兩種嚙齒動(dòng)物膠質(zhì)瘤模型的構(gòu)建和比較

戴　玥， 陳家歡， 邵向前， 陳　晶

(杭州師范大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院,浙江 杭州310036)

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兩種嚙齒動(dòng)物膠質(zhì)瘤模型的構(gòu)建和比較

戴玥， 陳家歡， 邵向前， 陳晶

(杭州師范大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院,浙江 杭州310036)

為了開發(fā)用于研究腦膠質(zhì)瘤診療新方法的工具,構(gòu)建和比較了兩種側(cè)腦室膠質(zhì)瘤模型:C6-SD大鼠模型和U87MG-裸鼠模型.研究發(fā)現(xiàn)兩種模型成瘤率都高達(dá)100%,其中C6-SD大鼠模型成瘤不穩(wěn)定,表現(xiàn)為:腫瘤轉(zhuǎn)移有個(gè)體差異性;在無(wú)治療干預(yù)的情況下,短時(shí)期內(nèi)大鼠體內(nèi)腫瘤被清除.相對(duì)而言,U87MG-裸鼠模型成瘤特征穩(wěn)定,表現(xiàn)為:瘤團(tuán)大小均一,成瘤時(shí)間個(gè)體差異小,無(wú)腫瘤轉(zhuǎn)移和腫瘤清除等情況.因此U87MG-裸鼠模型是適用于開發(fā)腦膠質(zhì)瘤新療法的工具.

膠質(zhì)瘤模型;C6;SD大鼠;U87MG;裸鼠

膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見而又最難治的惡性腫瘤,約占顱內(nèi)腫瘤的40%～50%,為了研究膠質(zhì)瘤的生物學(xué)特征和開發(fā)抗膠質(zhì)瘤的新療法,需要?jiǎng)?chuàng)建穩(wěn)定的體內(nèi)膠質(zhì)瘤模型作為研發(fā)工具[1].當(dāng)前的腦腫瘤模型大體分為三類,根據(jù)獲得腫瘤的來源可分為誘發(fā)性腦膠質(zhì)瘤模型、移植腦膠質(zhì)瘤模型和轉(zhuǎn)基因型腦膠質(zhì)瘤模型[1-2]:誘發(fā)性腦膠質(zhì)瘤模型的遺傳機(jī)制不清楚,成瘤率、成瘤周期和生物學(xué)特征不穩(wěn)定,決定該模型的應(yīng)用存在著一定的局限性;轉(zhuǎn)基因型腦膠質(zhì)瘤模型具有誘發(fā)率低、操作復(fù)雜、模型構(gòu)建周期長(zhǎng)、成本高等缺陷,也限制了其應(yīng)用;相對(duì)前兩種模型,移植腦膠質(zhì)瘤模型具有較穩(wěn)定的成瘤概率和生物學(xué)特性,且操作較簡(jiǎn)單,構(gòu)建周期較短等優(yōu)勢(shì),因此構(gòu)建穩(wěn)定的腦移植瘤模型將有助于腦瘤研究和抗腦瘤藥物開發(fā).

腦內(nèi)移植瘤模型分兩種:一種是腦瘤細(xì)胞移植到同源的動(dòng)物腦內(nèi)[3],形成腫瘤模型,理論上實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的免疫系統(tǒng)對(duì)同源性高的腫瘤細(xì)胞排斥作用較弱,所以該模型可能成瘤率較高、周期較短以及生物學(xué)特征較穩(wěn)定,甚至可能有腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的可能,利用該模型可以研究免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤發(fā)生和發(fā)展的作用,而用該模型開發(fā)腫瘤藥物便于研究藥物對(duì)免疫功能正常動(dòng)物的副作用;另一種腦移植瘤模型是人源腦瘤細(xì)胞移植到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦內(nèi),由于免疫系統(tǒng)對(duì)異源細(xì)胞的排斥作用,為了構(gòu)建穩(wěn)定和高效的模型,需要選用具免疫缺陷的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物作為腦瘤受體[4],比如裸鼠和SCID小鼠等[5],利用該模型能更準(zhǔn)確模擬人源腫瘤在體內(nèi)的發(fā)生和發(fā)展過程,以及反映抗腫瘤藥物在體內(nèi)抑制人源腫瘤的效果.本課題構(gòu)建了兩種嚙齒類動(dòng)物的腦內(nèi)移植膠質(zhì)瘤模型,一種是大鼠來源膠質(zhì)瘤細(xì)胞——C6細(xì)胞移植到SD大鼠腦內(nèi)的模型,另一種是人源膠質(zhì)瘤細(xì)胞——U87MG細(xì)胞系移植到裸鼠腦內(nèi)的模型,研究和對(duì)比了兩種模型的成瘤率、成瘤周期和模型的穩(wěn)定性等特征,確定了它們的應(yīng)用價(jià)值.

