天麻鉤藤飲不同分離部位對偏頭痛模型大鼠的影響

徐慧青，夏伯侯，趙珺彥

1.江山市中醫(yī)院，浙江 江山 324100

2.湖南中醫(yī)藥大學，湖南 長沙 410208

3.杭州市蕭山區(qū)第一人民醫(yī)院，浙江 杭州 311200

天麻鉤藤飲不同分離部位對偏頭痛模型大鼠的影響

徐慧青1，夏伯侯2，趙珺彥3

1.江山市中醫(yī)院，浙江 江山 324100

2.湖南中醫(yī)藥大學，湖南 長沙 410208

3.杭州市蕭山區(qū)第一人民醫(yī)院，浙江 杭州 311200

目的：觀察天麻鉤藤飲大孔樹脂不同分離部位對偏頭痛模型大鼠的影響。方法：按隨機數(shù)字表法將70只SD大鼠隨機分為陽性對照組（西比靈組）、正常對照組、模型對照組、天麻鉤藤飲（TMGTY）組、天麻鉤藤飲30%part組（以下簡稱30% part組）、天麻鉤藤飲60%part組（以下簡稱60%part組）、天麻鉤藤飲90%part組（以下簡稱90%part組）共7組。采用皮下注射硝酸甘油注射液復制偏頭痛大鼠模型；采用時間分段計數(shù)法持續(xù)觀察造模后大鼠耳紅出現(xiàn)和消失時間、撓頭等行為學的變化情況；采用酶免法測定各組大鼠血清5-羥色胺（5-HT）和腎上腺素（E）含量。結果：正常對照組未出現(xiàn)耳紅癥狀，其余各組均出現(xiàn)耳紅癥狀（P＜0.01）。除正常對照組外，各組耳紅出現(xiàn)時間整體比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。與模型對照組比較，TMGTY組、60%part組的耳紅消失時間均縮短（P＜0.05）；30%part組、90%part組大鼠耳紅消失時間雖有縮短趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。模型對照組在皮下注射10 mg/kg硝酸甘油注射液后30～150 min的撓頭次數(shù)較正常對照組增加（P＜0.01）。與模型對照組比較，60%part組在0～150 min內不同時間段的撓頭次數(shù)均減少（P＜0.05，P＜0.01）；TMGTY組僅在30～60 min時間段撓頭次數(shù)減少（P＜0.05）；30%part組和90%part組僅在120～150 min時間段時間段撓頭次數(shù)減少（P＜0.05）。與正常對照組比較，模型組對照組的血清5-HT含量降低（P＜0.01），血清E含量升高（P＜0.05）。與模型對照組比較，TMGTY組、60%part組和90%part組的血清5-HT水平均升高（P＜0.01），30%part組的血清5-HT水平有升高趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；TMGTY組、30%part組、60%part組和90%part組的血清E水平均下降（P＜0.05，P＜0.01）。結論：天麻鉤藤飲60%乙醇洗脫部位能有效改善模型大鼠耳紅、撓頭等癥狀，調節(jié)模型大鼠的血清5-HT、E含量。

偏頭痛；大孔樹脂；天麻鉤藤飲；5-羥色胺（5-HT）；腎上腺素（E）

天麻鉤藤飲為臨床常用潛陽方，具有平肝熄風、清熱安神的功效。已有研究表明，該方治療肝陽上亢型偏頭痛［1］具有良好的療效，但有關該方不同分離部位抗偏頭痛的藥理作用的實驗研究報道尚少，需進一步深入研究。為此，筆者制備了多個天麻鉤藤飲分離部位進行對比分析，旨在觀察天麻鉤藤飲不同分離部位對偏頭痛模型大鼠行為學及血清單胺類神經(jīng)遞質等的影響。研究結果報道如下。

