HPLC法測(cè)定都梁丸中阿魏酸的含量

張艷秋　王　靜　袁子民　張振秋

遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧　大連　116600

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藥物研究

HPLC法測(cè)定都梁丸中阿魏酸的含量

張艷秋王靜袁子民張振秋

遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧大連116600

目的：建立HPLC法測(cè)定都梁丸中阿魏酸的含量。方法：采用Diamonsil C18色譜柱，以甲醇-0.1%磷酸(65∶35)為流動(dòng)相，柱溫35 ℃，測(cè)定波長(zhǎng)321nm。結(jié)果：阿魏酸進(jìn)樣量在0.0144～0.288μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.9997，平均加樣回收率為98.3%，RSD為1.02%。結(jié)論：該法準(zhǔn)確、快速、重復(fù)性好，可用于都梁丸中阿魏酸的含量測(cè)定。

都梁丸；阿魏酸；高效液相色譜法

都梁丸(大蜜丸)由白芷(酒燉)、川芎兩味藥組成，具有祛風(fēng)散寒，活血通絡(luò)的功效，臨床主要用于風(fēng)寒瘀血阻滯脈絡(luò)所致的頭痛，癥見(jiàn)頭脹痛或刺痛、痛有定處、反復(fù)發(fā)作、遇風(fēng)寒誘發(fā)或加重。該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《中國(guó)藥典》2015版一部(HPLC法)[1]。目前，藥典都梁丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)項(xiàng)下及文獻(xiàn)報(bào)道[2]的都梁丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究中均只測(cè)定了白芷中歐前胡素的含量，缺少對(duì)川芎中阿魏酸的質(zhì)量控制。本研究采用高效液相色譜法(HPLC法)，測(cè)定都梁丸中阿魏酸含量，為都梁丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1　儀器與材料

1.1儀器 Agilent1100高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫公司)。

1.2材料阿魏酸對(duì)照品(批號(hào)：0738-200108中國(guó)食品藥品檢定研究院)；甲醇為色譜純，水為娃哈哈純凈水；都梁丸(大蜜丸，市售)。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱：Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸(65∶35)；柱溫：35℃，檢測(cè)波長(zhǎng)：321nm，流速：1.0mL/min。

2.2對(duì)照品溶液的制備取阿魏酸對(duì)照品適量，精密稱定，置棕色容量瓶中，加70%甲醇制成每1mL含0.0144mg的對(duì)照品溶液備用。

2.3供試品溶液的制備取重量差異項(xiàng)下的本品，剪碎，混勻，取約3g，精密稱定，精密加入等量的硅藻土，研勻，取約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70 %甲醇25mL，密塞，稱定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，以70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液，濾過(guò)，取續(xù)濾液過(guò)0.45μm微孔濾膜后置棕色量瓶中，即得。

2.4專屬性試驗(yàn)按處方量取白芷細(xì)粉，按都梁丸制法制備陰性樣品，再按“2.3”供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液，分別精密吸取供試品溶液、陰性對(duì)照液及對(duì)照品溶液各10μL，按“2.1”色譜條件依法測(cè)定，結(jié)果陰性對(duì)照溶液在阿魏酸相同保留時(shí)間處無(wú)色譜峰干擾，HPLC色譜圖見(jiàn)圖1。

2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線制備分別精密吸取“2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液1.0、5.0、10.0、15.0、20.0μL，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件依法測(cè)定，記錄各色譜峰峰面積，以阿魏酸色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)，阿魏酸對(duì)照品的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=4710X-0.284，r=0.9997。表明進(jìn)樣量在0.0144～0.288μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取同一供試品溶液(批號(hào)20150910)，分別在0、2、4、6、8、10 h進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜峰面積，結(jié)果供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD為1.93%。

2.7重復(fù)性試驗(yàn)取同一批次供試樣品(批號(hào)20150910)，按“2.3”供試品溶液制備方法，同法制備6份供試品溶液，分別精密吸取各供試品溶液10 μL依法測(cè)定，記錄各色譜峰峰面積，并按外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算含量。結(jié)果平均含量為0.177mg/g，RSD為1.73%。