1　材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雄性SD大鼠,年齡6-8周,體重約為200 g,購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司;雄性裸鼠,年齡6-8周,購(gòu)自浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院.兩種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均由杭州師范大學(xué)動(dòng)物中心飼養(yǎng).

1.2細(xì)胞系

大鼠來源的膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞和人源膠質(zhì)瘤U87MG細(xì)胞均購(gòu)于中科院上海細(xì)胞庫(kù),由浙江理工大學(xué)生科院李恭楚課題組用含有Luciferase基因的慢病毒感染細(xì)胞,構(gòu)建了轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系——C6-Luc和U87MG-Luc,再由本實(shí)驗(yàn)室傳代和冷凍保存,用于腦瘤模型的構(gòu)建.

C6-Luc和U87MG-Luc細(xì)胞的培養(yǎng)液均為DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液(購(gòu)自Gibco公司),添加體積比為10%的胎牛血清(購(gòu)自四季青公司)、2 mmol/ml谷氨酸(購(gòu)自Invitrogen公司)、100U/ml青霉素和鏈霉素(購(gòu)自吉諾公司),細(xì)胞在37 ℃、5%CO2及飽和濕度的恒溫箱中培養(yǎng),細(xì)胞傳代時(shí)用0.25%胰酶(購(gòu)自Gibco公司)消化,細(xì)胞凍存液為體積比為9:1的胎牛血清和DMSO(購(gòu)自Sigma公司).

1.3腦內(nèi)移植腫瘤細(xì)胞

1.3.1C6細(xì)胞植入大鼠側(cè)腦室

腹腔注射用無(wú)菌的磷酸緩沖液(無(wú)Mg2+、Ca2+)(購(gòu)自吉諾公司)溶解的水合氯醛(質(zhì)量體積比為10%)麻醉大鼠,注射量為3 ml水合氯醛/kg大鼠,麻醉后將大鼠頭部固定于固定架,手術(shù)暴露顱骨標(biāo)志,按坐標(biāo)(前囟后1 mm,矢狀縫右1.5 mm,硬腦膜下4.5 mm)用微型鉆鉆孔后注射細(xì)胞,按每只鼠1×106細(xì)胞懸液(C6大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系)15 μl于30 min內(nèi)注入靶區(qū), 注射完成后留針5 min使細(xì)胞充分沉積后再緩慢拔針,防止細(xì)胞懸液隨針返流,針取出后將手術(shù)部位擦拭干凈并縫合頭皮,之后將大鼠放至小電熱毯上使其身體回暖,同時(shí)觀察其心跳以確認(rèn)存活,待大鼠麻醉消除后將其放回鼠籠,常規(guī)飼養(yǎng).

1.3.2U87MG細(xì)胞植入裸鼠側(cè)腦室

腹腔注射用無(wú)菌的磷酸緩沖液(無(wú)Mg2+、Ca2+)溶解的戊巴比妥鈉(質(zhì)量體積比為1%)(購(gòu)自Sigma公司),0.2μm濾膜過濾除菌后,麻醉裸鼠,注射量為0.25-0.30μl,麻醉后固定頭部,切開頭皮,暴露顱骨,在坐標(biāo)(前囟0 mm,矢狀縫右0.7 mm,硬腦膜下2.5 mm)用微型鉆鉆孔后注射細(xì)胞,按每只鼠1×106細(xì)胞懸液(U87MG人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系)8-12μl于60 min內(nèi)注入靶區(qū), 注射完成后留針10 min使細(xì)胞充分沉積后再緩慢拔針,防止細(xì)胞懸液隨針返流,針取出后將手術(shù)部位擦拭干凈并縫合頭皮,之后將裸鼠放至電熱毯上蘇醒,待裸鼠麻醉消除后將其放回鼠籠,常規(guī)飼養(yǎng).腦部手術(shù)所用儀器均購(gòu)自瑞沃德生命科技有限公司.

