大葉傘離體快繁技術(shù)研究

付影

摘要 以大葉傘當(dāng)年生嫩葉為外植體材料，研究了大葉傘愈傷組織誘導(dǎo)及分化的最適激素組合。結(jié)果表明：MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L為最適宜愈傷組織誘導(dǎo)的培養(yǎng)基，MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L為最適宜愈傷組織分化的培養(yǎng)基；1/2MS為最適生根培養(yǎng)基。

關(guān)鍵詞 大葉傘；離體；快繁；最適培養(yǎng)莖

中圖分類號 S687 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-5739（2016）05-0160-01

大葉傘（Schefflera actinophlla）為五加科鵝掌柴屬的常綠喬木，又名澳洲鵝掌柴、輻葉鵝掌柴、昆士蘭傘木等。原產(chǎn)于澳大利亞昆士蘭州及東南亞熱帶地區(qū)，喜光照及高溫高濕環(huán)境，耐陰性亦強(qiáng)[1]。大葉傘莖桿直立，少分枝，嫩枝綠色，株形優(yōu)雅，是優(yōu)良的室內(nèi)觀葉植物。大葉傘可用播種或扦插繁殖，但此2種育苗方式增殖均較慢。鞠志新等[2-3]采用大葉傘嫩芽和帶芽莖段，成功建立了其組織培養(yǎng)技術(shù)體系，但以嫩葉為外植體時，只誘導(dǎo)出愈傷組織，未能分化出芽。本文以大葉傘當(dāng)年生嫩葉為材料，通過愈傷組織誘導(dǎo)、分化，植株再生研究，建立了大葉傘離體快繁技術(shù)體系。

1 材料與方法

1.1 外植體材料準(zhǔn)備

取材季節(jié)為春季。取材母株要求健壯、無病蟲害，從其上剪取幼嫩葉片。首先將葉片表面附著的灰塵、泥沙等物用清水沖洗干凈，然后將其用洗潔精稀釋液逐個清洗，最后用流水沖洗干凈。洗凈的材料置于超凈工作臺上，先在75%酒精浸泡30 s，無菌水沖洗1遍，然后用有效氯含量為2%的NaClO溶液消毒7～8 min，最后用無菌水沖洗4～5次，且每次沖洗時間不少于1 min。對外植體進(jìn)行消毒處理與無菌水沖洗時，均使用無菌培養(yǎng)瓶震蕩進(jìn)行。

1.2 試驗方法

采用添加0.65%瓊脂粉和3%蔗糖，pH值5.8，附加不同激素組合的MS培養(yǎng)基。配制完成分裝后，于溫度121 ℃、壓力1.1 kg/cm2的條件下滅菌15 min。將消毒好的葉片背面朝上接種。無特殊說明，在溫度（25±2）℃、光照強(qiáng)度1 000～1 500 lx、光照時間12 h/d的條件下進(jìn)行培養(yǎng)[4-6]。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同激素組合對大葉傘當(dāng)年生嫩葉愈傷組織誘導(dǎo)的影響

以大葉傘當(dāng)年生嫩葉為外植體材料，先用75%酒精浸泡30 s，再用2% NaClO溶液消毒7 min，外植體存活率在80%以上。將葉背朝上平放于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，先暗培養(yǎng)7 d，7 d后葉片即開始膨大反卷，轉(zhuǎn)入光培養(yǎng)后，即可誘導(dǎo)形成愈傷組織。培養(yǎng)30 d后進(jìn)行調(diào)查。

從表1可以看出，隨著6-BA和NAA濃度的增加，愈傷組織質(zhì)量由平滑變?yōu)橹旅?，且誘導(dǎo)的愈傷組織呈現(xiàn)出先增大后減小的趨勢。因此，在進(jìn)行愈傷組織時，激素用量并非越多越好，而是要在適當(dāng)范圍內(nèi)。結(jié)果表明，6-BA 1.0 mg/L+2，4-D 0.5 mg/L組合誘導(dǎo)愈傷組織質(zhì)量較好，為綠色致密愈傷。6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.25 mg/L組合誘導(dǎo)愈傷組織為黃綠色較疏松愈傷，6-BA 4.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L組合和6-BA 5.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L組合誘導(dǎo)愈傷為平滑愈傷，均不利于后面愈傷組織的分化。

2.2 愈傷組織的分化

將葉片誘導(dǎo)產(chǎn)生的愈傷組織轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基中，研究不同激素組合對愈傷組織分化的影響。培養(yǎng)30 d后進(jìn)行調(diào)查。從表2可以看出，MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L中，10 d后愈傷組織表面開始轉(zhuǎn)綠，20 d后愈傷組織表面可誘導(dǎo)出綠色小芽點，30 d后其不定芽誘導(dǎo)率可達(dá)75%（圖1）。不定芽分化培養(yǎng)基中BA濃度在1.0～2.0 mg/L時，愈傷組織均可誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽；但NAA濃度高于0.5 mg/L時，愈傷組織則長出白色根系而不能誘導(dǎo)出芽。將愈傷組織誘導(dǎo)產(chǎn)生的不定芽轉(zhuǎn)入培養(yǎng)基MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L中，不定芽增殖系數(shù)可達(dá)4.5，但長期在此培養(yǎng)基中培養(yǎng)，會出現(xiàn)玻璃化苗，需用MS培養(yǎng)基做隔代培養(yǎng)（圖2）。

2.3 生根與煉苗移栽

將生長健壯且苗高在1.5 cm以上的無菌苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基1/2MS中。10 d后，幼苗基部可見根點，培養(yǎng)20～30 d幼苗基部長出4～6條白色不定根，生根率在95%以上。當(dāng)幼苗根長到0.2～0.5 cm時，即可放置于室內(nèi)自然光下煉苗。7 d后根長均在1 cm以上，轉(zhuǎn)入溫室內(nèi)放置2～3 d后再將培養(yǎng)瓶蓋子打開，洗去幼苗基部殘留的培養(yǎng)基，用0.1%多菌靈消毒10 min，防止根部腐爛，移栽到珍珠巖∶腐殖土=1∶1混合的基質(zhì)中。定期噴霧，注意遮蔭。移栽1個月后，成活率可達(dá)（下轉(zhuǎn)第163頁）

95%以上。

3 結(jié)論

試驗結(jié)果表明，MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L為最適宜愈傷組織誘導(dǎo)的培養(yǎng)基，MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L為最適宜愈傷組織分化培養(yǎng)基；1/2MS為最適生根培養(yǎng)基。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 劉燕.園林花卉學(xué)[M].北京：中國林業(yè)出版社，2003：282-283.

[2] 鞠志新，戚繼忠，顧德峰.大葉傘組織培養(yǎng)技術(shù)研究[J].遼寧林業(yè)科技，2007（6）：21-23.

[3] 鞠志新，張啟翔，戚繼忠，等.輻葉鵝掌柴組織培養(yǎng)和快速繁殖[J].植物生理學(xué)通訊，2007，43（3）：506.

[4] 陳少萍，劉華敏.大葉傘栽培管理與病蟲害防治[J].中國花卉園藝，2008（12）：38-39.

[5] 武建云，王華宇，楊利平，等.大葉傘標(biāo)準(zhǔn)化繁育技術(shù)研究[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014（21）：5285-5288.

[6] 張衛(wèi)國，劉鵬，程偉燕，等.不同濃度生長激素對鵝掌柴扦插生根的影響[J].內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2007（2）：157-160.