎn)品的致病微生物無非分為兩種，一種是自身攜帶細菌：溶血性弧菌和甲肝等都是水產(chǎn)品中致病微生物導致的。一種是人為污染導致細菌滋生：通過人體或動物腸道消化產(chǎn)生的糞便排放到水中導致細菌污染。伴隨生物技術(shù)的不斷完善，水產(chǎn)品致病微生物的檢測面臨新的發(fā)展機遇，生物檢測技術(shù)日益準確、快捷、操作簡單，現(xiàn)對當前應用較為廣泛的PCR技術(shù)加以分析。

PCR技術(shù)：該技術(shù)三大核心要素是DNA、四種脫氧核糖核苷酸和引物，在DNA聚合酶的作用下，快速復制翻譯目標DNA，此方法可以在試管中操作，因此操作方便，由于反應速度非?？欤虝r間內(nèi)就能復制數(shù)十萬想要的目的基因或DNA片段，無需進行DNA克隆就能達到目的。此項技能已經(jīng)應用于生物各個領域，比如DNA檢測，基因分離，DNA分析，同樣也應用于水產(chǎn)品中致病微生物的檢查

2.2 水產(chǎn)品安全檢測

我國采用的ELISA氯霉素試劑盒線形范圍在50ng/kg～1350ng/kg，定量檢測下限為100ng/kg，而水產(chǎn)品組胺的FDC和EEC最大允許量為100mg/kg～200mg/kg。ELISA法測定組胺始于1983年，之后方法不斷完善，如Neogen組胺試劑盒，運用該試劑盒檢出速度非?？?，35min快速檢測，且限達2.5mg/kg，檢測結(jié)果不受樣品鹽分干擾，且直接用水相進行樣品的前處理，避免有機試劑的污染。

結(jié)語

可見ELIS的應用范圍十分廣闊，而其在水產(chǎn)養(yǎng)殖中應用的效果尤為突出，它不僅是革新了傳統(tǒng)的方法，也修正了原有檢測方法耗時長、成本高、環(huán)境負擔大的問題。ELISA操作簡捷、快速，低污染、高效率，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中大有可施為的地方。

參考文獻

[1]方平，李英文.酶聯(lián)免疫吸附法在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應用[J].水利漁業(yè)，2004，第1期：12-14.

[2]趙曉聯(lián)，蔡建榮.酶聯(lián)免疫吸附分析法在食品衛(wèi)生分析中的應用[C]//全國首屆生物毒素學術(shù)研討會. 1998.

[3]伏旭，李培武，賀莉等.酶聯(lián)免疫吸附檢測法的應用研究進展[J].氨基酸和生物資源，2012，34（3）：41-44.