VEGF、Bmi-1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)及意義

劉志　趙春清　張彬　李威　高立學(xué)　閆威　劉松　張濤　范立壯　婁紅

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·論著·

VEGF、Bmi-1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)及意義

劉志趙春清張彬李威高立學(xué)閆威劉松張濤范立壯婁紅

目的檢測(cè)VEGF、Bmi-1在結(jié)腸癌及癌旁正常組織中的表達(dá)，并分析其與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。方法選取 2009年1月至2012年12月的結(jié)腸癌患者60例為觀察組，同期癌旁正常組織 20 例為對(duì)照組，采用免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)腸癌組織和癌旁正常組織中VEGF、Bmi-1的表達(dá)情況，并分析其與結(jié)腸癌臨床病理特點(diǎn)、預(yù)后及相互關(guān)系。結(jié)果免疫組織化學(xué)檢測(cè)顯示觀察組VEGF、Bmi-1表達(dá)明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，觀察組VEGF、Bmi-1表達(dá)均與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度、TNM分期有關(guān)(P<0.05)，而二者的表達(dá)與年齡、性別、腫瘤大小無關(guān)(P>0.05)，觀察組患者結(jié)腸癌組織中VEGF、Bmi-1表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.667，P<0.05)，VEGF表達(dá)陽(yáng)性者3年生存率與表達(dá)陰性者生存率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論VEGF、Bmi-1表達(dá)與結(jié)腸癌發(fā)生，發(fā)展密切相關(guān)，VEGF可作為結(jié)腸癌評(píng)估預(yù)后的觀測(cè)指標(biāo)。

VEGF；Bmi-1；結(jié)腸癌；免疫組化

結(jié)腸癌為消化道常見的惡性腫瘤之一，近年來結(jié)腸癌病死率及發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，隨著人們生活水平的提高，生活質(zhì)量的改善，結(jié)腸癌已經(jīng)嚴(yán)重影響人們生命健康，而結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多基因、多因素共同作用的結(jié)果[1]，因此積極尋找預(yù)測(cè)結(jié)腸癌生物行為的標(biāo)志物對(duì)結(jié)腸癌的發(fā)病機(jī)制、診斷、綜合治療和評(píng)估預(yù)后具有重要意義。VEGF是腫瘤血管生成的主要調(diào)控因子，與腫瘤的生長(zhǎng)和浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，Bmi-1基因于1991年被發(fā)現(xiàn)，屬于多梳基因家族成員，研究發(fā)現(xiàn)Bmi-1與人類多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)[2,3]，本研究中通過免疫組化技術(shù)，檢測(cè)VEGF、Bmi-1蛋白在結(jié)腸癌組織和癌旁正常組織中的表達(dá)情況，探討二者與結(jié)腸癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，并研究二者之間的相關(guān)性。

1　資料與方法

1.1一般資料選取 2009年1月至2012年12月在保定市第二醫(yī)院收治并經(jīng)病理證實(shí)的結(jié)腸癌患者石蠟標(biāo)本60例患者為觀察組，癌旁正常組織 20 例(距癌灶>10 cm)為對(duì)照組，所有患者術(shù)前均未行放療、化療及生物靶向治療等，全部患者術(shù)后標(biāo)本均再次復(fù)習(xí)明確病理診斷，男37例，女23例；年齡24～79歲，平均年齡(57±9)歲；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性28例，陰性32例；高中分化33例，低分化27例；腫瘤直徑≥5 cm 31例，<5 cm 29例；按美國(guó)癌癥聯(lián)合會(huì)(AJCC)制定的TNM病理分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ～Ⅱ期30例，Ⅲ～Ⅳ期30例。所有病例有完整的臨床資料及3年隨訪資料，隨訪方式為電話隨訪，死亡時(shí)間以月為計(jì)量單位，無失訪病例。

1.2試劑 Bmi-1兔抗人單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)AB-GENT公司， VEGF兔抗人單克隆抗體，即用型 S- P免疫組化染色試劑盒均為 Santa cruz公司產(chǎn)品，用已知陽(yáng)性標(biāo)本作為陽(yáng)性對(duì)照,以 PBS代替一抗為陰性對(duì)照。