1　實驗材料

1.1動物選取清潔級SD大鼠70只，雌雄各半，體重（200±20）g，均由浙江省醫(yī)學科學院動物中心提供，合格證號：SCXK（浙）20080033。

1.2藥物及試劑造模藥：硝酸甘油注射液（廣州明興白云制藥廠，10 mg/kg）；陽性藥：西比靈膠囊（西安楊森制藥有限公司），用蒸餾水配制成0.167 mg/mL溶液。天麻鉤藤飲不同分離部位：取天麻鉤藤飲（TMGTY）各組方藥材，加12倍量的蒸餾水，提取3次，每次1.5 h，濾取藥液合并后減壓濃縮至約1 g（生藥）/mL，得TMGTY水提取液；TMGTY水提取液經(jīng)D101大孔樹脂吸附后，依次用蒸餾水、30%、60%、95%乙醇溶液洗脫。收集各乙醇洗脫液，減壓回收溶劑，得3個分離部位（30%part，60%part，90%part），各部位每1 mL藥液相當于1 g生藥。5-羥色胺（5-HT）酶聯(lián)免疫試劑盒型號（Lot：BP-E30236）、腎上腺素（E）酶聯(lián)免疫試劑盒（型號 Lot：BP-E30233），均購于上海信帆生物科技有限公司。

1.3主要儀器冷凍離心機（德國HERAEUS公司），STAT FAX 2100全自動酶免疫分析儀（美國AWARENESS公司）；FA2204B型電子天平（上海精科天美科學儀器有限公司）。

2　實驗方法

2.1分組與給藥按隨機數(shù)字表法將70只SD大鼠隨機分為陽性對照組（西比靈組）、正常對照組、模型對照組、天麻鉤藤飲（TMGTY）組、天麻鉤藤飲30%part組（以下簡稱30%part組）、天麻鉤藤飲60%part組（以下簡稱60%part組）、天麻鉤藤飲90%part組（以下簡稱90%part組）共7組，每組10只。實驗期間予基礎飼料，自由采水飲食。正常對照組、模型對照組給予10 g/kg蒸餾水，西比靈組給予1.67 mg/kg西比靈溶液，其余各組均相應給予天麻鉤藤飲與分離部位提取液。灌胃容積每100 g體重1 mL，每天1次，連續(xù)給藥7天。末次給藥30 min后，除正常對照組注射生理鹽水外，其余各組均皮下注射10 mg/kg硝酸甘油注射液復制偏頭痛模型。

2.2行為學指標觀察①耳紅時間：造模后立即觀察各組大鼠耳紅出現(xiàn)和消失時間；②撓頭次數(shù)：造模后，以每30 min作為一個時間段，觀察大鼠在每個時間段的撓頭次數(shù)。

2.3血清單胺類神經(jīng)遞質含量測定造模4 h后，分別對大鼠進行眼眶采血，采血劑量為2 mL，而后進行離心處理，離心率為3000 r/min，離心時間為10 min，分離出上層血清備用。隨后采取酶聯(lián)免疫法測定血清單胺類神經(jīng)遞質5-HT、E的含量，操作過程嚴格按照說明書進行。

2.4統(tǒng)計學方法采用SPSS16.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料以（±s）表示，多組間比較采用方差分析，組間兩兩比較采用t檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

3　研究結果

3.1各組耳紅出現(xiàn)和消失時間比較見表1。正常對照組未出現(xiàn)耳紅癥狀，其余各組均出現(xiàn)耳紅癥狀。除正常對照組外，各組耳紅出現(xiàn)時間整體比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；各組耳紅消失時間整體比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。與模型對照組比較，TMGTY組、60%part組的耳紅消失時間均縮短（P＜0.05）；30%part組、90%part組大鼠耳紅消失時間雖有縮短趨勢，但差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

表1　各組耳紅出現(xiàn)和消失時間比較（±s）

表1　各組耳紅出現(xiàn)和消失時間比較（±s）

與模型對照組比較，①P<0.05

組別正常對照組模型對照組西比靈組TM GTY組30%part組60%part組90%part組劑量（g/kg）1.67×10-310 10 10 10耳紅出現(xiàn)時間（min）0 5.8±0.3 6.8±1.2 4.9±1.3 4.0±2.3 5.6±2.3 5.1±2.1耳紅消失時間（min）0 177.1±8.4①148.3±11.9②157.3±11.6②164.3±18.7 141.1±23.0②161.4±24.1

