麻疹、風(fēng)疹、脊髓灰質(zhì)炎IgG抗體檢測及影響因素分析

李淑杰 靳鳳珍

【摘要】目的：為了了解適齡兒童接種麻疹、風(fēng)疹、脊髓灰質(zhì)炎疫苗后IgG抗體產(chǎn)生情況，評(píng)價(jià)該地區(qū)不同人群免疫規(guī)劃工作質(zhì)量和水平，及時(shí)發(fā)現(xiàn)解決免疫規(guī)劃工作中存在的問題。方法：根據(jù)《呼倫貝爾市兒童免疫效果監(jiān)測實(shí)施方案》，2013年、2014年分別對(duì)莫力達(dá)瓦達(dá)斡爾族自治旗（以下簡稱莫旗）21個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的0～15歲適齡兒童進(jìn)行了麻疹、風(fēng)疹、脊髓灰質(zhì)炎IgG抗體的檢測，利用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（間接ELISA）法。結(jié)果：2013年共檢測4763人，2014年共檢測3553人，麻疹I(lǐng)gG陽性率2013年是84.1%，2014年是73.0%；風(fēng)疹陽性率2013年91.7%，2014年87.6%；脊髓灰質(zhì)炎陽性率2013年85.4%，2014年88.7%。經(jīng)過x2檢驗(yàn)，2013年麻疹、風(fēng)疹、脊髓灰質(zhì)炎IgG抗體檢測結(jié)果陽性率各年齡組均有差異，2014年麻疹、風(fēng)疹I(lǐng)gG抗體陽性率各年齡組有差異，脊髓灰質(zhì)炎IgG抗體陽性率各年齡組無差異。討論：差異存在的主要原因是兩年的抽樣數(shù)量差距大，還有樣品采集和處理、試劑的使用、方法的選擇、環(huán)境溫濕度的控制、儀器的使用、人員操作技術(shù)、樣品采集的對(duì)象的免疫史不同也是主要影響。在以后的抽樣、樣品處理、方法的選擇、實(shí)驗(yàn)的操作等加強(qiáng)管理和合理安排，提高專業(yè)人員業(yè)務(wù)技能、做好實(shí)驗(yàn)室的內(nèi)部質(zhì)量控制，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確可靠；計(jì)劃免疫醫(yī)生查遺補(bǔ)漏，加強(qiáng)疫苗的接種的及時(shí)率和覆蓋率，減少或杜絕少種和漏種的現(xiàn)象發(fā)生。

【關(guān)鍵詞】IgG抗體；檢測；麻疹；風(fēng)疹；脊髓灰質(zhì)炎；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

1 研究資料與方法

使用ELISA麻疹/風(fēng)疹/脊髓灰質(zhì)炎IgG抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）。

1.1 樣品的采集

用一次性采血針采集末梢血（手指血或耳垂血）用一次性采血管吸取20ul，加到預(yù)先盛有180ul的生理鹽水帶蓋的離心管中，待血球自然沉降到管底后便可直接取上清液檢測。

1.2 實(shí)驗(yàn)步驟

按照麻疹、風(fēng)疹、脊髓灰質(zhì)炎IgG抗體檢測試劑盒使用說明書的檢測方法進(jìn)行檢測。

1.3 儀器

酶標(biāo)儀Thermo Multiskan MK3型，Wellwash4、MK2洗板機(jī)，微量移液器。

1.4 試劑

2013、2014年均使用同一個(gè)廠家同一名稱的麻疹、風(fēng)疹、脊髓灰質(zhì)炎IgG抗體檢測試劑盒，批號(hào)不同。

2 結(jié)果

麻疹、風(fēng)疹、脊髓灰質(zhì)炎病毒IgG抗體通過計(jì)算CUT OFF（CO）值判定結(jié)果。麻疹a空白孔OD值不大于0.07；b陽性對(duì)照A值大于0.5；c陰性對(duì)照A值小于0.15，實(shí)驗(yàn)成立。風(fēng)疹、脊髓灰質(zhì)炎：陰性對(duì)照OD值≤0.15，陽性對(duì)照OD值≥陰性對(duì)照OD的2.1倍，實(shí)驗(yàn)成立。所有實(shí)驗(yàn)均符合內(nèi)部質(zhì)量控制要求，實(shí)驗(yàn)全部成立。

