河南信陽地區(qū)種豬群衣原體血清抗體檢測

馬超鋒，高進(jìn)勇，胡積霞，李　何，馬　云，徐永杰*

(1.信陽市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南信陽 464000；2.信陽學(xué)院理工學(xué)院，河南信陽 464003；3.信陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院,河南信陽 464000；4.信陽師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，河南信陽 464000)

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河南信陽地區(qū)種豬群衣原體血清抗體檢測

馬超鋒1，高進(jìn)勇2，胡積霞1，李何3，馬云4，徐永杰4*

(1.信陽市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南信陽 464000；2.信陽學(xué)院理工學(xué)院，河南信陽 464003；3.信陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院,河南信陽 464000；4.信陽師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，河南信陽 464000)

為了解信陽地區(qū)種豬群衣原體病流行情況，筆者于2013年3月—2015年10月，采用正向間接血凝試驗(yàn)(IHA)對(duì)信陽市65家豬場的1 324份豬血清樣品進(jìn)行了衣原體抗體檢測。結(jié)果顯示，豬衣原體抗體陽性豬場有27個(gè)，占檢測豬場的41.5%，抗體陽性率為11.3%；2013年—2015年抗體陽性率分別為10.1%、11.4%和12.1%；不同季節(jié)抗體陽性率有變化，夏季最高，為13.1%，冬季最低，為9.6%；不同性別間抗體陽性率，母豬為11.7%，公豬為11.0%；1歲以內(nèi)抗體陽性率最低，為8.0%，3歲以上最高，達(dá)到16.8%；不同年齡間豬衣原體抗體陽性率差異極顯著(P<0.01)，且隨年齡增長陽性率有增長的趨勢，不同年份、不同季節(jié)、不同性別間抗體陽性率差異不顯著(P>0.05)。鑒于豬衣原體病的流行狀況，建議有關(guān)部門要做好該病的防控工作。

種豬；衣原體病；正向間接血凝試驗(yàn)；血清抗體；檢測

衣原體病(Chlamydiosis)是一種重要的人獸共患傳染病，豬衣原體病(Swine chlamydiosis)是由衣原體(Chlamydia)所引起的慢性接觸性傳染病，以妊娠母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死胎和弱仔，新生仔豬肺炎、腸炎、胸膜炎、心包炎、關(guān)節(jié)炎，種公豬睪丸炎等多種臨床癥狀為特征[1]。研究表明，豬可感染4種衣原體(豬衣原體、貓心衣原體、流產(chǎn)衣原體和鸚鵡熱衣原體)[2]。豬衣原體病分布于世界各地，我國也時(shí)有發(fā)生，主要造成母豬流產(chǎn)、新生仔豬死亡等，給豬場帶來較大的經(jīng)濟(jì)損失。豬衣原體病已成為國際上公認(rèn)的造成種豬繁殖障礙綜合征的重要病因之一，成為獸醫(yī)界關(guān)注的熱點(diǎn)問題之一。為了解信陽市近年來種豬群豬衣原體感染情況，筆者采用正向間接血凝試驗(yàn)對(duì)信陽市豬場進(jìn)行了豬衣原體病血清流行病學(xué)調(diào)查，以對(duì)該病的防控提供參考依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1樣品收集時(shí)間于 2013年3月—2015年10月間進(jìn)行。

1.1.2樣品的采集地點(diǎn)及制備1 324份血清樣品來自信陽轄區(qū)內(nèi)羅山縣、平橋區(qū)、光山縣、浉河區(qū)、商城縣、新縣、潢川縣、息縣和淮濱縣65家不同規(guī)模豬場的種豬群(不同日齡公豬和母豬)，均未使用過豬衣原體疫苗，血液經(jīng)3 500 r/min，離心5 min，取上清液1.5 mL于滅菌離心管中，統(tǒng)一編號(hào)。處理好的血清均置-20℃冰箱保存，備用待檢。