2.8精密度試驗(yàn)精密吸取同一供試品溶液(批號(hào)20150910)10μL，分別連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖及各色譜峰峰面積，結(jié)果表明該法精密度良好，RSD為1.86%。

2.9回收率試驗(yàn)取已知含量重量差異項(xiàng)下的本品(0.177mg/g，批號(hào)20150910)，剪碎，混勻，取約3g，共取6份，分別精密稱定，各精密加入等量的硅藻土，研勻，取約1g，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，各精密加入阿魏酸對(duì)照品溶液(0.085mg/mL)1.0mL，再分別精密加入70%甲醇24mL，其余按“2.3”供試品溶液制備方法制備供試品溶液，并依法測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1，表明回收率符合相關(guān)規(guī)定。

表1　回收率試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

2.10含量測(cè)定取20150910、20150915、20150923批樣品，分別按“2.3”供試品溶液的制備方法制備，按“2.1”色譜條件依法測(cè)定，按外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算含量，結(jié)果阿魏酸的含量分別為0.177mg/g、0.168mg/g、0.186mg/g(n=3)。

3　討論

3.1本品川芎采用原粉入藥，實(shí)驗(yàn)中參考藥典川芎中阿魏酸的含量測(cè)定方法[3]，對(duì)供試品溶液的制備方法中所用溶劑(甲醇、70%甲醇)、提取時(shí)間(20min、30min、40min)、提取方法(回流、超聲)進(jìn)行了考察，結(jié)果回流法優(yōu)于超聲法，提取30min基本提取完全[4]。本品由于含有大量蜂蜜，實(shí)驗(yàn)中加入了硅藻土，主要目的為降低黏性，易于溶劑浸潤(rùn)、滲透提取。

3.2文獻(xiàn)對(duì)都梁滴丸(白芷、川芎提取后入藥)采用HPLC同時(shí)測(cè)定了阿魏酸、5-甲氧基補(bǔ)骨脂素、歐前胡素的含量[5]，后續(xù)研究中對(duì)于都梁丸也可以嘗試同時(shí)測(cè)定阿魏酸、歐前胡素、異歐前胡素、氧化前胡素等多種成分，以進(jìn)一步提高本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015:1325.

[2]曹紅，邢俊波，陳玉敏，等.都梁丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào) 2012，28(5)：417-419．

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015:41.

[4]RP-HPLC法測(cè)定天麻頭痛片中阿魏酸含量[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)刊，2011，13(2)：330-331．

[5]席海為，馬強(qiáng)，李強(qiáng)，等.HPLC法同時(shí)測(cè)定都梁滴丸中阿魏酸、5-甲氧基補(bǔ)骨脂素、歐前胡素[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17(16)：81-85.

(編輯：熊金富)

Determination of Ferullic Acid in Duliang Pills by HPLC

ZHANG YanqiuWANG JingYUAN ZiminZHANG Zhenqiu

Liaoning university of TCM, Dalian 116600,China

Objective To establish HPLC for determining the content of ferullic acid in Duliang Pills.Method An HPLC method was developed.The chromatographic conditions were as follow: Diamonsil C18 column and methanol-0.1% phosphoric acid (65∶35) as mobile phase, The column temperature was 25℃，detection wavelength at 321nm.Result The recovery range of ferullic acid was 0.0144～0.288μg,r=0.9997.The average recovery rate was 98.3% andRSDwas 1.02%.Conclusion The method is simple and accurate,with good repeatability,and can be used for determination of ferullic acid in Duliang Pills.

Duliang Pills; Ferullic acid; HPLC

2016-05-25

張艷秋，女，研究生在讀，研究方向?yàn)橹兴庂|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。E-mail:syzhangyanqiu @126.com

袁子民，男，副教授，研究方向?yàn)樗幬镏苿┘百|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。E-mail:yuanzmin@163.com

R286.0

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1007-8517(2016)15-0015-02