經(jīng)過x2檢驗(yàn)，2013年麻疹、風(fēng)疹、脊髓灰質(zhì)炎IgG抗體檢測結(jié)果陽性率各年齡組均有差異，2014年麻疹、風(fēng)疹I(lǐng)gG抗體陽性率各年齡組有差異，脊髓灰質(zhì)炎IgG抗體陽性率各年齡組無差異。2013年和2014年麻疹、風(fēng)疹、脊髓灰質(zhì)炎IgG抗體檢測結(jié)果陽性率均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（按α=0.05水準(zhǔn)）。

3 討論

1）樣品數(shù)量，樣品采集量少，抽樣誤差較大，陽性率較低，比如2013年0～2歲年齡組，樣品量不足300人，這個(gè)年齡組的陽性率普遍較低。還有2013年采集樣品4763人，2014年采集樣品3553人，同比2013年陽性率高于2014年陽性率；2）個(gè)體差異，這是主要原因，采集的個(gè)體不同，疫苗接種次數(shù)不同，2013年兒童麻疹的免疫次數(shù)大多是兩三次甚至四次，2014年麻疹的免疫次數(shù)大部分是一兩次，風(fēng)疹免疫次數(shù)2013年大部分兩次甚至三次，2014年大部分一兩次，甚至有些沒有免疫史，免疫次數(shù)少或者沒有免疫史造成抗體的產(chǎn)生量不足，陽性率也低；3）同一個(gè)體不同時(shí)間采集，抗體量也不同，隨著時(shí)間的延長，抗體消減，2012—2014年內(nèi)蒙古自治區(qū)消除麻疹行動(dòng)方案，力爭麻疹2014年發(fā)病率控制在1/100萬以下，2014年消除麻疹，2012年、2013年對(duì)8月齡至14歲以下兒童開展麻疹風(fēng)疹的疫苗查漏補(bǔ)種，對(duì)2013年的抗體檢測陽性率的提高有很大作用；4）檢測的環(huán)境條件，溫度控制在18～25℃，濕度控制在30%～80%之間，2013年檢測的平均溫度23.5℃，濕度68%，2014年平均18℃，濕度69%，2014年的檢測室內(nèi)環(huán)境溫度較低，影響了酶標(biāo)記物與樣品的結(jié)合以及顯色劑的顯色反應(yīng)；5）樣品的采集和制備，溶血的樣品對(duì)檢測的吸光度有很大影響，溶血樣品中的蛋白量增加，吸光度值偏大，造成假陽性，2013年溶血的樣品較2014年的溶血的樣品數(shù)多，假陽性也增加。

綜上所述，排除或減少了影響因素，保證使用間接ELISA法檢測IgG抗體的結(jié)果的準(zhǔn)確可靠，應(yīng)加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室的科學(xué)管理，在工作中逐步改進(jìn)設(shè)施和實(shí)驗(yàn)條件，依據(jù)試劑盒和相關(guān)操作文件，制定本實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，嚴(yán)格對(duì)實(shí)驗(yàn)條件、試劑、人員進(jìn)行監(jiān)督和質(zhì)量控制，減少實(shí)驗(yàn)的誤差降低不確定度，增加檢測數(shù)據(jù)的可信度；另外疾控機(jī)構(gòu)加強(qiáng)計(jì)劃免疫的監(jiān)督和指導(dǎo)，督促防疫工作者經(jīng)常深入基層調(diào)查了解適齡兒童的疫苗接種情況，管理好流動(dòng)兒童的疫苗接種，定期查遺補(bǔ)漏，盡量做到所有兒童均能按時(shí)按程序接種疫苗，以確?？贵w水平逐年上升，以切實(shí)保證計(jì)劃免疫兒童有效預(yù)防相應(yīng)傳染病，為計(jì)劃免疫的疫苗接種的效果評(píng)價(jià)提供依據(jù)。

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