1.4腫瘤活體成像

用無(wú)菌的磷酸緩沖液(無(wú)Mg2+、Ca2+)配制D-熒光素鉀鹽(購(gòu)自Thermo Fisher Scientific公司)工作液(15 mg/mL),0.2μm濾膜過濾除菌,按10 μl/g體重的濃度向每只鼠注射相應(yīng)量的15 mg/mL熒光素溶液,腹腔注射10-15 min后用活體成像儀(購(gòu)自Caliper Life Sciences公司)掃描動(dòng)物全身,用相應(yīng)軟件(購(gòu)自Caliper Life Sciences公司)進(jìn)行成像分析,腫瘤大小以成像儀掃描每秒得到總光子數(shù)表示,單位是光子/s,腦內(nèi)移植腫瘤細(xì)胞后,每隔5-7 d對(duì)動(dòng)物進(jìn)行成像分析一次.

1.5蘇木精-伊紅染色

麻醉動(dòng)物后斷頸處死,從顱骨中剝離腦,將腦浸入用磷酸緩沖液配置濃度為4%的多聚甲醛溶液中進(jìn)行固定,12-24 h后,從多聚甲醛溶液中取出腦,將其浸入添加0.5% proclin(購(gòu)自Sigma公司)的磷酸緩沖液中,在4 ℃保藏.染色前,從PB溶液中取出腦,用吸水紙吸去表面水分,之后用低熔點(diǎn)瓊脂糖(購(gòu)自TaKaRa Biotechnology公司)包埋左半腦,用振動(dòng)切片機(jī)(購(gòu)自Leica公司)切片,切片厚度為50μm,隨后進(jìn)行木精-伊紅染色,染色步驟是:將切片置于蘇木精溶液(購(gòu)自南京建成科技有限公司)中約1 min,后水漂洗1-2次,再置于伊紅溶液(購(gòu)自南京建成科技有限公司)約10-15 min,用水漂洗干凈切片上游離的染色劑后貼于載玻片上.待切片自然風(fēng)干后用適量中性樹脂(購(gòu)自Sigma公司)將切片用蓋玻片反壓封片,樹脂凝固后用倒置顯微鏡(購(gòu)自ZEISS公司)觀察拍照.

2　結(jié)　果

2.1C6-SD大鼠膠質(zhì)瘤模型不穩(wěn)定

C6細(xì)胞是大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞,源于遠(yuǎn)交系Wistar大鼠[6-7],C6-Wistar大鼠模型動(dòng)物腦瘤模型常用于開發(fā)腦瘤新療法,例如化學(xué)治療[8]、抗血管治療[9]、放射治療[10]和基因治療[11]等,但是現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)用的Wistar大鼠是近交系,與C6細(xì)胞的同源性低,導(dǎo)致C6細(xì)胞在Wistar大鼠體內(nèi)有一定免疫源性,植入細(xì)胞數(shù)量在104～107內(nèi),Wistar大鼠腦內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)速率不會(huì)隨植入細(xì)胞數(shù)量變化,并且大鼠存活率100%,因此該模型用于研究腦瘤的免疫治療具有局限性[12].SD大鼠是用Wistar大鼠與其它雜種鼠交配培育而成的白化鼠,與C6細(xì)胞有一定程度的同源關(guān)系,C6-SD大鼠模型在移植瘤研究中的應(yīng)用較少,本研究中我們嘗試構(gòu)建該模型,觀察其穩(wěn)定性,探討其應(yīng)用價(jià)值.

