高效液相色譜法對PHEMA液體栓塞材料中單體殘留的超痕量分析

朱肖杰，朱小敏，馬麗霞，王傳棟，夏毅然，孟建文

(山東省藥學(xué)科學(xué)院，山東省醫(yī)用高分子材料重點實驗室，濟南 250101)

1 引 言

介入栓塞術(shù)是介入治療中的一項重要技術(shù)，它是將栓塞材料有控制的注入到病變器官的供血血管內(nèi)或病變血管內(nèi)，使之發(fā)生閉塞，中斷血供，以達(dá)到控制出血，控制血管性病變，治療腫瘤，消除病變器官功能的目的。PHEMA液體栓塞材料是一種新型的血管內(nèi)非粘附性液體栓塞材料，由聚合物和顯影劑溶于乙醇水溶液配制而成，其栓塞原理與Onyx栓塞材料類似[1-2]，但卻避免了二甲亞礬的毒性[3]。

PHEMA液體栓塞材料屬于三類植入醫(yī)療器械，用于病變部位的血管栓塞，對材料的安全性要求較高，其參與聚合的主要單體為甲基丙烯酸-β-羥乙酯，對殘留單體的控制是保證材料安全性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，因此，建立共聚物中殘留單體的檢測方法是非常必要的。目前的文獻(xiàn)報道中，對丙烯酸類[4-6]和甲基丙烯酸甲酯[7-8]含量的檢測多采用氣相色譜法，因丙烯酸和甲基丙烯酸類沸點多在150℃以下，而甲基丙烯酸-β-羥乙酯沸點為205～208℃，不適合氣相色譜法。高效液相色譜法對超痕量甲基丙烯酸-β-羥乙酯單體進行定量分析，國內(nèi)外未見公開報道。本研究主要建立了高效液相色譜法對殘留單體甲基丙烯酸-β-羥乙酯的檢測方法，并對線性方程進行了驗證。

2 實驗部分

2.1 主要原料及試劑

自制聚合物PHEMA；乙腈，天津賽孚瑞科技有限公司；甲基丙烯酸-β-羥乙酯標(biāo)準(zhǔn)品，上海士鋒生物科技有限公司。

2.2 實驗儀器

Waters515型高效液相色譜儀，配Waters 2489紫外/可見檢測器；DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器，鞏義市予華儀器有限公司；電子天平，d=0.1 mg，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；101FXB-2型電熱鼓風(fēng)干燥箱，上海樹立儀器儀表有限公司。

2.3 色譜條件

色譜柱：AichromBond-1 C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm)；流動相：乙腈-水(30∶70)；流速：1.0 ml/min；檢測波長：220 nm；進樣量：20 μL

2.4 試驗方法

2.4.1甲基丙烯酸-β-羥乙酯標(biāo)準(zhǔn)儲備液 準(zhǔn)確稱取甲基丙烯酸-β-羥乙酯標(biāo)準(zhǔn)品0.0100 g于250 ml燒杯中，加入150 ml去離子水?dāng)嚢枞芙?，之后? 000 ml容量瓶定容，得0.01 g/L的儲備液，備用。

2.4.2供試品溶液的制備 取聚合物PHEMA 0.2 g，分別加入20 ml去離子水，于37℃水浴中恒溫浸提，浸提時間為24 h，連續(xù)浸提三次，取浸提液過濾并檢測，取三次數(shù)值之和做為單體的殘留量。

2.4.3測定方法 取甲基丙烯酸-β-羥乙酯標(biāo)準(zhǔn)溶液及供試品溶液20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，外標(biāo)法計算含量。

3 結(jié)果與討論

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線測定

取甲基丙烯酸-β-羥乙酯標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用去離子水稀釋并分別配制0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mg/L的HEMA標(biāo)準(zhǔn)溶液，在2.3項色譜條件下進行分析，以標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)(x)，峰面積為縱坐標(biāo)(y)作線性回歸分析[9]，得線性回歸曲線見圖1，線性回歸方程為：y=41622x+6877，R2=0.9992，由此可見，單體甲基丙烯酸-β-羥乙酯在質(zhì)量濃度為0.1～4.0 mg/L的范圍內(nèi)線性良好。

圖1 峰面積對單體濃度的關(guān)系

3.2 檢測限測定

取甲基丙烯酸-β-羥乙酯標(biāo)準(zhǔn)儲備液，依次稀釋并測定，以3倍信噪比的計算方法得檢測下限為0.01 mg/L。

3.3 精密度試驗

取2.0 mg/L濃度的甲基丙烯酸-β-羥乙酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照2.3項下的色譜條件連續(xù)進樣5次，測得峰面積RSD為1.07%，精密度良好。

3.4 回收率試驗

已知含量分別為0.41、1.56、3.07 mg/L 的供試品，各取3份，并分別加入相當(dāng)于最終濃度的0.5、2.0、4.0 mg/L的甲基丙烯酸-β-羥乙酯標(biāo)準(zhǔn)液，將9份樣品按照2.3項下的色譜條件進樣分析，得平均加標(biāo)回收率(%)和RSD(%)見表1，計算得加標(biāo)回收率為99.5%～102.0%，RSD≤2%。

表1 殘留單體的加標(biāo)回收率

3.5 樣品中甲基丙烯酸-β-羥乙酯殘留量的測定

按照2.4方法對PHEMA聚合物進行處理并浸提，浸提液過濾并按2.3色譜條件進行分析，按照外標(biāo)法以峰面積對單體濃度計算，三個批次的樣品測得的峰面積和單體濃度見表2。由表2可以看出，三個批次浸提液測得的殘留單體之和分別為0.4443、0.4589、0.4413 mg/L，計算得聚合物中的單體含量為4.443×10-3%，4.589×10-3%，4.413×10-3%。圖2為1號樣品第一次浸提液的液相色譜圖。

表2 樣品單體殘留量

圖2 樣品浸提液的色譜圖

4 結(jié)論

本研究建立了一種對PHEMA液體栓塞材料中單體殘留的超痕量分析方法，檢測下限可達(dá)0.01 mg/L，精密度相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.07%，回收率在99.5%～102.0%之間，回收率相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD≤2%，單體濃度在0.1～4.0 mg/L的范圍內(nèi)，與峰面積成良好的線性關(guān)系。本方法具有檢測限低，操作簡單，靈敏度高等特點。