1.1.3試劑衣原體間接血凝檢測試劑盒,購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所。

1.1.4主要器材TDZ5-WS臺(tái)式低速離心機(jī)，長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司產(chǎn)品；10 μL～1 000 μL單道移液器、25 μL～300 μL多道移液器，德國Eppendorf公司產(chǎn)品；303系列電熱恒溫培養(yǎng)箱，上海樹立儀器儀表有限公司產(chǎn)品；恒溫振蕩器，金壇市醫(yī)療儀器廠產(chǎn)品；超聲波清洗器，深圳市科威信洗凈科技有限公司產(chǎn)品；96孔聚苯乙烯反應(yīng)板，蘇州新康醫(yī)療器械有限公司產(chǎn)品。

1.2方法

1.2.1抗體檢測將抗原置4℃冰箱保存，用時(shí)搖勻；鋪板：每孔加稀釋液0.075 mL；稀釋血清：用稀釋棒蘸取被檢血清0.025 mL加入第1孔，呈4倍遞增稀釋3孔(即1∶4～1∶64)，第3孔棄去0.025 mL，孔內(nèi)液體量仍為0.075 mL，同一板上同時(shí)設(shè)陽性、陰性和空白對(duì)照各2孔；加抗原：每孔內(nèi)加稀釋好的抗原0.025 mL，置微型振蕩器上振蕩2 min，蓋上玻璃板在37℃作用2 h判定結(jié)果。

1.2.2結(jié)果判定對(duì)照各孔均成立，則被檢血清1∶16孔出現(xiàn)“++”以上者為陽性；1∶4孔出現(xiàn)“+”以下者為陰性；1∶4孔“++”至1∶16孔“+”以下者為可疑，應(yīng)重檢。

1.2.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析檢測結(jié)果采用SPSS19.0

軟件進(jìn)行分析，通過卡方檢驗(yàn)分析差異顯著性，P<0.05時(shí)差異顯著，P<0.01差異極顯著。

2　結(jié)果

2.1不同縣區(qū)豬衣原體抗體檢測結(jié)果

結(jié)果見表1。

表1　采樣地點(diǎn)豬衣原體抗體檢測結(jié)果Table 1　Detection results of Chlamydia antibody in pig of different counties

2013年3月—2015年10月，共在65家不同規(guī)模豬場收集到血液樣品1 324份。采用IHA方法檢測豬衣原體抗體，陽性場27個(gè)，陽性場率為41.5%，統(tǒng)計(jì)分析表明，各縣區(qū)間豬場陽性率差異不顯著(P>0.05)，其中平橋豬場區(qū)陽性率最高，為60.0%，其次為羅山縣的55.5%，最低的光山縣為20.0%；檢測樣品1 324份，樣品陽性率為11.3%，各縣區(qū)之間樣品陽性率差異不顯著(P>0.05)，息縣檢出率最高，為15.1%，最低的新縣為6.3%(表1)。

2.2不同年份豬衣原體抗體檢測結(jié)果

2013年、2014年和2015年的抗體陽性率分別為10.1%、11.4%和12.1%，各個(gè)年份均有豬衣原體陽性檢出，但差異不顯著(P>0.05)(圖1)。

圖1　不同年份豬衣原體抗體檢測結(jié)果

2.3不同季節(jié)豬衣原體抗體檢測結(jié)果

從圖2可以看出，不同季節(jié)豬衣原體抗體陽性率有變化，夏季最高，為13.1%，冬季最低，為9.6%(P>0.05)，即各個(gè)季節(jié)間豬衣原體陽性率差異不顯著。

2.4不同性別豬衣原體抗體檢測結(jié)果

檢測結(jié)果顯示(圖3)，母豬抗體陽性率為11.7%，略高于公豬的11.0%，但差異不顯著(P>0.05)。

圖2　不同季節(jié)豬衣原體抗體檢測結(jié)果

圖3　不同性別豬衣原體抗體檢測結(jié)果

2.5不同年齡段豬衣原體抗體檢測結(jié)果

從圖4可見，隨年齡增長，豬衣原體抗體陽性率在升高，1歲以內(nèi)最低，為8.0%，3歲以上最高，達(dá)到16.8%，對(duì)檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行卡方檢驗(yàn)分析顯示，各個(gè)年齡段間抗體陽性率差異極顯著(P<0.01)。