A. 活體成像檢測(cè)移植C6細(xì)胞后大鼠荷瘤情況; B. 統(tǒng)計(jì)不同時(shí)間大鼠荷瘤體積變化; C. 蘇木精-伊紅染色檢測(cè)腦內(nèi)腫瘤發(fā)生部位,白色比例尺代表200 μm; D. 腫瘤轉(zhuǎn)移大鼠腦瘤在7d內(nèi)被清除.圖1　C6-SD大鼠腦膠質(zhì)瘤模型特征Fig. 1　Characteristics of C6-SD rat brain glioma model

移植106個(gè)C6細(xì)胞在SD大鼠腦室內(nèi),活體成像儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)其成瘤特征如下:植入細(xì)胞10 d后原位形成腫瘤,腦瘤形成率100%,15 d后腫瘤體積開始縮小,第22 d所有移植了C6細(xì)胞并產(chǎn)生腫瘤的SD大鼠體內(nèi)瘤團(tuán)均消失(圖1A和1B),說明雖然C6細(xì)胞在SD大鼠腦內(nèi)能成瘤,但是C6激活SD大鼠體內(nèi)的免疫反應(yīng)足夠清除已形成的瘤團(tuán).將成瘤大鼠解剖取腦,腦切片經(jīng)蘇木精-伊紅染色,結(jié)果顯示腫瘤細(xì)胞核較正常細(xì)胞大,瘤團(tuán)填充了側(cè)腦室,并遷移到腦室背側(cè)的大腦皮層,形成腫瘤灶,正常的大腦皮層中細(xì)胞排列有序,而有瘤團(tuán)的皮層中細(xì)胞排列紊亂(圖1C),結(jié)果顯示腦瘤破壞了大腦結(jié)構(gòu).腦室移植腫瘤細(xì)胞的SD大鼠中,有1例移植后第15 d,腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移,在第22 d,腫瘤消失(圖1D),暗示C6細(xì)胞在SD大鼠側(cè)腦室中可能隨著腦脊液循環(huán)遷移,從而形成轉(zhuǎn)移病灶,但是SD大鼠的免疫排異能夠?qū)⑥D(zhuǎn)移的腫瘤病灶清除.C6-SD大鼠模型的存活率是100%,與C6-Wistar大鼠模型一致[12].綜上所述,C6-SD大鼠模型移植腫瘤形成的時(shí)間和大小較穩(wěn)定,腫瘤轉(zhuǎn)移情況不穩(wěn)定,形成的移植瘤在SD大鼠體內(nèi)被其免疫機(jī)能清除,瘤團(tuán)維持時(shí)間短,不是開發(fā)腦瘤新療法的合適模型.

2.2U87MG-裸鼠模型是穩(wěn)定的腦膠質(zhì)瘤模型

U87MG是人源膠質(zhì)瘤細(xì)胞,是腦瘤研究的重要模式細(xì)胞,為了防止動(dòng)物對(duì)人源細(xì)胞的免疫排異而引起成瘤不穩(wěn)定,用U87MG構(gòu)建體內(nèi)腫瘤模型需要免疫缺陷動(dòng)物.裸鼠是先天性胸腺缺陷小鼠,其體內(nèi)T淋巴細(xì)胞發(fā)育障礙,導(dǎo)致免疫機(jī)能嚴(yán)重缺損,是人源腫瘤細(xì)胞合適的移植受體.本研究將106個(gè)U87MG細(xì)胞植入裸鼠側(cè)腦室,觀察U87MG在裸鼠腦內(nèi)能否形成穩(wěn)定的膠質(zhì)瘤模型,探討該模型是否適用于腦瘤生物學(xué)研究和新療法的開發(fā).