3.2各組不同時間段撓頭次數(shù)比較見表2。模型對照組在皮下注射10 mg/kg硝酸甘油注射液后30～150 min的撓頭次數(shù)均較正常對照組增加，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。與模型對照組比較，60%part組在0～150 min內不同時間段的撓頭次數(shù)均減少（P＜0.05，P＜0.01）；TMGTY組僅在30～60 min撓頭次數(shù)減少（P＜0.05）；30%part組和90%part組僅在120～150 min撓頭次數(shù)減少（P＜0.05）。

表2　各組不同時間段撓頭次數(shù)比較（±s）　次

表2　各組不同時間段撓頭次數(shù)比較（±s）　次

與正常對照組同時段比較，①P<0.01；與模型對照組同時段比較，②P<0.05，③P<0.01

撓頭次數(shù)組別正常對照組模型對照組西比靈組TM G TY組30%part組60%part組90%part組劑量（g/kg）1.67×10-310 10 10 10 0～30/min 0.7±0.2 32.9±4.8 27.1±8.8①②31.4±3.1①31.8±6.1①27.5±7.2①②30.3±8.0①30～60/min 0.6±0.1 37.2±6.8①29.2±8.1①②31.8±3.9①②34.5±2.6①29.1±5.7①②32.0±6.3①60～90/min 0.6±0.2 28.1±4.8①22.1±6.3①②26.5±5.6①25.6±3.5①22.9±3.7①②25.2±4.1①90～120/min 0.4±0.1 21.3±7.9①14.5±3.7①②19.3±3.1①17.9±4.6①15.9±2.7①②17.4±3.0①120～150/min 0.3±0.1 19.5±6.3①13.8±3.1①②15.7±3.2①13.9±5.1①②13.3±3.7①③14.8±4.1①②

3.3各組血清單胺類神經(jīng)遞質含量比較見表3。與正常對照組比較，模型對照組的血清5-HT含量降低（P＜0.01），血清E含量升高（P＜0.05）。與模型對照組比較，TMGTY組、60% part組和90%part組的血清5-HT水平均升高（P＜0.01），30%part組的血清5-HT水平有升高趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；TMGTY組、30%part組、60%part組和90% part組的血清E水平均下降（P＜0.05，P＜0.01）。

表3　各組血清單胺類神經(jīng)遞質含量比較（±s）

表3　各組血清單胺類神經(jīng)遞質含量比較（±s）

與正常對照組比較，①P<0.01；與模型對照組比較，②P<0.05，③P<0.01

組別正常對照組模型對照組西比靈組TM G TY組30%part組60%part組90%part組劑量（g/kg）1.67×10-310 10 10 10 5-H T（ng/L）211.6±78.9 98.4±11.9①131.8±37.0③141.0±28.5③117.5±31.5 175.6±50.2③167.3±24.0③E（μg/L）17.2±3.22 28.9±7.94①15.4±2.39③22.0±4.81②19.9±2.19③16.6±4.90③18.5±5.38③

4　討論

已有研究結果表明，硝酸甘油致偏頭痛大鼠動物模型造模成功后，大鼠會出現(xiàn)雙耳發(fā)紅、前肢頻繁搔頭、煩躁不安等類似人類頭痛現(xiàn)象。故耳紅出現(xiàn)及消失時間、單位時間段內撓頭次數(shù)等行為學指標可作為判斷模型復制成功與否及防治偏頭痛是否有效的指標［2］。本研究中，皮下注射硝酸甘油注射液后約5 min，大鼠出現(xiàn)雙耳發(fā)紅、前肢頻繁搔頭、煩躁不安的現(xiàn)象，持續(xù)約3 h，繼而出現(xiàn)蜷臥、活動減少的狀態(tài)，提示造模成功。本研究結果顯示，天麻鉤藤飲及其不同分離部位的乙醇洗脫液均能一定程度改善上述癥狀，說明各個分離部位對改善偏頭痛病情均有一定作用。