1.3方法所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，連續(xù)制成 4 μm厚切片若干張，均進(jìn)行SP法免疫組化染色，實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4免疫結(jié)果的判定VEGF陽(yáng)性為棕黃色/棕褐色顆粒，主要定位于細(xì)胞質(zhì)中，Bmi-1陽(yáng)性染色為棕黃色顆粒，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。 采用雙評(píng)分法判定結(jié)果： (1)5個(gè)高倍鏡視野(400×)， 按陽(yáng)性細(xì)胞百分率(A值)評(píng)分： <25%為1分， 25%～50%為2分，>50%為3分；(2)按染色強(qiáng)度(B值)評(píng)分：不著色為0分，淺棕黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。結(jié)果判定： A+B >2分為陽(yáng)性，≤2分為陰性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件,計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn),相關(guān)性檢驗(yàn)采用Spearman檢驗(yàn),生存率計(jì)算采用Kaplan- Meier法,檢驗(yàn)采用Log- Rank法,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1VEGF、Bmi-1蛋白在結(jié)腸癌及癌旁正常組織中的表達(dá)VEGF的表達(dá)主要定位于細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色或棕褐色顆粒， VEGF在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)率為66.67%(40/60)，在癌旁正常組織的表達(dá)率為5%(1/20)，VEGF在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)率明顯高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Bmi-1的表達(dá)主要定位于細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒， Bmi-1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)率為65%(39/60)，在癌旁正常組織的表達(dá)率為0(0/20)，Bmi-1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)率明顯高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖1、2。

圖1 VEGF在結(jié)腸癌中的表達(dá)(SP×400)圖2 Bmi-1在結(jié)腸癌中的表達(dá)(SP×400)

2.2VEGF、Bmi-1蛋白表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理特征的關(guān)系本研究發(fā)現(xiàn)VEGF、Bmi-1蛋白表達(dá)均與結(jié)腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度、TNM分期相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，即有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度差、TNM分期晚患者VEGF、Bmi-1蛋白高表達(dá)，且呈現(xiàn)遞增趨勢(shì)，但二者的表達(dá)均與年齡、性別、腫瘤大小無關(guān)。見表1。

表1　VEGF、Bmi-1蛋白表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理特征關(guān)系　例

2.3VEGF、Bmi-1蛋白表達(dá)與結(jié)腸癌患者預(yù)后的關(guān)系本研究隨訪3年生存率為70%(42/60)，利用Kaplan-Meier作生存曲線圖分析60例結(jié)腸癌患者VEGF、Bmi-1蛋白表達(dá)陽(yáng)性者與陰性者生存率的關(guān)系，再用Log-Rank法檢驗(yàn)兩者統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果顯示VEGF蛋白表達(dá)陽(yáng)性者生存率60%(24/40)低于VEGF蛋白表達(dá)陰性者生存率90%(18/20)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.569，P=0.018)。Bmi-1蛋白表達(dá)陽(yáng)性者生存率66.67%(26/39)與表達(dá)陰性者生存率76.19%(16/21),無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=0.720，P=0.396)。見圖3、4。

圖3　VEGF陽(yáng)性組與陰性組生存率

2.4VEGF、Bmi-1蛋白表達(dá)在結(jié)腸癌中的相關(guān)性本研究發(fā)現(xiàn)VEGF、Bmi-1蛋白表達(dá)均陽(yáng)性者35例，均陰性者16例，經(jīng)Spearman 相關(guān)分析顯示VEGF蛋白表達(dá)與Bmi-1蛋白表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.667，P=0.00)。見表2。

圖4　Bmi-1陽(yáng)性組與陰性組生存率

表2　結(jié)腸癌組織中VEGF、Bmi-1蛋白表達(dá)的相關(guān)性 例

3　討論

VEGF是目前已知的最強(qiáng)的血管生成因子，而眾多的實(shí)體腫瘤生長(zhǎng)、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移與新生血管密切相關(guān)[4]，研究發(fā)現(xiàn)VEGF在腎癌，乳腺癌，黑素瘤，肝癌，胃癌，大腸癌，膀胱癌，子宮內(nèi)膜癌及胚胎組織性腫瘤中表達(dá)，且腫瘤組織VEGF表達(dá)水平與惡性程度成正相關(guān)，并明顯高于非腫瘤組織[5]，本研究通過免疫組化技術(shù)檢測(cè)VEGF在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)情況，結(jié)果顯示VEGF在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，推測(cè)VEGF在結(jié)腸癌的發(fā)生過程中起著重要作用，VEGF可直接刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞的分裂和增殖，從而促進(jìn)腫瘤血管的生成，并且增加血管的滲出，提高血管的通透性，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞易于侵入和穿透血管，實(shí)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移[6，7]，丁暉等[8]研究發(fā)現(xiàn)VEGF高表達(dá)與結(jié)腸癌肝肺轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，張澤進(jìn)等[9]研究發(fā)現(xiàn)VEGF高表達(dá)促進(jìn)了結(jié)腸癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，本研究顯示VEGF在結(jié)腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤低分化、TNM分期Ⅲ、Ⅳ期中呈高表達(dá)，明顯高于結(jié)腸癌無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤高中分化、TNM分期Ⅰ、Ⅱ期組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示VEGF在結(jié)腸癌發(fā)展、轉(zhuǎn)移、惡化中具有重要作用，Liang等[10]研究發(fā)現(xiàn)結(jié)腸癌中VEGF表達(dá)陽(yáng)性患者預(yù)后較差，并認(rèn)為VEGF是結(jié)腸癌預(yù)后獨(dú)立的危險(xiǎn)因素，本研究隨訪發(fā)現(xiàn)結(jié)腸癌患者中VEGF蛋白表達(dá)陽(yáng)性者3年生存率低于VEGF蛋白表達(dá)陰性者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，這與上述觀點(diǎn)一致，由此我們認(rèn)為VEGF可作為評(píng)估結(jié)腸癌預(yù)后的觀測(cè)指標(biāo)。