圖4　不同年齡豬衣原體抗體檢測結(jié)果

3　討論

近年來，信陽市部分不同規(guī)模豬場的母豬群經(jīng)常性發(fā)生繁殖障礙性疾病，造成母豬流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎、產(chǎn)弱仔及新生仔豬死亡等，給我市生豬養(yǎng)殖業(yè)帶來較大的經(jīng)濟(jì)損失。由于能引起母豬繁殖障礙綜合征的疾病較多，有豬瘟、豬圓環(huán)病毒感染、豬藍(lán)耳病、偽狂犬病、豬細(xì)小病毒病、豬弓形蟲病等，給診斷和防控帶來較大難度。因此，摸清豬衣原體病在信陽市豬場內(nèi)的感染狀況對(duì)準(zhǔn)確診斷種豬疫病和采取綜合防控措施有重要參考意義。本次血清流行病學(xué)調(diào)查采用IHA方法檢測抗體，覆蓋全市7縣2區(qū)65個(gè)豬場，能夠較全面的代表信陽市豬衣原體感染情況。從檢測結(jié)果來看，豬衣原體抗體陽性場率為41.5%(27/65)，表明豬衣原體在信陽市感染已較普遍。2000年何啟蓋[3]等對(duì)我國5省(湖北、河南、廣東、江西和海南)豬衣原體調(diào)查的場感染率為67.8%，其中河南的場陽性率為25%，低于本次調(diào)查；周平等[4]2008年調(diào)查福建龍巖15個(gè)豬場，場感染率為100%，遠(yuǎn)高于本次調(diào)查的41.5%。本次調(diào)查樣品1 324份，抗體陽性率為11.3%，其他學(xué)者調(diào)查河南省的感染情況如下：何啟蓋等2000年[3]調(diào)查河南省陽性率為26.5%；王江輝等[5]2006年調(diào)查河南省部分地區(qū)(新鄉(xiāng)、周口、焦作、開封、洛陽、安陽六地)的感染率為25.5%，均高于信陽市的陽性率；國內(nèi)其他省份調(diào)查情況包括廣東部分地區(qū)的66.4%[6]、青海的53.3%[7]、甘肅部分豬場的34.40%[8]、福建龍巖部分豬場的27.71%[4]高于本次調(diào)查，與云南部分地區(qū)的18.5%[9]、廣東東莞的14.97%[10]相近，江蘇淮安的5.44%[11]、遼寧鐵嶺的5.14%[12]、北京郊區(qū)的4.14%[13]低于本次調(diào)查。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)信陽市各縣區(qū)豬場均有豬衣原體病陽性檢出，分析造成感染率高的原因如下：一是近年來豬肉價(jià)格持續(xù)走高，部分養(yǎng)殖場戶為追求經(jīng)濟(jì)效益，開始養(yǎng)殖豬或者擴(kuò)大養(yǎng)殖規(guī)模，盲目引種，而對(duì)所引豬群健康狀況缺少了解；二是飼養(yǎng)管理水平不高，我市大部分豬場規(guī)模不大，生產(chǎn)水平低下，有些養(yǎng)殖戶對(duì)豬的飼養(yǎng)管理知識(shí)知之甚少，缺乏有效的生物安全管理措施，應(yīng)激發(fā)病因素較多；三是重治療輕防疫保健。

本次豬衣原體抗體檢測結(jié)果顯示，不同季節(jié)陽性率有差異，但不顯著，夏季最高，為13.1%，冬季最低，為9.6%，與周平等[4]2008年報(bào)道的夏秋高于冬春季的情況相近；不同性別間衣原體抗體陽性率差異不顯著，母豬略高于公豬(11.7%>11.0%)，與周平[4]報(bào)道相反；不同年齡豬間衣原體抗體陽性率差異極顯著，且隨年齡增大，陽性率有增大的趨勢，分析原因可能與生長周期長的豬，較易接觸到環(huán)境中處于感染階段的衣原體有關(guān)。