在天麻鉤藤飲各受試物中，對模型大鼠行為學的改善作用，以60%乙醇洗脫部位的效果最為優(yōu)越。已有研究表明，偏頭痛的發(fā)生與血管活性物質、單胺類神經(jīng)遞質的釋放或代謝異常有關［3～4］。本研究中，模型對照組血清5-HT含量下降（P＜0.05），血清E含量上升（P＜0.05），提示模型大鼠體內這兩個神經(jīng)遞質存在代謝紊亂現(xiàn)象。天麻鉤藤飲及其不同分離部位的乙醇洗脫液均能一定程度地調節(jié)大鼠血清5-HT、E水平，其中60%乙醇洗脫部位效果最顯著。天麻鉤藤飲中含有黃芩苷、梔子苷等黃酮類及環(huán)烯醚萜苷等成分，可被D101等大孔樹脂吸附、分離。結合行為學結果和天麻鉤藤飲的組成成分分析，推測60%乙醇洗脫部位可能有效地聚集了天麻鉤藤飲中抗偏頭痛的有效成分，但該部位具體的成分分析、含量測定及成分—藥效相關性分析尚待進一步研究。

［1］黃月芳，樓招歡.天麻鉤藤飲治療肝陽上亢型偏頭痛臨床觀察［J］.浙江中西醫(yī)結合雜志，2011，21（12）：858-859.

［2］付先軍，宋旭霞，周永紅，等.硝酸甘油型實驗性偏頭痛大鼠模型行為癥狀學評價［J］.中華神經(jīng)醫(yī)學雜志，2005，4（5）：449-451.

［3］曾勇，李佳川，孟憲麗.頭風愈滴丸對偏頭痛動物單胺類神經(jīng)遞質含量的影響［J］.中藥藥理與臨床，2008，24（5）：57-58.

［4］殷民，房桂青.清腦靈對硝酸甘油型偏頭痛模型大鼠血清NE和5-HT的影響［J］.山東醫(yī)藥，2008，48（34）：41-42.

（責任編輯：吳凌，劉迪成）

Effect of Different Fractions of Tianma Gouteng Yin on migraine Model Rats

XU Huiqing，XIA Bohou，ZHAO Junyan

Objective：To observe macroporous resin fraction of Tianma Gouteng Yin on migraine model rats，to provide reference for selecting effective parts of Tianma Gouteng tang anti-migraine.Methods：Seventy rats were divided into seven groups：positive control group，normal control group，model control group，Tianma Gouteng tang（TMGTY）group，TMGTY 30%part，60%part，90%part group.Copied migraine models by injecting subcutaneously nitroglycerin injection，observed constantly appearance and disappearance time of red ears，as well as ethology changes including scratching head after modeling by time slicing counting method，detected levels of 5-hydroxytryptamine（5-HT）and epinephrine（E）in serum of every group by ELISA method.Results：There was no symptom of red ears in normal control group，other groups appeared symptom of red ears（P＜0.01）.Except normal control group，comparing appearance time of red ears in each group，there was no significant difference（P＞0.05）.Comparing with model control group，disappearance time of red ears in TMGTY group and TMGTY 60%part group was reduced（P＜0.05）；although disappearance time of red ears in 30%part and 90%part group had reduction tendency，there was no statistical significance（P＞0.05）.The phenomenon of scratching head appeared in model control group after 30～150 min of injecting 10 mg/kg nitroglycerin injection subcutaneously（P＜0.01 compared with before）. Comparing with model control group，the number of scratching head on different time period during 0～150 min in 60%part group were all reduced（P＜0.05，P＜0.01）；the number of scratching head were reduced only during 30～60 min in TMGTYgroup（P＜0.05）；the number of scratching head were reduced only during 120～150min in 30%part and 90%part group（P＜0.05）.Comparing with normal control group，levels of 5-HT in serum of model control group were reduced（P＜0.01），levels of E in serum were increased（P＜0.05）.Comparing with model control group，levels of 5-HT in serum of TMGTY group，60% part group and 90%part group were all increased（P＜0.01）；levels of 5-HT in serum of 30%part group had increasing tendency（P＞0.05）.Levels of E in serum of TMGTY group 30%part group，60%part group and 90%part group were all reduced（P＜0.05，P＜0.01）.Conclusion：TMGTY 60%part can improve red ears，scratching head and other syndromes effectively，regulate levels of 5-HT and E in rat.

Migraine；Macroporous resin；Tianma Gouteng yin；5-hydroxytryptamine（5-HT）；Epinephrine（E）

R747.2

A

0256-7415（2016）09-0222-03

10.13457/j.cnki.jncm.2016.09.098

2016-05-17

徐慧青（1971-），女，副主任中藥師，主要從事中藥治療心腦血管疾病的臨床研究。