A. 活體成像檢測(cè)移植U87MG細(xì)胞后裸鼠荷瘤情況; B. 不同時(shí)間裸鼠荷瘤體積變化; C. 蘇木精-伊紅染色檢測(cè)腦內(nèi)腫瘤發(fā)生部位,白色比例尺代表200 μm,黑色比例尺代表5 mm.圖2　U87MG-裸鼠腦膠質(zhì)瘤模型特征Fig. 2　Characteristics of U87MG-nude mouse brain glioma model

裸鼠側(cè)腦室內(nèi)植入U(xiǎn)87MG細(xì)胞后,經(jīng)活體成像儀追蹤發(fā)現(xiàn)以下成瘤特征:U87MG植入裸鼠側(cè)腦室第10 d內(nèi),腦內(nèi)開始出現(xiàn)瘤團(tuán),成瘤率達(dá)到100%,之后瘤團(tuán)體積逐步增長(zhǎng),第30 d起荷瘤裸鼠開始死亡,并于7 d內(nèi)全部死亡(圖2A和2B).解剖荷瘤裸鼠,其腦切片經(jīng)蘇木精-伊紅染色,結(jié)果表明裸鼠的側(cè)腦室被腫瘤細(xì)胞填滿,瘤團(tuán)擴(kuò)張到了大腦皮層(圖2C),提示裸鼠死亡的原因可能是瘤團(tuán)過大引起的腦內(nèi)壓升高.研究結(jié)果表明:裸鼠從形成腫瘤到死亡的過程中,腫瘤形成和增長(zhǎng)速率均一,個(gè)體差異較小,除了腫瘤植入位置,裸鼠身體其它部位沒有出現(xiàn)轉(zhuǎn)移病灶,U87MG-裸鼠模型是高效和穩(wěn)定的腦瘤模型,是理想的研究腦瘤生物學(xué)特征及開發(fā)腦瘤新療法的工具.

3　討　論

原位移植膠質(zhì)瘤模型是將膠質(zhì)瘤細(xì)胞植入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦內(nèi)形成腦瘤的實(shí)驗(yàn)樣本,是研究腦瘤生物學(xué)特征和開發(fā)腫瘤新療法及診斷方法的重要工具,理想的腦膠質(zhì)瘤模型構(gòu)建簡(jiǎn)單,具有穩(wěn)定的成瘤特征.以往研究中將膠質(zhì)瘤細(xì)胞注入動(dòng)物大腦前額皮層,該模型形成瘤團(tuán)結(jié)構(gòu)規(guī)則,利于解剖后觀察和比較[13-14],但是前額皮層是實(shí)體組織,移植腫瘤細(xì)胞的操作過程中,為了防止因?yàn)閴毫^大破壞皮層,壓力過小針頭堵塞無(wú)法注入細(xì)胞,以及細(xì)胞注入皮層后空間太小從皮層溢出等情況,操作過程比較復(fù)雜且耗時(shí)長(zhǎng),并且操作誤差大,導(dǎo)致小鼠成瘤個(gè)體間差異大.本課題為了提高腦瘤模型構(gòu)建的效率和減少操作誤差,將膠質(zhì)細(xì)胞定位植入非實(shí)體的側(cè)腦室中,但是在側(cè)腦室中腫瘤形成的瘤團(tuán)形狀不規(guī)則,且可能隨腦脊液循環(huán)發(fā)生轉(zhuǎn)移.活體成像技術(shù)的推廣使用,使體內(nèi)成瘤檢測(cè)非常便利,即使瘤團(tuán)形狀不規(guī)則,也能夠在不傷害動(dòng)物生命的情況下,判斷和比較不同個(gè)體的瘤團(tuán)大小和腫瘤轉(zhuǎn)移情況,幫助精確檢測(cè)腦室成瘤的特征.

本課題構(gòu)建和比較了兩種側(cè)腦室移植腦瘤模型,一種是存在一定同源關(guān)系的膠質(zhì)瘤細(xì)胞C6移植到SD大鼠腦部,另一種是人源膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87MG移植到免疫缺陷的裸鼠腦部.從構(gòu)建的操作比較,SD大鼠頭部較大,腦定位手術(shù)較精準(zhǔn),其耐受的腦內(nèi)壓范圍較大,決定了腦注射速度和流量的可變范圍也較大,因此C6-SD大鼠模型的操作較U87MG-裸鼠模型簡(jiǎn)單,實(shí)驗(yàn)效率較高.從兩種模型的特征比較,它們的應(yīng)用范疇存在差異.