衣原體病是可通過呼吸道等途徑在多種動(dòng)物間傳播的重要人獸共患病，引起母畜流產(chǎn)、肺炎等，給人類和動(dòng)物健康帶來較大威脅。衣原體病缺乏明顯的臨產(chǎn)癥狀，但危害極大，因此準(zhǔn)確的診斷顯得尤為重要，臨床上要注意豬衣原體病與豬藍(lán)耳病、鏈球菌、豬瘟等的鑒別診斷。要做好信陽市豬衣原體病的防控，建議豬場采取綜合性的防控措施：一是把好引種關(guān)。所引種豬進(jìn)場前要檢測，陽性豬杜絕進(jìn)場；二是加強(qiáng)豬群檢測。提高檢測頻次，擴(kuò)大檢測范圍，不同階段的豬群定期抽樣進(jìn)行抗體檢測，根據(jù)檢測結(jié)果結(jié)合臨床表現(xiàn)采取針對(duì)性措施，陽性種豬要淘汰；三是豬場要做好滅鼠和防鳥工作。豬場內(nèi)鼠類和鳥類在衣原體和其他病原體傳播中發(fā)揮重要作用，也是重要傳染源；四是嚴(yán)格豬場生物安全管理措施?？刂迫藛T進(jìn)出豬場，做好日常消毒工作，豬場不同區(qū)域定時(shí)消毒，消毒藥要輪換使用確保消毒效果；五是采用藥物防治。四環(huán)素、大環(huán)內(nèi)酯類和氟苯尼考等藥物連續(xù)使用10 d～15 d可有效控制衣原體感染。

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Seral Antibody Detection ofChlamydiain Breeding Swine Herds in Xinyang of Henan Province

MA Chao-feng1，GAO Jin-yong2,HU Ji-xia1，LI He3，MA Yun4，XU Yong-jie4

(1.XinyangAnimalDiseaseControlandPreventionCenter,Xinyang,Henan,464000,China;2.ScienceandTechnologyCollege,XinyangUniversity,Xinyang,Henan,464000,China;3.CollegeofPharmacy,XinyangVocationalandTechnicalCollege,Xinyang,Henan,464000,China;4.CollegeofLifeSciences,XinyangNormalUniversity,Xinyang,Henan,464000,China)

A survey was performed in order to understand the infection ofChlamydiain breeding swine herds in Xinyang district during the period from March 2013 to December 2015.By employing IHA, 1 324 serum samples collected from 65 pig farms in Xinyang were detected and analyzed.The results showed that 27 pig farms were positive,taking up 41.5% among all detected farms,and the average positive rate of detected samples was 11.3%;from 2013 to 2015, the positive rate was 10.1%,11.4% and 12.1% respectively; the positive rates ranged in different seasons,from 13.1% the highest in summer,to 9.6% the lowest in winter;the positive rate of hogs and sows is 11.7% and 11.0% respectively; pigs within one year old have the lowest positive rate (8.0%) while pigs above the age of three yeas have the highest positive rate(16.8%). It can be concluded that the differences of positive rates among pigs with various ages were extremely significant (P<0.01);and the positive rate increased as pigs get older,while there were no significant differences in positive rates between different years,seasons and sexes(P>0.05).In view of the prevalence of chlamydiosis in Xinyang,it is strongly suggested that the relevant executive departments take effective measures in preventing and controlling swine chlamydiosis.

breeding swine;Chlamydiosis；IHA；seral antibody;detection

2016-03-20

河南省信陽市動(dòng)物疫病綜合防控項(xiàng)目基金(2014年)

馬超鋒(1981-)，男，河南禹州人，高級(jí)獸醫(yī)師，碩士，主要從事動(dòng)物疫病防控工作。*通訊作者

S858.28

B

1007-5038(2016)10-0119-04