Bmi-1是多梳基因家族(polycomb group genes，P cG)重要的成員之一，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化與衰老，并且維持多種正常干細(xì)胞和腫瘤干細(xì)胞的自我更新和增殖[11]。研究發(fā)現(xiàn)Bmi-1在多種惡性腫瘤中如肺癌、乳腺癌、卵巢癌、鼻咽癌 、結(jié)直腸癌及胃癌等高表達(dá)，表明其與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[12，13]，本研究發(fā)現(xiàn)結(jié)腸癌中Bmi-1的表達(dá)明顯高于癌旁正常組織，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者Bmi-1表達(dá)明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，腫瘤低分化者明顯高于腫瘤高、中分化者，TNM分期Ⅲ、Ⅳ期患者明顯高于Ⅰ、Ⅱ期患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示Bmi-1參與了結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展，表明Bmi-1過度表達(dá)的結(jié)腸癌更具有轉(zhuǎn)移和侵襲能力，Li等[14]研究發(fā)現(xiàn)Bmi-1高表達(dá)的結(jié)腸癌患者預(yù)后更差，認(rèn)為Bmi-1是評(píng)估結(jié)腸癌預(yù)后的獨(dú)立因子，本研究隨訪發(fā)現(xiàn)結(jié)腸癌患者Bmi-1蛋白表達(dá)陽(yáng)性者3年生存率與Bim-1蛋白表達(dá)陰性者生存率之間無明顯差異(P>0.05)，不支持上述觀點(diǎn)，由此我們認(rèn)為Bmi-1評(píng)估預(yù)后的價(jià)值尚需進(jìn)一步研究。

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Expression and significance of VEGF and Bmi-1 in colon cancer tissues

LIUZhi,ZHAOChunqing,ZHANGBin,etal.

DepartmentofGeneralSurgery,TheSecondHospitalofBaodingCity,Hebei,Baoding071000,China

ObjectiveTo investigate the expression of VEGF and Bmi-1 in colon cancer tisues and peritumoral normal tissues,and to analyze its correlation with clinicopathological parameters.MethodsSixty patients with colon cancer who were admitted and treated in our hospital from January 2009 to December 2012 were served as observation group, meanwhile,20 cases of peritumoral normal tissues were served as control group.The expression levels of VEGF and Bmi-1 in colon cancer tissues and peritumoral normal tissues were detected by immunohistochemical staining,moreover, the correlation between their expressions and clinicopathological characteristics as well as patient’s prognosis was analyzed.ResultsImmunohistochemistry showed that the expression levels of VEGF, Bmi-1 in observation group were significantly higher than those in control group (P<0.05). The expressions of VEGF, Bmi-1 in observation group were closely correlated to lymphnode metastasis,histodifferentiation degree, TNM staging of colon cancer (P<0.05), however,which were not related with patient’s age and gender,tumor size (P>0.05). The expression of VEGF in colon cancer tissues was positively correlated to that of Bmi-1 in observation group (r=0.667,P<0.05). Moreover, there was a significant difference in 3-year survival rate between patients with VEGF positive expression and patients with VEGF negative expression (P<0.05).ConclusionThe expressions of VEGF and Bmi-1 are closely correlated to the pathogenesis and development of colon cancer,thus, VEGF can be regarded as the index to evaluate the prognosis of colon cancer.

VEGF； Bmi-1；colon cancer；immunohistochemisty

10.3969/j.issn.1002-7386.2016.20.016

071000河北省保定市第二醫(yī)院普外科

R 735.35

A

1002-7386(2016)20-3104-03

2016-04-10)