C6-SD大鼠模型中SD大鼠是免疫能力正常的動(dòng)物,該模型利用的細(xì)胞和動(dòng)物具有低程度的同源性,然而與Wistar大鼠類似[12],SD大鼠對(duì)C6細(xì)胞存在免疫排斥,雖然植入腫瘤細(xì)胞后成瘤時(shí)間穩(wěn)定,成瘤率為100%,但是SD大鼠荷瘤時(shí)間短,消除腫瘤的概率和存活率高達(dá)100%,大鼠腦內(nèi)形成的瘤團(tuán)在沒有藥物干預(yù)的情況下被清除,如果該模型用于藥物開發(fā),很難區(qū)分清楚瘤團(tuán)縮小和消除的原因是SD大鼠的免疫機(jī)能還是藥效;另外荷瘤SD大鼠的腫瘤轉(zhuǎn)移情況有明顯的個(gè)體差異,決定了該模型不可用于抗腫瘤轉(zhuǎn)移藥物的開發(fā).由于形成和消除腫瘤的規(guī)律較穩(wěn)定,因此該模型適用于腫瘤診斷方法的開發(fā),以及可能適用于體內(nèi)腫瘤細(xì)胞具有免疫源性機(jī)制的研究.

U87MG-裸鼠模型中U87MG是人源膠質(zhì)瘤細(xì)胞,鑒于腫瘤診療方法的受益對(duì)象是人類患者,U87MG比大鼠來源的C6細(xì)胞更能精準(zhǔn)的反映新診療方法的效果,為了防止實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)人源細(xì)胞的免疫排異,我們選擇免疫缺陷的裸鼠作為荷瘤動(dòng)物.實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明U87MG-裸鼠模型成瘤時(shí)間穩(wěn)定,瘤團(tuán)大小均一,瘤團(tuán)增長(zhǎng)速度和裸鼠死亡時(shí)間個(gè)體差異小,是理想的腫瘤診療新方法開發(fā)的模型.該模型沒有腫瘤轉(zhuǎn)移發(fā)生,因此不適用于研究腫瘤轉(zhuǎn)移特征和開發(fā)抗轉(zhuǎn)移藥物.由于裸鼠胸腺缺失導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞發(fā)育障礙,因此該模型可用于研究促進(jìn)T淋巴細(xì)胞成熟的藥物在腫瘤免疫治療的潛能.

總之,與C6-SD大鼠模型比較,U87MG-裸鼠模型成瘤率高,瘤團(tuán)體積、荷瘤時(shí)間和腫瘤轉(zhuǎn)移等特征的個(gè)體差異小,是比較穩(wěn)定的腦膠質(zhì)瘤模型.

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Construction and Comparison of Two Rodent Glial Tumor Models

DAI Yue, CHEN Jiahuan, SHAO Xiangqian, CHEN Jing

(College of Life and Environmental Sciences, Hangzhou Normal University, Hangzhou 310036, China)

To develop the tool for studying new diagnosis and therapy of brain glial tumor, this paper constructed and compared two models of lateral ventricular glial tumor, that was C6-SD rat model and U87MG-nude mouse model. The results demonstrated that the tumor formation rates of both models were 100%. Nevertheless, C6-SD rat model was an unstable glial tumor model in two aspects. Firstly, there was individual difference in tumor metastasis. Secondly, all tumors were erased without any therapy. Comparing to C6-SD rat model, U87MG-nude mouse model increased stability for little individual difference in the volume of tumor and the time of tumor formation, no tumor metastasis or tumor disappearance without therapy. Therefore, U87MG-nude mouse model was a proper tool for developing new therapy of glial tumors in brains.

glial tumor model; C6; SD rat; U87MG; nude mouse

2015-11-10

浙江省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(LQ14C090003)；浙江省大學(xué)生科技創(chuàng)新活動(dòng)暨新苗人才計(jì)劃項(xiàng)目(2014R421024).

陳晶(1982—)，女，講師，博士，主要從事腫瘤生物學(xué)研究.E-mail:chenjing@hznu.cn

10.3969/j.issn.1674-232X.2016.05.006

R73-35

A

1674-232X(2016)05-0479-05